龙眼核多酚提取物对酪氨酸酶抑制作用的研究

研究龙眼核多酚提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。用龙眼核多酚提取物,分别以L-酪氨酸、L-多巴为底物,在475 nm处测定溶液吸光度和吸光度的变化,观察龙眼核多酚对单酚酶、双酚酶活性的影响。结果表明龙眼核多酚对酪氨酸单酚酶、二酚酶均有抑制作用,半抑制浓度IC_(50)分别为12.68、11.81 mg/m L。龙眼核多酚为酪氨酸酶可逆竞争性抑制剂,抑制常数(KI)为0.538 mg/m L。     

3-羟基-4-甲氧基肉桂酸抑制酪氨酸酶催化反应的动力学研究

在30℃,p H=6.8的Na2HPO4-Na H2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制动力学。实验结果表明,3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好的抑制作用。对单酚酶和二酚酶活力的相对抑制率达到50%的3-羟基-4-甲氧基肉桂酸浓度(IC50)约分别为0.13 mmol/L和0.39 mmol/L,比熊果苷抑制二酚酶活性的IC50值5.3 mmol/L小得多。3-羟基-4-甲氧基肉桂酸能明显延长单酚酶的迟滞时间,0.2 mmol/L3-羟基-4-甲氧基肉桂酸能使迟滞时间由1.1 min延长至4.3 min。对二酚酶的抑制作用表现为可逆效应,说明其是通过抑制酶活力而导致催化效率的降低,而不是通过减少有效的酶量导致酶活力的下降。Lineweaver-Burk图显示3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对二酚酶的抑制作用表现为竞争性抑制,最大反应速率(vm)为64.5μmol/min,抑制常数(KI)为0.11 mmol/L。     

紫娟茶提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

首先对从蘑菇中提取的酪氨酸酶的反应条件进行了探讨。采用单因素和正交实验确定了酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的最适反应条件。结果显示单酚酶最适反应条件为:底物L-酪氨酸为10.0mmol/L,酪氨酸酶为0.30g/mL,反应时间为15min,反应温度为30℃;二酚酶最适反应条件为:底物邻苯二酚为7.5mmol/L,酪氨酸酶为0.035g/mL,反应时间为15min,反应温度为15℃。然后对紫娟茶的3种提取物的酪氨酸酶活性的抑制作用进行了探讨。结果表明,3种提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有较好的抑制作用,特别是含有花青素和茶多酚混合物的提取物I的抑制作用最强;3种提取物对单酚酶和二酚酶的半抑制浓度IC50分别为6.85×10-4、8.21×10-4、16.29×10-4g/mL和6.37×10-4、7.62×10-4、13.53×10-4g/mL。     

根皮苷及苹果幼果多酚对酪氨酸酶活性的抑制作用

为比较苹果幼果多酚及其主要组分根皮苷作为酪氨酸酶抑制剂的潜质,本文以曲酸为阳性对照,分析并比较了三者对酪氨酸酶的抑制效果及抑制动力学。结果表明,根皮苷、苹果幼果多酚和曲酸均能有效抑制酪氨酸酶单酚酶及二酚酶活性,三者抑酶效果的强弱顺序为曲酸苹果幼果多酚根皮苷,对单酚酶活性的IC50分别为55.80、54.30和23.81μg/m L,对二酚酶活性的IC50分别为75.30、56.15和23.45μg/m L;根皮苷浓度为200μg/m L时为竞争型抑制,低于200μg/m L时为混合型抑制,苹果幼果多酚为非竞争型抑制,曲酸为混合型抑制。因此,抑制剂的组成成分和浓度均能影响其抑酶效果和抑酶机理,三种抑制剂均可通过抑制酪氨酸羟化生成多巴及抑制多巴氧化成多巴醌来减少黑色素的合成,苹果幼果多酚对酪氨酸酶活性的抑制效果优于根皮苷,且含量丰富,价格便宜,更适合作为酪氨酸酶抑制剂,有望开发应用于美白产品中。     

槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用与分子机理

本文以L-多巴为底物,采用酶抑制动力学法研究了槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用大小及类型,并采用荧光光谱技术分析其与酪氨酸酶的猝灭作用类型、结合位点、作用力类型。在此基础上,进一步利用柔性分子对接技术分析槲皮素对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,槲皮素对酪氨酸酶具有抑制作用,抑制常数KI为36 m M,以竞争性抑制剂形式抑制酪氨酸酶活性,是一种可逆性抑制剂;槲皮素以1:1比例通过氢键和疏水作用力结合于酪氨酸酶活性中心,且对酪氨酸酶的荧光产生静态淬灭作用,具有氢键及疏水作用力;分子对接结果验证了以上实验结论:槲皮素占据了酪氨酸酶活性中心,且与活性中心部位的Asn260和Gly62残基形成了强烈的氢键作用,同时伴有疏水作用共同稳定复合物的结构。     

马铃薯酪氨酸酶的制备及其对羊毛的改性

为研究生物法对羊毛的改性,运用简易方法从马铃薯中提取酪氨酸酶,并以邻苯二酚（儿茶酚）为底物,研究自制马铃薯酪氨酸酶的活性和最佳的催化氧化条件,并用它处理羊毛织物。然后接枝含有－NH2的模拟化合物,并运用紫外和红外光谱进行分析,以此来检验酶处理羊毛是否发生氧化反应。结果表明：自制马铃薯酪氨酸酶催化产物的最大吸收波长为410 nm,最佳反应条件为pH值为6.8,温度30 ℃;羊毛织物的酪氨酸残基被催化氧化为多巴醌结构。     

对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶的抑制作用及机理

为探究对羟基肉桂酸乙酯的降脂活性,本文采用酶反应动力学和分子对接技术来研究对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶的抑制类型和抑制机理。抑制动力学结果表明,对羟基肉桂酸乙酯对胰脂肪酶表现为可逆竞争型抑制（半抑制浓度IC₅₀为41.07 μg/mL）,其最大反应速率V_max为2.61 μmol/L·min,抑制常数K_i为114.35 μg/mL;分子对接结果表明,对羟基肉桂酸乙酯可以与胰脂肪酶催化三联体中的氨基酸残基Ser152和His263形成强烈的氢键作用,且通过范德华力、氢键作用力和疏水作用力与胰脂肪酶的氨基酸残基作用,与底物p-NPB竞争酶的活性中心位点。本研究为对羟基肉桂酸乙酯在降脂功能食品中的应用提供了一定的理论依据。     

茶多酚对酪氨酸酶的抑制作用及分子机制研究

目的 研究茶多酚对酪氨酸酶的抑制作用及分子机制。方法 通过生化分析法,测定茶多酚对酪氨酸酶的抑制作用并分析其抑制动力学;采用荧光光谱、圆二色谱和分子模拟技术,剖析茶多酚对酪氨酸酶抑制作用的分子机制。结果 茶多酚对酪氨酸酶有良好的抑制作用,对其单酚和多酚活性的半数抑制浓度分别为0.66mg/mL和1.76mg/mL,为竞争性抑制;茶多酚可使酪氨酸酶出现明显的荧光淬灭和最大发射波长红移,并使酪氨酸酶二级结构中的α-螺旋结构显著增加, β-折叠、β-转角和无规则卷曲结构显著减少,显著改变酪氨酸酶的三级和二级结构。结论 茶多酚主要通过氢键和静电相互作用与酪氨酸酶进行结合,从而改变酪氨酸酶的空间结构并阻碍其与底物进行结合,进而抑制酪氨酸酶的活性。     

异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理

异鼠李素是沙棘果实和美白类中草药白蒺藜、白鲜皮的主要黄酮类活性成分,具有广泛的药理活性。酪氨酸酶是人体细胞产生黑色素和果蔬褐变的关键酶。本文研究了异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理。以L-多巴为底物,测定异鼠李素对酪氨酸酶二酚酶活性的IC50、抑制类型和抑制常数。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断,并计算相应的抑制常数(KI和KIS)。实验结果显示,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力抑制效果显著,IC50为25μmol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为20.1μmol/L,KIS为108.6 mol/L。总之,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力有很好的抑制作用,是值得进一步研究的美白类候选药物和防止果蔬褐变的食品添加剂。     

