多指标评价核桃蛋白及多肽的抗氧化活性

多指标评价药食两用核桃蛋白及多肽的抗氧化活性。利用DPPH·﹑O_2~-·﹑总还原能力和·OH 4种常用体外抗氧化活性模型,以谷胱甘肽(GSH)为对照,测定核桃蛋白及多肽抗氧化活性。在实验范围内,核桃蛋白及多肽的抗氧化活性与浓度呈量效关系,且核桃多肽对DPPH·和O_2~-·清除能力显著,抗氧化活性达到GSH的80%以上,对·OH清除能力亦达到GSH的50%以上。核桃蛋白及多肽均具有一定的抗氧化能力,且核桃多肽的抗氧化活性较蛋白更为显著。     

蛋白酶酶解核桃饼粕的抗氧化活性

为研究碱性蛋白酶酶解核桃饼粕制得的酶解液的抗氧化活性,运用碱溶酸沉提取法提取核桃饼粕蛋白,利用碱性蛋白酶酶解制得核桃饼粕酶解液及核桃饼粕分离蛋白酶解液.通过对·OH、O2-、DPPH自由基清除能力及总还原力的测定,对比核桃饼粕与其分离蛋白酶解产物的抗氧化活性.结果 显示,·OH清除率分别为17.32％和18.11％,O...     

低分子量核桃多肽抗氧化及抗肿瘤活性研究

研究了核桃发酵多肽的抗氧化效果及抗肿瘤活性。结果表明,此多肽具有一定的抗氧化及抗肿瘤活性,当样品浓度为2 mg/mL时其DPPH自由基清除率为91.7%,对人小肠癌细胞（Caco-2）的IC50值为3.67 mg/mL。对四组分发酵多肽（分子量>30 ku、10 ku~30 ku、5 ku~10 ku及<5 ku）进行抗肿瘤活性的试验及筛选,发现<5 ku组份有较强的抗肿瘤活性,表明低分子量多肽对Caco-2细胞增殖具有较强的抑制作用（IC50值为2.63 mg/mL）,且该样品不仅抑制Caco-2细胞生长,对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖也有显著的抑制作用（IC50值为3.76mg/mL）,而对非肿瘤细胞大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）未显示显著的抑制作用。以上结果表明,核桃粕发酵产生的小分子活性多肽有明显的抗氧化及抗肿瘤活性。     

核桃多肽的制备及其体外抗氧化性研究

以核桃蛋白为原料,以水解度为指标,通过单因素和正交试验优化了碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的工艺参数。得到碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶添加量5%,底物浓度3%,酶解温度55℃,酶解p H为9.0,酶解时间6 h;在各酶最佳条件下获得的核桃多肽具有一定的抗氧化性。     

核桃蛋白肽的抗氧化活性研究

以VC为对照,研究了分子质量小于3000u的核桃蛋白肽混合物的还原能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力以及二苯代苦味酰基自由基清除能力。结果显示,随着核桃蛋白肽浓度的增加,其还原能力、羟自由基的清除能力和超氧阴离子清除能力增大,在浓度为30mg/mL时,核桃蛋白肽还原能力达到VC的57.1%;在浓度为50mg/mL时,核桃蛋白肽对羟自由基(OH.)的清除率分别69.1%,对超氧阴离子自由基的清除率达到了85%。而对二苯代苦味酰基自由基清除能力则是先增大后变小,在20mg/mL时达到最大值66%。核桃蛋白肽的分子质量分布主要有2大区域,蛋白肽氨基酸含量达到89.74%。     

核桃多肽结构表征及抗氧化活性

以核桃粕为原料,复合酶酶解制备核桃多肽,并通过超滤分离获得不同分子质量的核桃多肽,进行结构表征和实验分析,探究核桃多肽的抗氧化活性及其对氧化损伤HepG2细胞的保护作用。结果表明,分子质量<1 kDa核桃蛋白水解产物抗氧化活性最强,其羟自由基清除能力的半抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC₅₀)值为11.47 mg/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力的IC₅₀值为35.67μg/mL、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力的IC₅₀值为49.72μg/m L。同时,<1 kDa核桃多肽组分能够减少Hep G2细胞内活性氧含量,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。核桃多肽在225 nm波长处有最大吸收峰。核桃多肽形状不规则、表面光滑、结构致密,有大量粗糙纹路和孔隙。核桃多肽的二级结构中无规卷曲(36.5%)和β-折叠(36.6%)相对含量最高。综上,<1 kDa核桃多肽对...     

