LAMP实时浊度法检测转基因水稻Bt63品系

采用环介导等温扩增技术(LAMP),针对转基因水稻Bt63品系外源基因与内源基因结合处序列设计4条特异性引物,利用浊度仪实时监测扩增过程,建立Bt63品系的快速检测技术体系,并对反应温度、灵敏度、特异性、稳定性和实际样品检测能力进行初步探索。结果表明,LAMP实时浊度法能够特异性检测转基因水稻Bt63品系,其最低检出限为0.01%,是普通PCR方法的10倍,具有广泛的应用价值。     

Bt蛋白免疫检测技术研究进展

在商用转基因大豆、玉米中,转Bt基因占绝大多数,由于目前越来越多的国家要求对转基因产品实行标签制度,因此转Bt基因成分的快速检测对进口转基因国显得非常重要,本文对Bt蛋白的一种快速检测技术-免疫检测技术的研究进展进行综述。     

应用多重PCR技术筛选检测转Bt基因作物

Bt基因在抗虫转基因作物中广泛应用,是转基因食品筛选检测中最主要的目的基因。本研究依据核苷酸序列分析结果,将在转基因作物中常见的8种Bt基因(cry1Ab、cry1Ac、cry1Ab/Ac、cry1A.105、cry1Ac-M、cry2Ab、cry3A和cry3Bb)划分为cry1A、cry2A、cry3A三个组,并根据每个组的一致性序列设计了可分别检测各组Bt基因的特异性检测引物,其中cry1A组采用了简并引物,经过特异性、灵敏度等测试,建立了针对cry1A组、cry2A组和cry3A组的单一PCR检测方法。此外,通过将这三对检测引物放入同一PCR体系中,还建立了可特异检测上述3组Bt基因的三重PCR方法。结果表明,本研究建立的单一PCR和三重PCR方法均可从各类样品中准确检测出预期Bt基因成分,检测灵敏度达到0.1%。本方法特异性强、灵敏度高,在转基因成分的筛选检测中有很好的应用前景。     

转基因水稻定性PCR检测体系的建立

采用PCR技术检测CaMV35S启动子、NOS终止子、Bt基因,判断水稻样品中是否含转基因成分,建立了稳定快速的转基因水稻定性PCR检测体系.PCR检测的灵敏度达到0.1%,稳定性良好.结果表明:PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中.此外,进一步讨论了转基因成分检测中存在的问题、转基因产品标识的必要性和目前转基因检测技术在检测中的问题.     

转基因水稻Bt63的外源基因相对含量分析

为分析转基因Bt63稻米外源基因含量,利用新型、灵敏和高通量的实时荧光定量PCR技术,以RBE-4作为转基因水稻的内源参照基因,通过梯度稀释法,分别获得了Bt 63和RBE-4基因的Ct值与起始模板相关性的标准曲线,相关系数分别为0.996 6和0.995 4。通过转基因水稻外源基因(Bt63)和内标基因(RBE-4)起始模板数的比较,测定了外源基因在转基因水稻中的相对含量,这项研究将为建立转基因水稻抗虫能力评价体系和转基因稻谷的流通和监管提供技术支撑。     

转Bt基因水稻的食用安全性评价研究进展

水稻（Oryza sativa）是我国重要的经济作物,其优化育种一直是研究的重点。苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis,Bt）抗虫基因的出现,开辟了利用外源基因培育转基因抗虫作物的新领域。目前,转基因抗虫水稻的培育技术已日趋成熟,而其对人体的潜在安全性问题却备受争议。转Bt基因水稻能否实现商业化是人们关注的焦点。本文就转Bt基因水稻的食用安全性评价的研究进展进行综述,以期为我国转Bt基因水稻的风险评估和推广提供一些参考。     

多重PCR法检测转Bar、Bt基因双抗稻米

旨在建立一种快速、有效的检测转基因双抗稻米的方法,以转Bar、Bt基因双抗稻米为原料,针对其水稻内源基因SPS和外源基因(包括Bar基因、Bt基因、CaMV35S启动子、Ubiquitin启动子和NOS终止子)设计多重PCR检测体系。结果表明,应用该多重PCR检测体系可快速检测出原料中的全部6条目标基因,检测灵敏度可达0.9%。     

利用实时荧光PCR方法检测转Bt基因大米

应用实时荧光PCR技术对转基因大米进行了定性和定量检测研究.本研究以转基因B163大米为材料,采用TaqMan探针技术,对大米中的内源基因蔗糖磷酸合酶SPS和转基因水稻中普遍存在的外源基因CaMV35S启动子、NOS终止子以及苏云金芽孢杆菌(Bacillusthndngiemis,简写为Bt)杀虫晶体蛋白基因Cry1Ac进行了实时荧光PCR研究,并对外源基因Cry1Ac进行了定量检测和敏感性分析.该实时荧光PCR方法检测结果和常规PCR结果一致,同时不用进行凝胶电泳,更为快速、简便,降低了污染机会,可用于转Bt基因大米的定性和定量检测.     

