羊栖菜中褐藻糖胶的提取纯化研究

分别采用酸提法和水提法从羊栖菜中提取褐藻糖胶,然后分别采用乙醇分级沉淀法、CaCl2法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、MgCl2法和酸法进行纯化。结果表明,酸提法提取效率高于水提法,但其特性粘度明显低于水提法褐藻糖胶。酸提法粗多糖宜采用乙醇分级沉淀法进行纯化,水提法粗多糖宜采用CaCl2法进行纯化。     

褐藻糖胶的提取方法

褐藻糖胶是一种存在于各种褐藻中的水溶性多糖，本文对提取褐藻糖胶的各种提取方法作了综述。     

羊栖菜褐藻糖胶的分级纯化和结构分析

从浙江洞头产羊栖菜中提取得到的褐藻糖胶,经DEAESepharoseCL 6B柱层析得F1、F2和F33个组分,F3又经SepharoseCL 6B柱层析得F31、F32和F333个级分.经凝胶过滤色谱检测,F31、F32和F33为均一组分.化学组成分析表明,这5个级分均为岩藻糖、半乳糖和甘露糖等糖基组成的杂多糖,并含有硫酸酯、糖醛酸以及少量的蛋白质,相对分子质量范围为2.5×104～9.5×105.F33中氮的质量分数为2%,氨基酸分析和紫外扫描表明氮大部分可能来自核酸.F32的硫酸酯对碱基本稳定,表明大部分硫酸酯位于单糖残基的垂直位置.     

羊栖菜褐藻糖胶寡糖组分分析及抗凝血活性

为研究褐藻糖胶中具有抗凝血活性的寡糖组分,从羊栖菜中分离纯化得到褐藻糖胶（命名为SFF）,通过高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法、化学法测定SFF的单糖组成、分子质量、理化性质。采用盐酸降解法降解SFF,并通过Bio-gel P4凝胶色谱柱对寡糖组分进行有效分离。采用活化部分凝血酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间评价寡糖组分的抗凝血活性,筛选高活性且低分子质量的寡糖组分,通过质谱法解析其结构,探究抗凝血SFF寡糖的结构特征。结果表明,SFF主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖组成,物质的量比为67.11∶26.69∶2.54∶3.66。SFF分子质量较大为708 kDa,总糖、蛋白、硫酸基质量分数分别为56.44%、1.14%和26.22%。盐酸降解产物经凝胶色谱柱分离得到5 种寡糖组分P1～P5,这5 种寡糖组分均可延长活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）,其中P1、P2、P3对APTT的延长作用高于P4、P5,P3的延长作用尤为明显;对凝血酶时间和凝血酶原时间无延长作用。高抗凝血、低分子质量寡糖组分P3的质谱分析表明,P3是一种高纯度寡糖组分,主要由二硫酸化岩藻三糖组成。本实验筛选出一种具有良好抗凝血活性的高纯度寡糖组分,丰富了抗凝血褐藻糖胶寡糖的研究。     

羊栖菜褐藻糖胶的结构表征及其抗氧化活性

为研究羊栖菜褐藻糖胶的结构及其抗氧化活性,以羊栖菜为原料,经CaCl₂溶液提取、DEAE-Sepharose fast flow分离纯化得到褐藻糖胶组分SFP-2。采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、化学法、高效液相法(HPLC)以及傅里叶变换红外光谱法(IR)对多糖的纯度、分子量、理化性质、单糖组成以及官能团进行测定,并通过测定DPPH自由基清除活性、超氧阴离子清除活性、ABTS⁺自由基清除活性、亚硝酸盐清除活性和还原力,对多糖的体外抗氧化活性进行了评价。结果表明,SFP-2分子量均一,为707.0 kDa;总糖含量为66.9%,蛋白含量为3.1%,硫酸基含量为21.2%,不含糖醛酸;SFP-2主要由岩藻糖和半乳糖构成,还含有少量的甘露糖和氨基葡萄糖;红外光谱显示,SFP-2具有硫酸化多糖常见官能团的特征吸收峰;上述结果表明SFP-2是一种不含糖醛酸的硫酸化岩藻聚糖。SFP-2具有良好的清除DPPH自由基、超氧阴离子、ABTS⁺自由基、亚硝酸盐活性,其EC₅₀分别为8.94、8.30、16.04、9.87 mg/mL,且具有一定的还原能力。因此,SFP-2是一种不含糖醛酸的,抗氧化活性良好的羊栖菜褐藻糖胶。     