乳酸菌发酵核桃粕制备多肽及其体外抗氧化活性

以核桃粕为原料,乳酸菌作为发酵菌种,通过发酵制备核桃粕多肽并对其抗氧化活性进行研究。首先对发酵时间、发酵温度、接种量3个因素进行单因素试验,在单因素试验的基础上进行响应面优化,得到最佳发酵工艺条件,通过体外抗氧化试验测定多肽的抗氧化能力。结果表明：影响试验的因素大小顺序为接种量>发酵温度>发酵时间。核桃粕多肽产量制备的最佳工艺条件：发酵时间12h,发酵温度37℃,接种量13%,在此条件下,多肽产量达到12.84mg/g,与预测值差异不大,证明该优化工艺可靠,按照优化工艺制备所得核桃粕多肽在质量浓度为10 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达82%,具有较强的还原能力。     

核桃花抗氧化活性研究

采用DPPH.清除法对民间食用蔬菜--新鲜核桃花提取物的体外自由基清除作用进行研究.结果表明,核桃花食用部位具有一定的抗氧化活性, 以乙酸乙酯提取物活性最好,活性强于BHA,IC50值达到30.7 μg.     

三种蛋白酶酶解核桃饼粕的抗氧化活性研究

该研究以核桃饼粕（WC）、石油醚脱脂核桃饼粕（PEWC）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕（PEAWC）、核桃饼粕分离蛋白（WCP）、石油醚脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEWCP）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEAWCP）为研究对象,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶超声水解,以抗氧化活性为评价指标,筛选最佳的蛋白酶及原料处理方法。结果表明,碱性蛋白酶水解PEWC对OH·、O2-·和DPPH·清除率最高,分别为18.74%、28.44%和79.96%;胰蛋白酶酶解PEWC的总还原力最大;胰蛋白酶水解PEWCP的OH·和DPPH·清除率最高,分别为21.44%和80.22%,但O2-·清除率较低;胃蛋白酶水解PEWCP的O2-·清除率最高,达30.23%;碱性蛋白酶酶解PEWCP的总还原力最大;核桃饼粕经石油醚脱脂后的酶解产物抗氧化活性最高,且以碱性蛋白酶为最佳水解酶。     

核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究

目的:为了提高核桃粕利用价值,阐明核桃多肽抗氧化活性及其构效关系。方法:采用DA 201-C大孔树脂和Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化核桃粕蛋白酶解液,分析比较不同疏水性和不同分子量核桃多肽抗氧化活性及氨基酸组成特性。结果:经DA 201-C大孔树脂分离的多肽组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的抗氧化活性随洗脱溶剂疏水性增大而增大。组分Ⅲ经Sephadex G-15分离纯化得到a、b、c、d四个不同分子量多肽组分。分子量分布在400~700 Da的组分c具有最高的羟自由基清除能力,并含有较高的谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,与组分Ⅲ在氨基酸组成上具有相似性。结论:具有较好抗氧化活性的核桃多肽分子量小于800 Da,并具有疏水性较强,谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸组成含量相对较高的结构特性。     

核桃衣多酚改性对植物蛋白溶解性和抗氧化活性的影响

为改善植物蛋白的溶解性并提升其抗氧化活性,选择核桃蛋白、小麦蛋白和芝麻蛋白为实验对象,在碱性条件下与核桃衣多酚相互作用,考察了核桃衣多酚改性对3种植物蛋白中性条件下的溶解度和抗氧化活性的影响。此外,通过SDS-PAGE、圆二色光谱和荧光光谱对溶出蛋白质的结构变化进行表征。结果表明：在核桃衣多酚添加量为75 mg/g时,核桃蛋白、小麦蛋白和芝麻蛋白在中性条件下的溶解度分别提升了61.54、 61.23、69.25百分点;同时,添加核桃衣多酚改性后的核桃蛋白、小麦蛋白和芝麻蛋白的DPPH自由基和ABTS自由基清除活性显著升高;3种植物蛋白在核桃衣多酚的作用下均形成了大分子聚集体,总体上蛋白质的α-螺旋和β-转角含量增加,β-折叠含量减少,同时内源性荧光强度降低。综上所述,核桃衣多酚改性可以使蛋白质结构发生改变,显著改善植物蛋白的溶解性并提升其抗氧化活性。     

核桃油体外清除自由基活性的研究

利用有机溶剂浸出法制备核桃毛油并经精炼得到精制核桃油,采用邻苯三酚自氧化反应测定核桃油的体外抗氧化活性。试验结果表明:核桃油对O2-的最大抑制率可达53.3%,花生油、大豆油分别为47.7%和22.8%,因此核桃油相比于其他两种植物油有较好的清除超氧自由基的能力。     

微波辅助提取核桃壳多糖及其抗氧化活性研究

采用单因素试验和正交试验对核桃壳多糖的微波辅助提取工艺进行优化,并对其抗氧化活性进行研究。结果表明,微波辅助提取核桃壳多糖的最优工艺条件为:料液比1∶40,微波提取温度70℃,微波提取时间6 min。在最优工艺条件下,核桃壳多糖提取率为2.24%。核桃壳多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基均表现出较好的清除能力,且在一定范围内对二者的清除作用呈现良好的量效关系。     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。     