表面等离子体共振技术分析卵黄抗体对酪氨酸酶与底物相互作用的影响

目的：采用表面等离子体共振技术（surface plasmon resonance,SPR）测定酪氨酸酶与特异性卵黄抗体（IgY）及其与底物L-多巴的亲和力,探讨特异性IgY对酪氨酸酶与底物亲和力的影响。方法：将裸金芯片进行自组装修饰,以3-巯基丙酸作为基底膜对酪氨酸酶进行固定,SPR实时监测特异性IgY及底物L-多巴与酪氨酸酶结合后芯片表面的响应信号变化。将数据导入CLAMP分析软件,进行拟合分析,确定动力学常数。结果：酪氨酸酶与特异性IgY的结合常数（4.50×106?L/mol）明显高于其与底物L-多巴的结合常数（4.95×103?L/mol）,且酪氨酸酶与特异性IgY结合后,其与底物L-多巴结合常数明显下降。结论：相比底物L-多巴,酪氨酸酶更易与特异性IgY结合,而且从结合动力学角度说明特异性IgY可以明显抑制酪氨酸酶与底物结合从而抑制酶活性。     

表没食子儿茶素没食子酸酯与猪胰脂肪酶的相互作用

通过荧光光谱法研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与猪胰脂肪酶(PPL)的相互作用,并基于分子对接技术对其作用机理进行探讨。结果表明：EGCG对PPL具有较强的荧光猝灭作用,并抑制其催化活性,而金属离子(Ca2+、Mg2+、Cu2+、Fe2+)能减弱EGCG对PPL活性的抑制。分子对接研究表明,EGCG可通过疏水键、氢键及Pi-Pi堆积作用与PPL结合,阻碍底物进入酶活中心,从而抑制其活性。     

白附片提取物对酪氨酸酶活性的影响

利用超声辅助乙醇提取白附片中活性组分,跟踪粗提物浓度对酪氨酸酶活性的影响规律,发现粗提物能激活酪氨酸酶活性,激活率高达81.82%.利用D101大孔树脂对粗提物进行分离,对酪氨酸酶激活作用最强的是水和30%乙醇洗脱部分(激活率分别是252.00%和326.79%),能显著缩短酪氨酸酶催化单酚反应的滞迟时间.应用反相高效...     

Studies on enzymic browning of potatoes (Solanum tuberosum). III. Kinetics of potato phenoloxidase (EC 1.14.18.1 monophenol, dihydroxyphenylalanine: oxygen-oxidoreductase).

From initial velocity studies a sequential mechanism for the reactions catalysed by phenoloxidase from potatoes is indicated. The data are in accordance with an ordered addition of oxygen and phenolic substrate to the enzyme, with oxygen being the first substrate bound at thermodynamic equilibrium. The Michaelis constants for L-tyrosine, L-dopa, and chlorogenic acid are 1.4 X 10(-3), 3.3 X 10(-4), and 1.4 X 10(-4) mol/l, respectively. The dissociation constant for the enzyme-oxygen complex is about 10(-3) mol/l. In the presence of chlorogenic acid no lag phase occurs in the course of L-tyrosine oxidation. With increasing amounts of chlorogenic acid the tyrosinase activity goes through a maximum. The significance of these findings for the in vivo action of the enzyme is discussed.     

Wheat bran globulins: Competitive inhibitors of mushroom tyrosinase

The inhibitory capacity of the globulin fraction of wheat bran against the diphenolase activity of mushroom tyrosinase, using l-tyrosine as substrate, was evaluated. Enzyme kinetics was monitored in the presence of globulin solutions by measuring the absorbance at 475nm. Lineweaver-Burk plots were drawn in order to determine V_max, K_m, and type of inhibition. Results showed that globulins from wheat bran competitively inhibited, the activity of mushroom tyrosinase with a K_I of 0.79%(w/v). The degree of inhibition was 24% at 2 mM of the substrate L-tyrosine.     