利用PCR方法检测转BT基因水稻

应用PCR技术进行转基因水稻检测研究。本文以转基因水稻为材料，以聚合酶链式反应（PCR）方法为基础，选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术，针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒（CaMV35S）启动子、胭脂碱合成酶（NOS）终止子、和转入苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简写为Bt）基因水稻的CrylAc片段进行PCR检测，建立适合转BT基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。     

外源蛋白基因对棉籽营养成分影响的研究

本研究通过对转Bt毒蛋白棉花的各种营养成分、矿物质含量、氨基酸含量以及抗营养因予成分的检测与分析，评价Bt等外源基因对棉籽营养成分的影响，为转基因产品的安全评价提供依据。通过检测证明，转基因棉籽和非转基因棉籽在营养学方面具有实质等同性。     

应用简并PCR方法检测转cry1A基因作物

根据不同转基因作物中cry1A基因的保守区序列,建立简并聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）对转cry1A基因作物检测方法。cry1A基因（包括cry1Ab、cry1Ac、cry1Ab/Ac、cry1A.105、mcry1Ac）是抗虫转基因作物中使用频次最高的目的基因,常用作转基因成分筛选检测的靶标。应用Vector NTI Advance 11.5软件将已报道的20余种cry1A基因PCR检测方法中的引物与11 个cry1A基因序列进行比对,结果显示,这些方法的引物序列不能同时与所有cry1A基因序列完全配对,每对引物的错配碱基数均大于3 个,且许多错配发生在引物的3’端,表明这些cry1A基因检测方法理论上仅适用于部分特定的靶标基因。在对MON810、Bt11、Bt176等11 种转基因作物中cry1A基因核苷酸序列进行比对分析基础上,以其5’端的保守核苷酸序列为模板,筛选到1 对简并引物,建立了cry1A基因的简并PCR方法。应用该方法能特异性地检测11种转基因作物中的cry1A基因,检测灵敏度可稳定达到0.1%。该方法为转基因作物中cry1A基因的高效筛选检测提供了一种新的技术手段。     

改良十六烷基三甲基溴化铵-磁珠核酸提取方法及在植物转基因检测中的应用

目的 建立一种快速、高效、便捷的植物基因组DNA提取方法并运用于植物转基因检测。方法 改良传统的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium ammonium bromide, CTAB)方法, 并结合磁珠吸附基因组DNA, 配合核酸自动提取系统提取水稻和加工米粉中的核酸, 荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测Bt63大米转基因成分, 并与另外4种提取方法的结果进行对比, 评价提取效果。结果 5种不同方法中CTAB-磁珠法提取的样品基因组DNA浓度和质量最佳, 荧光PCR检测低浓度Bt63转基因成分(0.01%)的Ct值最小, 检测结果最好。结论 该方法可高效快速地提取植物核酸, 在低含量的转基因成分检测中相比其他几种方法具有绝对优势。     

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for rapid detection of cry1Ab gene in transgenic rice (Oryza sativa L.)

The cry1Ab gene is a foreign gene which encodes Bt insecticidal Cry1Ab protein and was transferred into genomic DNA of plants to acquire insect resistance. Here a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay with high specificity and rapidity under isothermal conditions was developed for detecting cry1Ab gene in transgenic rice. Partial sequence of cry1Ab gene was used as the target template to design LAMP primers. The reaction conditions were optimized as follows: 60 min of reaction time, 1:3 of outer primer and inner primer concentration ratio, 25 μL of reaction volume and 0.6 μM of betaine. The results of detection could be evaluated by the white precipitate or the fluorescence intensity under ultraviolet irradiation, both visible to naked eyes. The sensitivity and specificity of the LAMP assay were further analyzed in comparison with that of regular PCR and real-time PCR. The results showed that the LAMP assay exhibited high specificity and the sensitivity of 3 × 10² copies number of the positive control plasmid, and of 0.5 % genetically modified (GM) contents. In comparison with real-time PCR method, LAMP showed the same results with simple instruments. The amplified reaction could be accomplished in about 1 h, with the results visible to naked eyes. Hence, the LAMP assay developed by this study can provide a rapid and simple approach for detecting cry1Ab gene from transgenic rice plants and rice ingredients in processed foods aimed at screening the growing transgenic crops in the fields and detecting genetically modified (GM) ingredients in imported and domestic foods.     