羊栖菜褐藻糖胶的分离纯化和组成性质研究

对羊栖菜褐藻糖胶的7种组分进行了分离纯化和性质研究。首先以羊栖菜为原料,通过CaCl2法和酸法抽提褐藻糖胶,然后经DEAE-Cellulose52离子交换柱层析和SephadexG-100凝胶柱层析,分离得到了7个组分,经纸层析和紫外扫描证实均为单一组分。其次对7个组分的性质进行了研究,经GPC凝胶排阻色谱、气相色谱和红外光谱对各组分的相对分子质量、单糖组成、结构性质等进行了测定;经HIO4氧化法和比浊法对各组分的岩藻糖和硫酸根含量进行了测定;最后通过MTT法,研究了各组分对DU-145和SPC-A1细胞的作用,结果表明各组分对该二种癌细胞的增殖均有抑制作用。     

羊栖菜褐藻糖胶对AAPH诱导的斑马鱼氧化应激模型的保护作用

目的:探究羊栖菜褐藻糖胶（SFPS）对2, 2-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐（AAPH）诱导氧化应激斑马鱼模型的保护作用。方法:通过检测SFPS对2, 2'-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）及1, 1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基的清除能力,来评价及验证SFPS的体外抗氧化能力,优化AAPH诱导斑马鱼氧化应激模型,并分别以三个表型指标胚胎存活率、卵黄囊大小和心跳速率以及斑马鱼体内细胞死亡率和活性氧（ROS）生成率来评价SFPS的体内抗氧化活性。结果:SFPS主要由75.30%±1.77%的总糖、21.39%±1.07%的硫酸根,1.78%±0.19%的蛋白质以及1.47%±0.02%的多酚组成,对DPPH、ABTS自由基清除的IC₅₀值分别为0.59、0.69 mg/mL。此外,SFPS在50~200 μg/mL范围内对斑马鱼胚胎无毒性,并对AAPH诱导引起的斑马鱼氧化损伤起到保护作用,且呈剂量依赖型。其中,在最优浓度200 μg/mL显著提高斑马鱼胚胎存活率（100%,P<0.05）, 显著降低心跳速率（101.37%,P<0.05）和卵黄囊大小（111.80%,P<0.05）,对斑马鱼体内细胞死亡和活性氧生成的抑制率最高分别可达70.55%和50.68%。结论:SFPS具有较强的体外抗氧化作用,并对AAPH诱导氧化损伤的斑马鱼表现出优越的体内抗氧化能力及氧化损伤修复能力,这表明SFPS作为天然抗氧化剂在保健食品及化妆品领域具有广泛应用前景。     

羊栖菜粗多糖的提取研究

本文测定了羊栖菜的主要成分 ,并对羊栖菜多糖水提取工艺进行研究。结果表明 :羊栖菜粗多糖提取的最佳条件为 :温度85℃ ,提取时间3h ,提取2次。羊栖菜粗多糖得率为16 2 % ,其中褐藻糖胶含量为4 76% ,褐藻胶含量为36 2 % ,褐藻淀粉含量为0 45%。     

羊栖菜褐藻糖胶的抗凝血和促血管内皮细胞生长活性研究

采用乙醇分级沉淀法对酸提法从羊栖菜中提取的粗糖进行纯化得到褐藻糖胶。采用体外凝血试验tAPTTt、TTt、PT评价了褐藻糖胶体外抗凝血活性和MTT染色法检测褐藻糖胶对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)生长的促进作用。结果表明t,APTTt、TT分别在不同浓度与对照组出现显著差异,而tPT未出现显著差异。在10μg/mL～200μg/mL浓度范围内,人脐静脉血管内皮细胞增殖数量有大幅度提高,对人脐静脉血管内皮细胞增殖具有明显促进作用,说明褐藻糖胶是促人脐静脉血管内皮细胞生长的活性物质。     

