云芝漆酶粗酶液在造纸废水深度处理中的应用研究

研究了云芝液培养所产的漆酶粗酶液用于深度处理制浆造纸废水时的主要影响因素:时间、酶用量、pH值、温度等。研究结果表明,漆酶粗酶液可有效对制浆造纸废水进行深度处理,最佳处理条件为:处理时间5h,酶液用量5IU/mL,pH7,温度55℃。在进水CODCr为268mg/L,木素含量为100mg/L,色度为186倍的条件下,处理后出水CODCr为48mg/L,木素含量为16mg/L,色度为10倍。CODCr、木素和色度的去除率分别达82.1%,84%和94.6%。     

杏鲍菇重组漆酶对不同酚类污染物的降解研究

探讨重组漆酶的酶学性质,并研究降解时间、酶用量、酚类物质浓度、pH对两种不同结构酚类化合物（壬基酚、2,4-二氯酚）的降解效果。结果表明,该重组漆酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为2.5³.0;该酶在30℃下具有较好的热稳定性,在pH9.0¹0.0具有较好的pH稳定性。该重组漆酶具有降解不同结构酚类的能力,漆酶对不同浓度酚类化合物的降解率随着酚类浓度的增加而减小。当降解时间为16 h、重组漆酶浓度1 U/m L、pH3.5时,10 mg/L的壬基酚的降解率为100%;当降解时间为16 h、漆酶浓度是1.25 U/m L、pH4.0时,5 mg/L的2,4-二氯酚的降解率为95.1%。该重组漆酶的研究为酚类污染物的降解提供了理论基础。      

云芝菌固态发酵产漆酶及其对二氯酚脱氯作用的研究

利用云芝菌固态发酵产漆酶,当玉米皮和麸皮的比例为6:4,培养基含水量65%,接种量10%,培养温度30℃时,发酵10 d,漆酶活力可达到1.51×10~5U/g(干曲)。利用云芝漆酶对2,4-二氯酚进行脱氯反应,其适宜温度为35℃,pH 6.0,当底物浓度为1 mmol/L时,反应8 h,2,4-二氯酚的去除率达到95%以上。     

利用漆酶降解有机污染物

漆酶是近年来在造纸界研究研究比较多的一种降解木素的氧化还原酶。本文对影响漆酶转化去除环境中有毒污染物能力的因素、漆酶脱氯去除氯酚化合物毒性的机理及其在处理含酚废水中的应用进行综述。     

生物竹炭固定化漆酶对苯酚的吸附降解

为提高漆酶的利用效率,进一步开发其在环境治理中的应用,本实验用生物竹炭固定化漆酶对苯酚进行去除。探究生物竹炭固定化漆酶、吸附降解时间、苯酚浓度、生物炭粒径、p H、固液比对苯酚的去除作用。结果表明,反应时间72 h,苯酚初始浓度为100 mg/L,生物炭粒径为10目,p H为4.5,固液比是1∶10(g/m L)时,苯酚的去除率可以达到100%。本研究结果为苯酚废水的处理提供了一种有效的方法。      

用于烟梗木质素降解的漆酶的分离纯化研究

通过云芝菌发酵得到的漆酶粗酶液经超滤浓缩后,以硫酸铵为盐析剂进行分级盐析沉淀,利用DEAE-Sepharose-F.F.柱层析对漆酶的发酵液进行分离纯化.SDS-PAGE电泳分析证明获得了电泳纯漆酶,其分子量约为64.4 k D.分离纯化过程中酶被纯化了22.80倍,酶活的回收率为36.32%,表明云芝菌产漆酶得到了很好的分离纯化.将漆酶液用于烟梗木质素的降解,实验结果表明,经此降解处理过的烟梗其内在品质得到了一定的提高:杂气和刺激性明显降低,木质气明显减弱,香气和余味均有改善.     

