柴胡愈伤组织提取物抗肝癌作用的基因表达研究

目的:对柴胡的愈伤组织中有效成分进行检测,研究柴胡愈伤组织提取物促进肝癌细胞凋亡相关基因的差异表达情况。方法:对柴胡愈伤组织提取物(BSW-ws)进行高效液相检测,分析其有效成分;再使用柴胡愈伤组织提取物对肝癌细胞SMMC-7221给药,经Realtime-PCR实验检测凋亡相关基因的表达情况。结果:(1)分析高效液相检测结果可确定柴胡愈伤组织提取物中含有有效成分柴胡皂苷d;(2)Realtime-PCR试验结果表明与内参基因β-actin相比:Bcl-2表达量下调,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bcl-2比率上调,Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9表达均上调。结论:柴胡愈伤组织提取物BSW-ws中含有有效成分为柴胡皂苷d,并且柴胡愈伤组织提取物BSW-ws促进了凋亡相关基因的表达,进而促进肝癌细胞SMMC-7221的凋亡。     

蓖麻愈伤组织对铜的抗性研究

为了探讨蓖麻愈伤组织对铜的抗性．研究了铜胁迫下蓖麻愈伤组织的增长及其铜吸收作用。结果显示,铜浓度为60mg·L^-1时,愈伤组织的增长受到抑制,抗性指数仅为33．87％;铜浓度为40mg·L^-1时,愈伤组织呈淡黄色,生长较快,抗性指数达到61．29％,并且这种抗性可以保持至连续继代培养6周之后。培养至第4周,铜浓度（mg·L^-1）为10、20、30、40各处理的抗性指数都高于第3周．各处理愈伤组织铜含量（mg·g^-1）依次为0．33、0．54、1．16、1．40。培养基铜浓度为40mg·L^-1。可作为筛选铜抗性蓖麻愈伤组织的临界值。     

女贞子胚培养及愈伤组织诱导

采用不同培养基对女贞子的胚进行培养,并对其幼苗的叶片和嫩茎进行愈伤组织诱导.结果表明,在胚的萌发诱导中,以MS+1.00 mg·L-1 6-BA培养时,女贞子幼苗的叶长和根长最长;以MS+1.50 mg·L-1 6-BA培养时,女贞子幼苗的茎高最高;MS+1.50 mg·L-1 6-BA+0.30 mg·L-1 2,4...     

苦参愈伤组织诱导及其杀虫抑菌生物活性测定

通过以苦参越冬芽、茎、子叶和幼叶为外植体诱导愈伤组织,四者在合适的培养基上均能诱导出愈伤组织,幼叶和子叶易于诱导愈伤组织。苦参叶和子叶诱导的愈伤组织处理淡色库蚊的死亡率为100％,处理桃蚜的死亡率分别为81．01％和85．42％,高于其他愈伤组织的活性;各愈伤组织处理朱砂叶螨的死亡率均达到了95％以上,与种子提取物的活性没有显著差异。只有子叶诱导的愈伤组织对油菜菌核病菌表现出了抑制作用,各愈伤组织对小麦赤霉病菌和黄瓜灰霉病菌均未表现出明显的活性,显著低于苦参种子提取物的活性。     

肉苁蓉愈伤组织的超低温保藏方法

提出了一个优化的简单的超低温保藏方法,成功地运用于肉苁蓉愈伤组织的低温保藏. 为了获得最佳的实验结果,肉苁蓉愈伤组织首先在添加了6%二甲亚砜的B5培养基中进行预培养,然后用玻璃化保护剂在25℃处理20 min,最后投入液氮中进行冷冻. 玻璃化保护剂的成分为30%(j)甘油+15%(j)乙二醇+10%(j)二甲亚砜+0.5 mol/L蔗糖. 冷冻后的愈伤组织在30℃的水浴中迅速解冻,接着用25℃的1.0 mol/L蔗糖溶液洗净愈伤组织上附着的玻璃化保护剂,最后在B5培养基上对愈伤组织进行恢复性培养. 经过上述冻存处理的肉苁蓉愈伤组织存活率可达86％. 恢复培养5个月后,愈伤组织中苯乙醇糖甙类化合物的含量和产量分别达到冷冻前的97%和95%.     

仙客来愈伤组织诱导和不定芽形成

以仙客来品种“国旗红”成株的叶片和叶柄为外植体,分别接种到MS培养基(Murash ige&skoog)+6苄基嘌呤(BA)2.0(mg/L,下同)+萘乙酸(NAA)0.5和1/2MS+BA 2.0+激动素(KT)0.25+2,4二氯苯氧乙酸(2,4 D)0.5两种培养基,研究外植体类型、培养基、切割方式和摆放方法对愈伤组织诱导和不定芽形成的影响。结果表明,叶片是诱导愈伤组织和形成不定芽的理想外植体;将带主脉的叶片,以反面向上的方法接种到1/2MS+BA 2.0+KT 0.25+2,4 D 0.5中诱导效果最佳,愈伤组织诱导率达100%,不定芽形成率和平均个数分别为66.67%和4.0。此外,对不定芽的继代培养进行研究,结果表明,不定芽可继代增殖。     