两个品系羊栖菜褐藻胶与褐藻糖胶的联合提取及理化性质测定

本文利用联合提取方法对浙江洞头两个品系羊栖菜（SF-1、SF-2）的褐藻胶与褐藻糖胶进行了提取,并对其理化性质进行了测定。结果表明,品系SF-1的褐藻胶含量略高于SF-2,差异不显著（p=0.149）,而后者的褐藻糖胶含量显著高于前者（p<0.01）。两个品系羊栖菜褐藻胶理化性质相似,具有粘度低、凝胶强度高、剪切稀化,触变环面积小以及低温下不形成凝胶等特点。而¹H-NMR分析表明两种褐藻胶以均聚结构为主,尤其是均聚甘露糖醛酸嵌段,SF-1相较SF-2甘露糖醛酸比例更高。两个品系羊栖菜的褐藻糖胶化学组成测定结果表明两种褐藻糖胶的结构组成差异较大。一方面,SF-1的硫酸根含量接近于SF-2的两倍,另一方面,SF-1中以岩藻糖所占比例最高（42.24%）,而SF-2中甘露糖比例最高（36.40%）,其次为岩藻糖（31.97%）。总的来说,两个品系羊栖菜具有高含量的褐藻胶与褐藻糖胶,是联合提取的优质原料,而两品系褐藻糖胶结构上的差异也会使其有不同的性能与应用。      

羊栖菜多糖提取分离及其清除自由基的活性研究

为研究羊栖菜中多糖的提取分离及其对羟自由基(·OH)的清除活性,以及超声波时间、温度、时间、固液比对羊栖菜多糖提取的影响。采用L16(45)正交试验,得到超声波辅助水浴提取法提取羊栖菜多糖的最佳工艺条件为固液比1:40(m/V)、超声波时间20min、温度100℃、水浴时间150min,在此条件下,羊栖菜多糖提取率为6.60%。采用Fenton 体系研究羊栖菜多糖对·OH 的清除作用,得到其清除能力随其质量浓度的增大而增大,在多糖质量浓度为0.05～0.50mg/ml 范围内线性关系良好,脱蛋白多糖对·OH 清除率的线性相关系数R=0.9959,0.50g/L 脱蛋白多糖对·OH 清除率为42.2%。     

鼠尾藻中岩藻聚糖硫酸酯提取工艺及纯化研究

研究利用热水浸提法,复合酶解法提取鼠尾藻中岩藻聚糖硫酸酯的最佳工艺参数及纯化工艺.结果表明:在pH为6,时间为5 h,温度为98℃,料液比为15的条件下浸提,鼠尾藻岩藻聚糖硫酸酯提取率为3.15%,总硫酸根质量分数为0.87%;采用复合酶解法提取岩藻聚糖硫酸酯最佳条件为:复合酶添加量为1.7%,pH为5.5,时间为1h,温度为45℃,在该条件下鼠尾藻中岩藻聚糖硫酸酯提取率为3.6%,总硫酸根质量分数为1.1%,岩藻聚糖硫酸酯经DEAE-52阴离子纤维素变换层析分级得到F1、F2,F3,F4,F5五个组分,硫酸根含量分别为0、3.94%、6.57%、12.60%、38.08%.将含有硫酸根的组分F2、F3、F4、F5分别经Sephadex G-200凝胶柱层析分级纯化后得到f1、f2、f3、f4、f5、f6六个级分,其中f2、f4为大分子质量凝聚体,f1、f3、f5、f6相对分子质量分别为:4.05×104、7.13×104、1.325×105、7.99×104.     