漆酶介体系统催化碱木质素降解及其结构演变研究

漆酶介体系统（Laccase-mediator system,LMS）以介体为电子穿梭体,对底物有较高的催化效率,被广泛应用于环境污染物的降解。本研究系统探究了漆酶及漆酶/H₂O₂、漆酶/HBT（1-羟基苯并三唑）和漆酶/ABTS（2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐）3种介体系统对碱木质素的降解效果,探究了漆酶/ABTS介体系统降解碱木质素的影响因素,并对漆酶和3种LMS反应前后的碱木质素进行了结构表征分析。结果表明,漆酶/ABTS介体系统的碱木质素降解率最高,在32 ℃、pH值=5、ABTS浓度2 mmol/L、反应时间24 h的条件下,碱木质素降解率可达39%;漆酶处理所得碱木质素的官能团种类未发生变化,但多分散系数减小,分子质量增加;LMS处理所得碱木质素的多分散系数和分子质量进一步减小,尤其是漆酶/ABTS处理后,碱木质素的数均分子质量减少了50.5%;LMS处理后碱木质素化学键发生了不同程度的断裂,引起了C—O、β-O-4连接键断裂,脱甲基反应,苯环开环等变化。     

双孢菇漆酶的固定化及其对邻苯二甲酸二甲酯降解的研究

为提高漆酶的利用效率,进一步开发其在环境治理中的应用,以海藻酸钠为载体,采用单因素实验对双孢菇漆酶凝胶包埋固定化的工艺进行探讨,并利用固定化漆酶对邻苯二甲酸二甲酯（DMP）进行降解实验。结果表明,采用直接包埋方式,固定化最佳单因素条件为:给酶量160 U/g载体,海藻酸钠浓度为3%,CaCl₂浓度为0.15 mol/L,固定化时间为2 h,可以获得较佳的固定化效果。利用固定化漆酶降解DMP时,降解率随DMP初始浓度的增加而下降,在pH3、4.5对DMP具有较好的降解效果,在25 mg/L的DMP溶液（pH4.5）中添加小分子介质ABTS浓度达到0.3 mmol/L,投加2 U/g固定化小球反应24 h,降解率最高达到56.9%。研究结果为处理含DMP污染提供了一种有效的方法和理论基础。      

杂优-2平菇漆酶的分离纯化及酶学性质

将杂优-2平菇菌丝进行液体培养,发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE（diethylaminoethyl）-Sepharose fastflow层析和Superdex-200 prep grade层析等方法纯化,获得了电泳纯的杂优-2平菇漆酶,并对纯化的漆酶进行了部分酶学性质研究。结果显示,杂优-2平菇漆酶比活力为115 U/mg,分子质量约为244.0 kD,亚基分子质量约为85.6 kD。最适反应pH值和最适反应温度分别为5.0和55 ℃,在pH 6.0～8.0及40～55 ℃范围内稳定性较好;最适条件下,以2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）为底物的Km值为2.1 mmol/L,最大反应速率（vmax）为0.117 μmol/（min·L）。Fe2＋、抗坏血酸对该酶活性具有完全抑制作用,乙二胺四乙酸、Ag＋、Mg2＋、Li＋对该酶活性影响较小;草酸、甲醇、正丁醇、K＋、Ca2＋、Ba2＋、Zn2＋、Cd2＋、Pb2＋、Mn2＋、Co2＋对该酶活性有不同程度的抑制作用;Cu2＋激活作用不明显;尿素、乙醇、异丙醇对该酶活性具有激活作用。     

漆酶／助剂体系降解苇浆残余木素的研究

用溶剂抽提法制取苇浆残余木素,用漆酶／助剂和氧气开展工作 反应,通过甲氧基的测定,元素分析、^13C-NMR,^1H-NMR、IR分析苇浆残余木素与漆酶／助剂反应前后其结构的变化,研究发现苇浆残余木素在反应后其甲氧基、酚羟基减少,醇羟基增多,木素结构中羰基增多,木素的苯环结构发生了开环反应。     

利用木质素沉淀物产漆酶的研究

从玉米秸秆的碱处理液中分离木质素沉淀物,进一步用于Coriolus versicolor液态发酵生产漆酶。研究结果表明,木质素沉淀物对漆酶的形成有明显的促进作用,当其添加量为0.6%时,在摇瓶条件下漆酶活力可高达7005.6IU/ml,比对照组的漆酶活力提高了4.04倍。发酵培养基中添加10g/L葡萄糖有利于菌种的前期生长,从而提高漆酶产量。在3.7L发酵罐中进行产酶试验,发酵罐最适通气量为0.75vvm,最适转速为300r/ min,漆酶活力可达到7506.2IU/mL。该试验结果对于降低玉米秸秆碱预处理液的环境污染,促进木质素沉淀物的回收利用以及加速漆酶的规模化生产等均具有重要意义。     

漆酶产生菌的原生质体诱变选育

利用紫外线对杂色云芝原生质体进行诱变,经原生质体再生培养和筛选再生菌株,获得一株高产漆酶突变株,突变株比出发菌株的漆酶酶活提高了54.32%.而且,突变株继代遗传稳定,说明利用原生质体紫外诱变育种是获得漆酶高产菌的一种有效方法.     