Detection of genetically modified rice: a construct-specific real-time PCR method based on DNA sequences from transgenic Bt rice

Genetically modified rice varieties developed in China are close to approval for agricultural cultivation and production. However, so far no method has been reported for specific detection of transgenic varieties of this crop. In the present study, rice seeds assumed to consist of field-tested Bt rice (‘Anti-pest Shanyou 63’ and ‘Anti-pest Jinyou 63’) were used as reference material to determine transgenic DNA sequences. The transition between the cryIA(b) and cryIA(c) fusion gene and the nopaline synthase terminator (nos) sequence was used to develop a construct-specific real-time PCR based detection method. This Bt rice specific detection system was combined with a recently published quantitative real-time PCR method for the rice-specific (Oryza sativa L.) reference gene gos9. The complete PCR assay for detection of transgenic Bt rice was in-house validated and the limit of quantification was found to be below 0.1% Bt rice relative to the rice content. Application of the PCR assay should allow more precise detection of transgenic rice varieties in imported food products which are so far not approved in the EU.     

烘焙食品中转基因成分定性检测的FAPAS能力验证结果与分析

目的分析参加FAPAS烘焙食品中转基因成分定性检测能力验证的结果。方法根据FAPAS组织方提供的能力验证作业指导书、国家标准GB/T19495.3-2004转基因产品检测核酸提取纯化方法(部分步骤改进)和行业标准SN/T1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》对一份烘焙食品测试样品进行转基因成分定性检测。结果该样品检出pCaMV35S、tNOS、GTS40-3-2和MON863品系(基因),未检出Bt11、Bt176、GA21、MIR604、MON810、MON88017、MON89034、MON89788、NK603和TC1507品系。结论本实验重点对核酸提取方法进行改进并严格质控,满足了烘焙食品这类加工样品转基因定性检测要求,获得能力验证结果为满意。     

实时荧光定性聚合酶链式反应标准方法检测转基因产品的验证及应用

目的验证实验室大豆、玉米和水稻及其制品转基因检测方法,并应用于实际样品检测。方法根据GB 19495.4-2018《转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法》要求对无转基因标识的样品进行转基因成分检测。结果方法验证满意。40批次样品(大豆、玉米和水稻及其制品)中发现1批次的转基因成分检出,检出率为2.5%。结论市场中绝大部分未标示转基因成分的大豆、玉米和水稻及其制品确实未检出转基因成分,仅有极少数产品含有转基因成分,但未进行有效标识。     

转基因成分分析检测技术研究进展

随着转基因技术在农业领域的迅速应用与发展,转基因产品的种类与数量逐渐增加,转基因产品的安全性也越来越被社会公众广泛关注,世界各国有关转基因产品标识制度不断建立和完善,一些国家规定了转基因成分的最低含量阈值,因此相应的转基因检测技术体系也迫切需要持续的创新与发展。本文简要介绍了国内外常用转基因成分分析检测技术及方法,目前转基因检测主要是基于外源蛋白靶标和外源核酸成分的检测技术及方法,如酶联免疫吸附技术、PCR技术、等温扩增技术、基因芯片技术及数字PCR技术等,并对相应检测技术及方法在国内外转基因成分检测中应用新进展进行了概述,同时对各检测技术的优缺点进行了相应的总结,使人们对于转基因检测技术的现状及发展趋势能够有较为清晰和全面的了解。     

环介导等温扩增技术检测转基因组分的研究进展

随着越来越多的转基因作物获得商业化生产和种植,转基因农产品的安全问题一直都有异议,因此,无论对消费人群还是政府监管部门,快速检测转基因组分都是非常必要。转基因组分的检测通常以核酸为基础进行检测,而环介导等温扩增技术(LAMP)是一种等温条件下核酸扩增技术,具有高特异性、高灵敏度、操作简单、成本低廉、结果可视化及不需要专用设备的特点,已逐渐用于转基因组分的检测中。本文针对LAMP技术的原理、优点、关键技术及其在转基因大豆、玉米、水稻等农产品中的应用做一综述,从而为其更广泛的用于转基因组分的检测提供理论依据。     

利用微滴式数字PCR技术检测大豆毛油中的转基因成分

我国是转基因大豆的进口大国,由转基因大豆加工而成的大豆油成为进入消费者生活的食用油,判定食用的大豆油是否含有转基因成分,是国家监管部门和公众消费者密切关心、关注的问题。大豆油在制备精炼过程中破坏了大豆的DNA,造成检验时DNA富集难度增加,严重影响了大豆油转基因成分检测的准确度。到目前为止,国家已经颁布的标准中没有涉及转基因大豆油的检测标准。本研究利用高灵敏度、精确度的数字PCR技术,并通过优化大豆毛油DNA提取方法和PCR反应体系,对大豆毛油样品进行外源转基因成分检测。检测结果显示,大豆毛油外源转基因成分被成功检测到。实验结果表明,本研究建立的大豆毛油转基因成分检测方法准确可靠,可进行推广应用。