水母雪莲愈伤组织超低温保存条件的初探

初步研究了水母雪莲愈伤组织的超低温保存方法. 结果表明，预培养、保护剂、预处理、冰冻后处理对愈伤组织存活率都有一定影响. 水母雪莲愈伤组织预培养基为添加5%二甲基亚砜的MS培养基，优化的冰冻保护剂是15%二甲基亚砜+15%乙二醇+30%甘油的0.4 mol/L蔗糖液，冰冻保护剂的预处理温度是15℃，时间为10 min，解冻温度25~35℃；在25℃水浴中用含1.2 mol/L蔗糖的MS溶液反复洗3次，每次10 min. 用TTC法测定细胞存活率可达58.5%.     

NAA与BA对康乃馨愈伤组织诱导的影响

文章主要研究了NAA与BA对康乃馨愈伤组织诱导的影响,结果表明：单独使用NAA或BA时,能够诱导出愈伤组织;NAA浓度为0．2mg/L,BA浓度为2mg／L时,产生愈伤组织比例最高,生长状态最好。     

藏红花愈伤组织诱导和褐化抑制

对藏红花的球茎、无菌芽和幼叶的愈伤组织诱导条件进行研究,同时探讨愈伤组织诱导过程中的褐化和污染问题．结果表明：与球茎相比,以无菌芽和幼叶为外植体,愈伤组织诱导率较高,诱导时间较短,但形成的愈伤组织易褐化．较大球茎（≥20g）也是藏红花愈伤组织诱导较好的外植体,愈伤组织诱导速度随球茎储藏时间的增加而升高．含有2．0mg／L2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和O．5mg／L6-苄氨基嘌呤（6-BA）的MS（Murashige and Skoog）培养基有利于球茎愈伤组织的诱导,30d愈伤组织诱导率可达70％以上．在愈伤组织诱导过程中,连续转接外植体至新鲜培养基可以有效降低褐化率,而在培养基中添加活性炭（AC）和聚乙烯吡咯烷酮（PVP）不能有效抑制褐化．表面灭菌前采用流水冲洗过夜可有效减少球茎表面附生菌,明显降低污染率．     

长春花愈伤组织诱导及长春质碱的提取研究

用长春花叶片为外植体诱导愈伤组织,培养基及激素的选择分为以下四组:1. 0 mg/L 6-BA+1. 0 mg/L NAA;1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L 2,4-D; 2. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L NAA+0. 5 mg/L 2,4-D; 0. 5 mg/L KT+1. 0 mg/L 2,4-D1。在四组培养基中筛选得到最优培养基为1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L 2,4-D。同时以长春花为材料,通过超声波提取法进行长春质碱的提取,同时进行HPLC测定。筛选得到最优提取条件为:以长春花叶片为提取材料、95%乙醇超声90 min。HPLC测得提取所得长春质碱含量为3. 26 mg/g。     

藏红花胚性愈伤组织的发生及其调控

为提高藏红花胚性愈伤组织的繁殖系数和出芽率,促进其生长和分化,以建立藏红花离体快繁体系,解决藏红花资源短缺问题,研究了藏红花胚性愈伤组织的发生及其调控. 结果表明,获得的藏红花球茎1细胞系具有良好的胚性愈伤组织发生能力. 胚性愈伤组织生长的优化条件为：在添加3.0 mg/L 6-BA, 0.25 mg/L NAA和400 mg/L CH的B5固体培养基上,22℃下全时暗培养25 d,繁殖系数达到9 g/g. 胚性愈伤组织出芽的优化条件为：在添加3.0 mg/L 6-BA, 0.25 mg/L NAA和400 mg/L CH的1/2 B5固体培养基上,在22℃及光照强度31.74 mmol/(m2×s)条件下,每天光照10 h,暗培养14 h,培养45 d出芽率达到44.7%,高于国外报道的20%.     

表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立

目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。     

细梗蔷薇愈伤组织提取物在人真皮成纤维细胞及3D表皮模型上的护肤功效探究

通过植物组织培养技术得到细梗蔷薇（Rosa graciliflora）愈伤组织,利用纯水超声提取和真空冷冻干燥工艺获得细梗蔷薇愈伤组织提取物（RCE）,然后对RCE进行成分检测和体外护肤功效评估。结果表明,RCE含有氨基酸、维生素、有机酸和多酚等多种活性成分。体外护肤检测结果表明,RCE对人真皮成纤维细胞有一定的增殖作用,0.01%和0.05%RCE能促进人真皮成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白,与空白对照对比,其Ⅰ型胶原蛋白分别提高83%和79%,作用效果和阳性对照维生素C相似。此外,在重建的3D表皮模型上,0.01%RCE能够显著促进细胞增殖活性标记物Ki67、皮肤屏障功能标志物丝聚蛋白（Filaggrin）及外膜蛋白（Involucrin）的表达,相比空白对照,其阳性率分别提高308%,853%和349%,具有显著差异性。研究发现RCE具有潜在的延缓皮肤衰老和提高皮肤屏障功能的作用,有望作为一种绿色原料添加在化妆品中使用。     

