钝化剂对大豆胰蛋白酶抑制因子活性的影响

用偏重亚硫酸钠、亚硫酸钠、维生素Ｃ加硫酸铜钝化大豆中的胰蛋白酶抑制因子，并选用１４０只１日龄ＡＡ肉用仔鸡探讨不同钝化剂处理生豆粉日粮对肉用仔鸡生产性能及胰腺组织的影响。结果表明，不同钝化剂，都使生豆粉中胰蛋白酶抑制因子的活性呈不同程度下降。采食用０５％的偏重亚硫酸钠处理的日粮，试鸡的生长抑制显著改善（Ｐ＜００１），胰腺肿大显著缓解（Ｐ＜００１），但不如熟豆粕日粮（Ｐ＜００５）；采食用０９％亚硫酸钠处理的日粮，饲料报酬和胰腺相对重量显著低于生豆粉日粮（Ｐ＜００５），也不如熟豆粕日粮（Ｐ＜００５）；采食用１０％的维生素Ｃ加４００ｍｇ／ｋｇ硫酸铜处理的日粮，显著降低肉用仔鸡的生长（Ｐ＜００１）     

商品大豆饮料胰蛋白酶抑制素活性的研究

研究测定了未经热处理的生豆奶，经现代加工的不同商标的大豆饮料，传统豆腐等样品的胰蛋白酶抑制素活性。其中生豆奶的ＴＩＡ是６６．４ｍｇ／ｇ蛋白质。巴氏灭菌后大豆饮料的ＴＩＡ是２３．７ｍｇ／ｇ蛋白质；超高温灭菌的大豆饮品，其ＴＩＡ是１３．３￣３１．６ｍｇ／ｇ蛋白质之间；两种水静压式杀菌机灭菌的大豆饮料分别为４．１ｍｇ和７．７ｍｇ／ｇ蛋白质，传统豆腐的ＴＩＡ仅为６．４ｍｇ／ｇ蛋白质，上述结果反映了某些现代     

酶法钝化大豆中胰蛋白酶抑制因子的研究

采用国家标准GB 21498—2008检测钝化后大豆中胰蛋白酶抑制因子的活性。四因素四水平正交试验设计结果表明,最优的钝化工艺条件为：温度为45℃、pH 3.5、酸性蛋白酶用量为0.005μL/g、底物浓度为4%,在此条件下钝化完全,抑制率达97.8%。     

大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子（BBI）单克隆抗体（mAb）,以50 μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI mAb的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明：1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度（IC50）为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1 ∶ 4.096×105以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。     

豆浆豆腐中胰蛋白酶抑制因子活性的研究

豆制品中含有丰富的营养物质,但其中的抗营养因子阻碍人体对营养物质的吸收。分别采用6种不同制浆工艺将5种原料豆进行豆浆、豆腐的制备,测定大豆和豆浆中蛋白含量以及豆浆、豆腐的产量,通过分析不同大豆品种及制浆工艺与豆制品产量及蛋白含量之间的关系,以产量为指标,研究不同大豆品种及其加工工艺对豆制品产量及蛋白含量的影响,选取高产量、高蛋白的豆制品。并采用紫外分光光度计法分别对原料豆、豆浆、豆腐等进行大豆胰蛋白酶抑制因子活性的检测,得出低大豆胰蛋白酶抑制因子活性的品种及加工豆制品的制浆工艺。结果表明,豆制品产量与蛋白含量成正比,不同大豆品种采用不同制浆工艺所制得的豆浆、豆腐中胰蛋白酶抑制因子活性具有显著性差异,为不同大豆品种适用性加工及工业化生产提供理论依据。     

商品大豆饮料胰蛋白酶抑制剂活性的研究

本研究详细测定了未经热处理的生豆奶、各种经现代技术加工的大豆饮料产品、东方传统大豆食品豆腐等样品的胰蛋白酶抑制剂活性（ＴＩＡ）。其中生豆奶的ＴＩＡ（以每克蛋白质所抑制的纯胰蛋白酶毫克数表示）是６６．４ｍｇ／ｇ蛋白质，经巴氏杀菌的商品大豆饮料ＴＩＡ是２３．７ｍｇ／ｇ蛋白质。检验了经超高温灭菌处理的７种不同商标大豆饮品，结果表明这些饮品的ＴＩＡ在１３．３～３１．６ｍｇ／ｇ蛋白质之间。另有两种已知是经灭菌的大豆饮料，其ＴＩＡ最低，分别为４．１ｍｇ／ｇ蛋白质和７．７ｍｇ／ｇ蛋白质。又分析了一种采用东方传统加工方法生产的豆腐，其ＴＩＡ仅为６．４ｍｇ／ｇ蛋白质。上述这些分析结果反映了某些经现代加工方法生产的商品大豆饮料，在消除抗营养因子的处理上是不够充分的。     