超声波辅助纤维素酶提取核桃壳多糖及其抗氧化活性研究

采用单因素试验和正交试验对核桃壳多糖的超声波辅助纤维素酶提取工艺条件进行优化,并对核桃壳多糖的抗氧化活性进行研究。结果表明,超声波辅助纤维素酶提取核桃壳多糖的最优工艺条件为:料液比1∶20,纤维素酶添加量1. 75%,提取温度45℃,提取时间90 min,超声波功率750W。在最优条件下,核桃壳多糖提取率为2. 20%。核桃壳多糖对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基均表现出较好的清除能力,且在一定范围内对三者的清除作用呈现良好的量效关系。     

核桃饼粕多酚纯化工艺及其抗氧化活性的研究

研究大孔树脂纯化核桃饼粕多酚的工艺,比较AB-8、HPD-100、D101、X-5、NKA-9五种大孔树脂对核桃饼粕多酚的分离纯化效果。结果表明,HPD-100为分离纯化核桃饼粕多酚的最佳大孔树脂,其最佳纯化工艺为上样液pH值为4.0,质量浓度4.0 mg/mL,流速2 BV/h,体积1.8 BV,以体积分数为75%乙醇洗脱,洗脱流速4 BV/h,洗脱体积3 BV。用该工艺纯化后,核桃饼粕多酚的纯度从26.63%提高到81.10%,回收率为87.33%。纯化后的核桃饼粕多酚对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟基自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）和超氧阴离子自由基（O-2·）清除作用均呈现量效关系,半数抑制浓度IC50分别为481.18 μg/mL、151.43 μg/mL、8.19 μg/mL和202.83 μg/mL,对DPPH和·OH清除能力较VC强,具有深入研究的价值。     

核桃粕源抗氧化活性肽的酶解制备及活性分析

目的：深度利用核桃粕蛋白。方法：采用分级分离法从核桃粕中提取蛋白质后,分别用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对其进行水解,并比较分析胰蛋白酶酶解物（trypsin hydrolysate,TH）、木瓜蛋白酶酶解物（papain hydrolysate,PH）、中性蛋白酶酶解物（dispase hydrolysate,DH）、碱性蛋白酶酶解物（alcalase hydrolysate,AH）和风味蛋白酶酶解物（flavourzyme hydrolysate,FPH）的抗氧化活性;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率和羟自由基清除率为检测指标分析不同浓度AH的体外抗氧化性;采用LC-MS/MS技术鉴定AH中所有肽的序列,并利用PeptideRanker、BIOPEP-UWM数据库和分子对接工具AutoDock1.5.6筛选潜在的核桃抗氧化活性肽;将上述两条肽分别与Keap1蛋白进行计算机模拟分子对接,并利用斑马鱼胚胎氧化损伤模型,对人工合成的两条抗氧化活性肽的抗氧化活性进行分析。结果：5种酶解物中抗氧化活性较好的AH对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的最佳清除率分别为（71.56±0.75）%,（60.63±0.45）%,（98.63±0.06）%。LC-MS/MS鉴定并通过计算机分析预测得到两条活性最优的肽,即：ALWPF和PLRWPF;两条抗氧化活性肽均能与Keap1蛋白的活性部位结合,其结合能分别为-9.2,-9.6 kJ/mol。ALWPF和PLRWPF肽处理斑马鱼胚胎的安全质量浓度范围分别为0～50,0～30 μg/mL。结论：从核桃粕中鉴定出两条抗氧化肽,其对斑马鱼胚胎具有保护作用。     

核桃仁皮不同极性提取物的体外抗氧化活性分析

采用乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、石油醚对核桃仁皮多酚进行提取,通过清除DPPH自由基、OH自由基、ABTS自由基法与铁离子还原能力初步评价其体外抗氧化活性。结果表明,不同极性溶剂对核桃仁皮多酚提取能力为乙酸乙酯>正丁醇>氯仿>石油醚;乙酸乙酯提取物具有最强的DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力,其IC₅₀值分别为5.004和29.654 μg/mL,其次为正丁醇(9.596、23.681 μg/mL)、氯仿提取物(62.719、144.475 μg/mL)以及石油醚提取物(48.316、146.424 μg/mL);正丁醇提取物具有最强的OH自由基清除能力,其IC₅₀值为393.578 μg/mL,其次为乙酸乙酯(510.186 μg/mL)、氯仿提取物(627.003 μg/mL)与石油醚提取物(840.315 μg/mL);在铁离子还原能力实验中,当样品浓度均为100 μg/mL时,各提取物的吸光度为乙酸乙酯(0.821)>正丁醇(0.509)>氯仿(0.406)>石油醚(0.142)。总之,不同极性提取物其抗氧化能力有差异,依次为乙酸乙酯>正丁醇>氯仿>石油醚,且与质量浓度呈正相关。