银杏叶愈伤组织培养及黄酮积累的正交实验优化

采用正交实验研究了基本培养基、NAA浓度、6-BA浓度、植酸(PA)浓度对银杏叶愈伤组织继代培养及黄酮积累的影响,并测定了愈伤组织生长曲线.结果表明,银杏叶愈伤组织继代培养的最佳组合为:基本培养基N6,NAA 1.0 mg·L-1,6-BA 1.0 mg·L-1,0.05% PA.各因素对愈伤组织生长影响的主次顺序为:NAA浓度＞基本培养基＞PA浓度＞6-BA浓度;愈伤组织黄酮积累量最佳组合为:基本培养基B5, NAA 1.0 mg·L-1 , 6-BA 1.0 mg·L-1 , 0.3% PA,各因素对愈伤组织黄酮积累量影响的主次顺序为:PA浓度＞基本培养基＞NAA浓度＞6-BA浓度.愈伤组织生长曲线基本呈"S"型.     

气升式反应器培养高山红景天愈伤组织颗粒的动力学与氧传递特性研究

考察了高山红景天致密愈伤组织颗粒（ＣＣＡ）在５Ｌ气升式反应器中进行悬浮培养的动力学特性,得到了生物量１３．２３ｇ／Ｌ,红景天甙含量０．３５４％;培养液几乎保持纯清,粘度变化很小,反应器内没有出现“发泡”现象。培养系统的传质特性较好,在整个培养过程中,体积氧传递系数ｋＬａ先呈增大趋势,后又降低。实验证明系统固含率的大幅度增加是影响ｋＬａ变化的主要因素     

正交实验及响应面法在银杏愈伤组织黄酮提取条件优化中的比较

以银杏愈伤组织为材料,运用正交实验和响应面法对银杏黄酮的提取条件进行优化,并对二者结果进行比较。正交实验的最佳条件是:提取剂选用50%乙醇,微波辐射60 s,70℃水浴浸提2 h,此条件下的黄酮得率为(24.18±0.20)mg/g。响应面实验结果显示,提取剂为46.39%乙醇,微波辐射62.23 s,70℃水浴浸提2 h,黄酮得率达到(24.55±0.28)mg/g,与预测值24.57 mg/g相符。双样本T检验结果表明,响应面最优条件下的黄酮得率较正交实验高1.7%,但差异不显著。     

正交实验及响应面法在银杏愈伤组织黄酮提取条件优化中的比较

以银杏愈伤组织为材料,运用正交实验和响应面法对银杏黄酮的提取条件进行优化,并对二者结果进行比较。正交实验的最佳条件是:提取剂选用50%乙醇,微波辐射60 s,70℃水浴浸提2 h,此条件下的黄酮得率为(24.18±0.20)mg/g。响应面实验结果显示,提取剂为46.39%乙醇,微波辐射62.23 s,70℃水浴浸提2 h,黄酮得率达到(24.55±0.28)mg/g,与预测值24.57 mg/g相符。双样本T检验结果表明,响应面最优条件下的黄酮得率较正交实验高1.7%,但差异不显著。     

红豆杉植物和愈伤组织培养物中紫杉醇含量的检测

采用UV和HPLC两种方法，对南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)、曼地亚红豆杉(Taxus media cv.Hicksii)天然植物和组织培养物中紫杉醇含量进行了检测。检测结果：南方红豆杉天然植物中未能检测出紫杉醇，南方红豆杉愈伤组织培养物中紫杉醇含量最高，为万分之4．09，是曼地亚红豆杉愈伤组织培养物中的2—27倍，是曼地亚红豆杉天然植物中的6—8倍。     

游离足背复合组织瓣修复手背大面积热压伤创面

目的报道应用游离足背复合组织瓣修复手背部大面积热压伤创面的临床体会。方法应用游离足背复合组织瓣修复手背部大面积热压伤创面9例。结果皮瓣全部成活。经4～28个月随访,伤手外观和感觉恢复良好,运动功能基本正常,足部功能无明显影响。结论应用游离足背复合组织瓣修复手背部大面积热压伤创面,是疗效比较理想的一种方法。     

庆阳市栽培柴胡含量研究

目的：通过高效液相色谱法(HPLC)测定柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的总含量,分析庆阳不同地域、不同生长年限对柴胡质量的影响。方法：收集庆阳市不同地域不同生长年限的栽培柴胡药材20批次,根据《中国药典》2020年版一部中柴胡方法测定柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。结果：庆阳市内不同种植区域,套种品种对柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d总量影响不大,生长年限两年半的柴胡含量明显高于栽培一年半的柴胡。结论：为保证柴胡药材的质量,建议药农把柴胡的栽培年限提高到两年半为宜,同时育种时应避免与其他品种柴胡及野生柴胡发生杂交,引起质量下降。