羊栖菜蛋糕的研制

介绍了羊栖菜蛋糕的加工方法，着重探讨了脱腥羊栖菜浆和脱腥脱色羊栖菜浆不同配合量对蛋糕品质的影响，结果表明以脱腥脱色羊栖菜浆为好，浆体用量≤３０％时，产品具有可接受性。     

羊栖菜多酚提取工艺优化

目的对羊栖菜多酚提取工艺进行优化研究。方法通过乙醇溶剂提取羊栖菜中多酚,探讨乙醇浓度、提取时间、料液比以及提取温度等因素对羊栖菜多酚提取的影响,在单因素的基础上,选取乙醇浓度、提取时间和液料比为影响因子,应用Box-Benhnken中心组和设计原理进行3因素3水平实验设计,以羊栖菜多酚的提取量为响应值,运用响应面(response surface methodology,RSM)法对羊栖菜多酚提取工艺进行优化。结果回归模型具有高度显著性,方程对试验拟合较好,可以对羊栖菜多酚提取量进行很好的分析和预测;各因子对提取量的影响大小依次是乙醇浓度料液比提取时间,羊栖菜多酚最佳提取条件为乙醇浓度25%、提取时间3 h、液料比30:1(V:m)、提取温度40℃。结论在此条件下羊栖菜多酚的提取率达7.91 mg/g,与预测值8.02 mg/g基本一致。     

不同方法提取的羊栖菜多糖理化性质及益生活性

本研究以羊栖菜为原料,分析了热水提取、超声辅助水提法、脉冲电场辅助水提法和纤维素酶辅助水提法4种提取方法所得多糖的理化性质和益生活性.首先对4个多糖的得率、分子量、单糖组成和流变特性进行了测定,然后将4个多糖分别添加到乳杆菌发酵培养基中替代葡萄糖作为碳源进行体外发酵,以评价其促进乳杆菌增殖活性的能力.结果表明,纤维素酶...     

几种因素对大孔树脂纯化羊栖菜多酚效果的影响

以新鲜羊栖菜为研究对象,比较4种大孔吸附树脂对羊栖菜多酚的吸附与解吸效果,筛选出其中最适合分离纯化羊栖菜多酚的大孔吸附树脂。研究了p H、流速、样品浓度、洗脱剂浓度4种因素对大孔吸附树脂纯化羊栖菜多酚的影响。结果表明,AB-8型大孔吸附树脂对羊栖菜多酚吸附率和解吸率最高,在条件为p H 5,吸附流速1.5 BV/h,样品浓度70μg/m L,洗脱剂乙醇浓度70%,洗脱流速1.5 BV/h及洗脱剂用量90 m L下,经树脂纯化后的羊栖菜多酚含量从溶剂萃取初步分离的31.24%提高至62.15%。      

马尾藻岩藻聚糖硫酸酯组成分析及抗血栓活性评价

运用超声波热水浸提工艺从亨氏马尾藻中提取并经脱蛋白等初级纯化过程得到岩藻聚糖硫酸酯(F)。将F过DEAE C-52阴离子交换层析柱,得到次级纯化后的岩藻聚糖硫酸酯(F1)。对F、F1进行化学组成分析,用气相色谱-质谱联用方法测定其单糖组成。通过体外溶栓实验、小鼠肺栓塞实验以及出血实验对F及F1进行抗血栓活性评价。结果表明:与F相比,F1总糖含量、岩藻糖含量、硫酸基含量、单糖组成的种类均增多。中、高剂量的F、F1对血凝块有明显的溶解作用,且高剂量的血块溶解率显著高于尿激酶阳性对照组(P0.05,P0.01)。F及F1均能降低肺栓塞模型小鼠的死亡率,且高剂量的F1与模型对照组相比有极显著差异(P0.01)。低、中、高剂量的F、F1均显著延长出血时间(P0.05,P0.01),F1低、中、高剂量组的出血时间均分别高于F各剂量组。F、F1各剂量组与肝素钠阳性对照组相比均有极显著差异(P0.01),出血时间的延长率明显小于肝素钠对照组。说明马尾藻岩藻聚糖硫酸酯F、F1有较好的抗血栓活性,出血危险性较小,且F1抗血栓作用优于F。