云芝用于糖蜜废水脱色处理的研究

对云芝进行糖蜜废水脱色处理的培养条件进行了研究.结果表明,摇瓶脱色培养最佳条件为:粗玉米粉15g/L;无需添加额外的氮源、磷源、镁源,过量的氮源反而会抑制脱色作用;最佳的培养温度、初始pH、装液量、转速以及接种量分别为:30℃、5.0、20%、150 r/min和2%;锰离子、铜离子和木质素的结构类似物(如单宁酸、愈创木酚和苯酚)有促进脱色作用;而添加表面活性剂吐温-80不仅能大大提高脱色率,而且能明显提高菌体量.     

毛云芝菌漆酶的分离纯化和性质研究

将发酵液经真空抽滤后得粗酶液,以硫酸铵为盐析剂进行分级盐析沉淀、再经DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析对漆酶进行分离纯化,用SDS-PAGE证明可获得纯的漆酶,纯化倍数为183.69倍,酶活回收率为24.77%。实验表明,该酶在30℃条件下具有较高的稳定性;在pH3.4～5.8范围内的相对酶活均在80%以上,漆酶稳定性较好,pH3.8的时候漆酶的稳定性最好。     

液态发酵法生产云芝胞内糖肽

通过筛选比较 6株云芝菌种 ,获得液态发酵生产云芝糖肽较佳菌株CV S和CV H ,经优化摇瓶发酵 ,将菌株CV S放大至 3 0L罐发酵 ,2 8℃发酵 4d ,菌丝体干重达 2 4 9g/L ,菌丝体破碎后 ,超滤浓缩 ,醇沉干燥后 ,云芝胞内糖肽产率达 2 2 3 g/L ,糖肽总糖为 5 5 5 8% ,肽 3 3 5 3 % ,经HPLC检测其分子质量高于 1 0ku的有 2个组分 ,分别为 742 2和 2 5 2ku ,所提取的产品 ,其出峰时间与标准品基本一致 ,总糖、单糖、肽含量符合国家药品标准WS—XG 0 2 1 2 0 0 2的要求。     

液体发酵法生产云芝胞内糖肽

通过筛选比较6株云菌种。获得液体发酵生产云芝糖肽的较佳菌株CV-S，经优化播瓶发酵，放大至30L罐发酵，28℃发酵4d，菌丝体干重达24．9g／L。菌丝体破碎后，经超滤浓缩，醇沉干燥后，云芝胞内糖肽产率迭2．23g／L。糖肽总糖为55．58%，肽33．53%，经HPLC检测其相对分子质量高于10000的有2个组分，分别为783 600和27 700。所提取产品的出峰时间与标准品基本一致。     

不同Cu离子浓度和pH值对云芝降解秸秆中木质素和纤维素的影响

云芝(Coriolus versicolor)对秸秆中木质素与纤维素的降解情况受不同Cu2+浓度和pH值条件的影响,设定不同条件可以提高木质素的降解率,降低纤维素的降解率,以更好地保存纤维素的完整性,实现秸秆中主要成分的分离。通过均匀设计法,设定不同的Cu2+浓度环境X1(0、1.0、2.0、4.0、6.0mmol/L)和不同pH值条件X2(2.2、2.8、3.4、4.0、4.6),测定相应条件下云芝的菌丝生长情况、木质素酶活力、纤维素酶活力以及秸秆中木质素和纤维素的降解率。结果表明：木质素的降解率与Cu2+浓度呈正相关,与pH值呈负相关;纤维素的降解率与pH值呈正相关,与Cu2+ 浓度呈负相关。通过试验所得方程预测得知,Cu2+浓度6mmol/L、pH2.2是优化的云芝降解、分离秸秆中主要成分的条件,在该条件下,由所得方程可知秸秆中木质素的降解率为16.1%,纤维素的降解率为27.7%。     

云芝多糖研究进展

近年来,药食用真菌因具有多种生物学功能而受到重视,成为研究热点。云芝多糖由云芝或从其发酵液中分离提取,具有突出的药食用功效和生物活性。文中从云芝多糖的结构、性质、提取纯化、发酵生产、用途与展望等方面进行了综述,为云芝多糖的进一步研究与开发提供参考。