大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到11 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。     

热处理对鲜豆奶中胰蛋白酶抑制子活性的影响

分别以95℃、120℃、140℃三种温度处理鲜豆奶,研究热处理对胰蛋白酶抑制子活性的影响。测定结果表明要达到胰蛋白酶抑制子90％的失活率,95℃时需要35min;120℃时需要7min;而140℃时只需要60s左右。胰蛋白酶抑制子的热致死时间曲线表明,加热温度增加30℃,钝化胰蛋白酶抑制子90％的热处理时间可缩短10倍。     

大豆脱腥及胰蛋白酶抑制因子去除方法的研究

通过比较不同的处理方法对大豆脂肪氧化酶的抑制作用,确定大豆脱腥最佳方法为热磨法,最佳工艺条件为浸烫温度95℃,浸烫时间5min,磨浆温度100℃.在该条件下大豆脂肪氧化酶活性降为原来的7.89%.通过比较不同的处理方法对大豆胰蛋白酶抑制剂的消除作用确定最佳处理工艺为热磨法,最佳工艺条件为浸烫温度95℃,浸烫时间5min,磨浆温度100℃.在该条件下大豆胰蛋白酶抑制剂活性降为原来的28.41%.     

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制子及其固定化研究

根据 B4菌的主要形态和生理生化特征进行分鉴定为枯草芽孢杆菌 ;通过对其生物学特性及抗菌物质的研究得出 :B4菌的最适培养条件为 YSP培养基、2 8℃、p H7和充分供氧 ,48h生长量达到最大。培养液中抗菌物质活性随培养时间的延长而增高 ,培养 48～ 72 h后达最高。经测定常用杀菌剂、生长调节剂对 B4菌株生长的影响从而选出对 B4菌株影响小的化学杀菌剂 ,以减少农药的用量 ,提高防病效果      

超声波对大豆胰蛋白酶抑制剂活性及二级结构的影响

研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制剂(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)经超声波处理后的活性、巯基含量、远紫外圆二色谱的变化。发现KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol,, 其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。用65%振幅的超声波场处理11 min 后,KSTI 的[θ]200nm值变为-1827 deg·cm2·d/mol,处理20min后,其β转角和无规卷曲的含量分别下降至10.8%和54%,而β折叠的含量则增加至35.2%,同时有约71.5%的二硫化键转变成巯基,对胰蛋白酶的抑制活性则被钝化55%;而BBTI的二级结构则表现稳定,65%振幅的超声波场处理20min后,[θ]200nm值只改变为-700 deg·cm2·d/mol,其β折叠、无规卷曲结构以及对胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影响,仅有5.29%的二硫键转化成巯基。超声波可能是通过影响KSTI的二硫键,使其二级结构发生变化,从而影响其活性。     

两种大豆胰蛋白酶抑制剂的抑制活性及二级结构分析比较

研究了I型Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂(I-KSTI)和Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)对胰蛋白酶的抑制活性及其二级结构的组成差异。发现I-KSTI及　BBTI对胰蛋白酶的抑制曲线分为两部分:活性急剧下降部分和缓慢下降部分。使胰蛋白酶的活性降为原来的一半时的I-KSTI和BBTI浓度为1.5μg/ml　和1.2μg/ml。使胰蛋白酶活性趋向于零(完全钝化)时的I-KSTI浓度为13.5μg/ml,而BBTI则为9μg/ml。两种抑制剂的存在不改变胰蛋白酶的Km值,但其Vmax随抑制剂浓度的增加而下降。表明其对胰蛋白酶的抑制作用是一种非竞争性抑制作用。远紫外圆二色谱的研究发现I-KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,I-KSTI的克分子椭圆度[θ]200nm=-2545deg·cm2/d　mol,其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm=-797deg·cm2/d　mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。     