水翁花蕾提取物DMC对胰脂肪酶的抑制作用研究

本文主要探讨了2',4'-二羟基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基查耳酮(2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone,DMC)对胰脂肪酶(Pancreatic Lipase,PL)的抑制作用及作用机理。以4-硝基苯丁酸酯为底物,采用对硝基苯酚法检测DMC对PL活性的影响,采用紫外光谱法、荧光光谱法以及分子对接法研究DMC与PL的相互作用。结果表明:DMC对PL有抑制作用,半数抑制浓度为50.01±3.56 μmol/L,酶动力研究表明DMC是PL的竞争型抑制剂;光谱实验结果显示DMC的加入使PL发生了荧光猝灭,猝灭类型为动态猝灭;同步荧光及三维荧光实验表明DMC不会改变PL构象;热力学参数ΔG<0,两者的相互作用是自发进行,ΔH<0,ΔS<0,表明DMC与PL的相互作用力主要为氢键和范德华力;分子对接实验进一步验证了以上结果。由此可见,DMC具有作为PL抑制剂的潜能。     

Biochemical composition and storage of Jamaican yams (Dioscorea sp)

Dioscorea yam tubers of 11 cultivars from five common species grown in Jamaica were analysed for the following: protein content, total phenolics, vitamin C, total lipids, fatty acid composition and activity of the polyphenol oxidase enzyme. The results show that the yams grown in Jamaica are of good nutritional value with considerable amounts of protein, vitamin C, low lipids with only one cultivar ‘renta yam’ (D alata) possessing high levels of phenolic compounds. The fatty acids present in the total lipid extracts show that yam tubers generally possess high levels of saturated fatty acids mainly palmitic acid. However, the species D alata (cv white yam) and the species D trifida (cv yampie) have high levels of the unsaturated fatty acid, linolenic. All the polyphenol oxidases from the 11 cultivars show activities towards the diphenol substrates, catechol and DL-DOPA (DL-3,4-dihydroxyphenylalanine). However, no oxidation was observed with L-tyrosine, a monophenol substrate. All cultivars studied were found to have different lengths of dormancy which varied with storage conditions. When the harvested tubers were washed, sunned and stored at 20?C in a dark cupboard, it was possible to extend their lengths of dormancy by a further 11 weeks.     

甲烷氧化菌素耦合脂肪酶生物传感器差分脉冲伏安法对Cu2＋的检测

利用甲烷氧化菌素（methanobactin,Mb）可特异性捕获Cu2＋的特点,构建Mb耦合脂肪酶生物传感器,并利用荧光光谱、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱以及透射电子扫描电镜对制备成功的固定化脂肪酶（Lipase@AuNPs）结构和形貌进行表征。借助生物传感器监测脂肪酶水解三油酸甘油酯时电信号的响应情况,Cu2＋与Mb特异性接合并在脂肪酶周围产生富集现象,抑制脂肪酶的催化活性,电流强度显著下降,从而实现对Cu2＋的快速定性、超痕量反定量检测。结果表明：采用差分脉冲伏安法测得最优检测体系为底物三油酸甘油酯溶于Tirs-HCl缓冲溶液的质量浓度2 g/100 mL、缓冲液pH 7.5,当Cu2＋浓度为1～100 nmol/L范围内时,传感器电流差值与其线性关系良好,回归方程为y＝0.228x＋0.774 8,R2＝0.995 0,检出限为0.03 nmol/L（RSN＝3）。本研究建立的新型脂肪酶生物传感器检测Cu2＋的方法,具有较高的灵敏度、专一性和稳定性,为实现食品中痕量、超痕量的重金属检测提供一定的参考。     

A comparative analysis of property of lychee polyphenoloxidase using endogenous and exogenous substrates

Lychee polyphenoloxidase (PPO) was extracted and partially purified using ammonium sulphate precipitation and dialysis. The comparative analysis of PPO property was performed using its endogenous substrate (–)-epicatechin and exogenous substrate catechol. The pH optima for activity and activation temperature profiles of lychee PPO were very different when the enzyme reacted with endogenous and exogenous substrates. The addition of ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt into the endogenous or exogenous substrate–enzyme system exhibited the same lowest inhibition of the PPO activity. However, l-cysteine was most effective in inhibiting enzymatic activity in the endogenous substrate–enzyme system while ascorbic acid was the best inhibitor in the exogenous substrate–enzyme system. Fe²⁺ greatly accelerated the enzymatic reaction between endogenous substrate and PPO, but Cu²⁺ exerted the same effect on the reaction between exogenous substrate and PPO. Based on the kinetic analysis, lychee PPO could strongly bind endogenous substrate but it possessed a higher catalytic efficiency to exogenous substrate.