速冻毛豆钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间研究

以不同成熟度的毛豆为试材,研究了钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间。结果表明,6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2.5min,7～8成熟度的为3min;烫漂液含有3.5%的食盐的6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2min,7～8成熟度的为2.5min。     

响应面法对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺的优化

目的：对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺进行优化。方法：以提取液pH值、热变性温度和硫酸氨饱和度作为影响大豆胰蛋白酶抑制剂提取率的因素,通过单因素试验选取因素与水平,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,在单因素试验基础上采用三因素三水平响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的主要影响因素,以大豆胰蛋白酶抑制剂提取率为响应值作响应面分析。结果：胰蛋白酶抑制剂提取的最佳工艺条件为提取液pH5.1、热变性温度72.8℃、硫酸氨饱和度54.5%,在此条件下,胰蛋白酶抑制剂的提取率达到86%。结论：采用响应面分析法可以对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺进行优化。     

Immunoassays for Bowman-Birk and Kunitz Soybean Trypsin Inhibitors in Infant Formula

ABSTRACT: Because the consumption of soybean inhibitors of digestive enzymes in processed foods may have both beneficial and adverse health-related effects, reliable and rapid analytical methods for these inhibitors are needed. Monoclonal antibody-based sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) were developed for the 2 major soybean protease inhibitors, the Kunitz trypsin inhibitor (KTI) and Bowman-Birk inhibitor (BBI) of trypsin and chymotrypsin. The ELISAs had limits of quantification of approximately 1 and 3 ng/mL for BBI and KTI, respectively, and were used to measure active inhibitors in soy infant formulas. Results were compared with enzymatic analyses and demonstrated that most of the trypsin- and chymotrypsin-inhibitory activities of infant formula were due to constituents other than KTI and BBI. The sandwich ELISA for BBI was also effective in detecting soybean germplasm with atypically low levels of BBI.     

大豆胰蛋白酶抑制剂研究概况

该文介绍国内外研究大豆胰蛋白酶抑制剂概况,并对其失活和测定方法进行初步探讨。     

枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解钝化研究

研究了枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)对大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)酶解活性的影响。实验在50℃,pH7.5条件下反应1h,并以BAPNA为底物,采用改进的方法测定枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解钝化程度,用SDS-PAGE方法和分子排阻色谱法研究其蛋白酶钝化敏感性。结果证明,枯草杆菌蛋白酶可以水解大部分的抑制剂,并通过SDS-PAGE进一步证实了比色法得出的结论。而由分子排阻色谱图可以分析得出抑制剂经枯草杆菌蛋白酶酶解后,活性降低。分析认为,可能是由于抑制剂中二硫键被打断使得其结构发生改变,同时生成大量复杂的小分子多肽物质。因此,可以推断大豆胰蛋白酶抑制剂的稳定性与二硫键的存在有关。     

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法研究进展

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等,介绍了研究概况,大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方面与技术,并对其发展前景作了初步探讨。     

Biochemical Characterization of a Low Trypsin Inhibitor Soybean

A low trypsin inhibitor soybean (LTI) was characterized using electrophoresis, enzyme activity measurements, and gel exclusion chromatography. The protein profiles were similar to a control soybean. Gel exclusion chromatography resulted in two peaks of trypsin inhibitor activity in the control. The first peak, absent in LTI, proved to be Kunitz trypsin inhibitor and was electrophoretically isomorphic. The second inhibitor consisted of at least five isotypes and co-eluted with Bowman-Birk trypsin inhibitor. Shorter heating times were required to inactivate both trypsin and chymotrypsin inhibitor activity in LTI compared to control soybeans. The use of LTI may increase the economic viability of soybeans as protein supplements for humans.     

大豆胰蛋白酶抑制剂失活方法探讨

胰蛋白酶抑制剂是大豆食品与饲料的主要抗营养因子 ,大豆胰蛋白酶抑制剂的失活能明显提高大豆食品与饲料的营养价值和食用安全性。大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化方法有物理、化学、生物还原、酶解、发酵以及天然化合物络合法等。文中介绍了大豆胰蛋白酶抑制剂失活诸方法与技术 ,并对其发展前景作了初步探讨