重组大肠杆菌产脂肪氧合酶发酵条件优化

为进一步提高重组大肠杆菌（pET-23a-pse-LOX）产脂肪氧合酶（lipoxygenase,LOX）的酶活力,利用响应面法对其发酵条件进行优化。通过单因素试验确定诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、接种量、培养基初始pH值和装液量对其发酵产酶的影响。在此基础上,采用Plackett-Burman试验设计从7 个因素中筛选出对LOX产量具有显著效应的因素为诱导时机、诱导时间和培养基初始pH值,并利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析以确定其产酶的最优发酵条件,即诱导时机为菌液OD600 nm达到1.6、诱导时间34 h、培养基初始pH 7.0。在此条件下,LOX酶活力为（21 261.60±264.03） U/mL,比优化前的（13 553.96±46.64） U/mL提高了56.87%。     

大豆脂肪氧合酶研究进展

脂肪氧合酶(LOX)是影响食品风味和色泽最重要酶之一。该文介绍大豆脂肪氧合酶特性,探讨大豆脂肪氧合酶酶促反应特征和机理,概述大豆脂肪氧合酶对大豆性质影响,总结降低大豆脂肪氧合酶活性方法。     

脂肪氧合酶的研究

脂肪氧合酶(Lipoxygenase,EC 1.13.11.12)是一类含有非血红素铁的双加氧酶,其催化生成的不饱和脂肪酸氢过氧化物,可作为面粉增白剂和增香剂、抗肿瘤药物前体、涂料与洗涤剂等生产原料,是非常重要的药物合成和化学合成的中间体,具有巨大的市场需求。自1947年Theorell等首次从大豆中获得了脂肪氧合酶的结晶后,研究人员对其展开了广泛的研究。     

重组脂肪氧合酶对面团流变性质及面包品质的影响

通过测定酶促作用前后面筋蛋白（wheat gluten,WG）的自由巯基含量、表面疏水性、黏弹性等的变化,研究了重组脂肪氧合酶（pET-32a-ana-lipoxygenase,ana-rLOX）对水溶性阿拉伯木聚糖（water-solublearabinoxylan,WEAX）和WG相互作用的影响,并探讨了ana-rLOX对面包品质改良的作用。结果表明,与添加WEAX的样品相比,加入ana-rLOX和WEAX后WG的自由巯基含量下降了21%,表面疏水性指数增大,流体动力学半径增大了27.3%,WG的黏弹性明显增加;面包的硬度、胶着性、咀嚼性降低,回复性增强,明显改善了面包品质。     

重组脂肪氧合酶基因工程菌破碎条件优化及其酶活力测定方法研究

建立适用于从重组E.coli中提取重组脂肪氧合酶非机械法的破碎条件。采用化学渗透法、冻融法和酶解法破碎重组E.coli细胞,并采用单因素试验和L25(56)正交试验对细胞破碎条件进行优化。结果表明:溶菌酶添加量为1.5mg/mL、溶菌酶处理时间40min、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)添加量为2.0mmol/L、吐温-60添加量为2%、冻融温度(-70℃冷冻37℃融解)、冻融次数3次,效果最佳,获得粗酶液的脂肪氧合酶(LOX)酶活力为6840U/mL,比优化前(4750U/mL)提高了0.44倍;并在此条件下,比较分光光度法、碘化钾-淀粉法和二甲苯酚橙法测定LOX酶活力,其中碘化钾-淀粉法简单、灵敏、快速,且测定体系具备肉眼可辨的特征颜色,可用于LOX酶活性高通量筛选。     

脂肪氧合酶提取工艺的研究

脂肪氧合酶在塑料工业中的增塑剂制取上有较为广泛的应用前景，其次在青草芳香的自然风味工业上也有较为重要的作用。本文主要阐述了用硫酸铵二次盐析法从大豆低温浸出粕中提取大豆脂肪氧合酶的工艺，通过在不同的温度及pH环境下制取酶液，比较其活性，得出脂氧酶最佳提取条件为温度20℃pH4.5。     

脂肪氧合酶高效制备关键技术研究

正脂肪氧合酶(Lipoxygenase,LOX,EC1.13.11.12)属于氧化还原酶,是一类含有非血红素铁的蛋白质,能够专一催化氧化含有Z,Z-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸,形成具有共轭双键的脂肪酸氢过氧化物的双加氧酶,可作为面粉增白剂和增香剂、抗肿瘤药物前体、涂料与洗涤剂等生产原料,具有巨大的市场需求。由于商品化的LOX主要通过大豆浸提获得,受大豆来源的影响,产品批次间的性质差异较大,不     

脂肪氧合酶在茶叶中的作用

综合叙述了脂肪氧合酶及其在茶叶加工过程中的作用,并据此展望了酶在茶叶加工工艺中的发展前景。     

重组鱼腥藻脂肪氧合酶定点突变及突变酶酶学性质研究

重组鱼腥藻脂肪氧合酶（Ana-LOX）基因来自于Anabaena sp.PCC 7120。利用定点突变技术将Ana-LOX的421位和40位的缬氨酸（Val）突变为丙氨酸（Ala）,获得突变体V421A、V40A和V421A/V40A。野生型Ana-LOX在50℃下半衰期为3.8 min。而突变酶V421A和V40A在50℃的半衰期分别为4.4 min和7.0 min。突变酶V421A/V40A的半衰期为8.3 min,与野生型Ana-LOX相比,提高了1.18倍。相对于野生酶,突变酶V421A、V40A和V421A/V40A的比活力分别提高了4.83%、41.58%、80.07%。突变酶的最适反应温度均比野生酶（35℃）高5℃。改造后的突变酶更能适合工业生产的需要,对于实际应用具有重要价值。      

3种脂肪氧合酶酶活测定方法

采用量压法、分光光度法和KI-淀粉法测定了一系列经不同程度热处理的脂肪氧合酶酶活力.分析了3种方法的优缺点和相关性,结果表明相关性良好,其中,量压法具有最广泛的酶液适用性,分光光度法灵敏度最高,KI-淀粉法更适合于工业化应用.     

小球藻脂肪氧合酶酶学性质研究

从小球藻中提取脂肪氧合酶,并对其酶学性质进行研究。结果表明,以亚油酸为底物,小球藻脂肪氧合酶的最适pH为7.6和9.4,最适作用温度为35℃,Km为104.18mmol/L,Vmax为4.12μmol/min·mg蛋白质,脂肪氧合酶对热不稳定,60℃下处理1h后,活性基本丧失,5mmol/LEDTA可有效抑制酶活,在透析过程中添加0.2mmol/L Ca2+可增强脂肪氧合酶的稳定性。      

小球藻脂肪氧合酶酶学性质研究

从小球藻中提取脂肪氧合酶,并对其酶学性质进行研究.结果表明,以亚油酸为底物,小球藻脂肪氧合酶的最适pH为7.6和9.4,最适作用温度为35℃,Km为104.18mmol/L,Vmax为4.12μmol/min·mg蛋白质,脂肪氧合酶对热不稳定,60℃下处理1h后,活性基本丧失,5mmol/L EDTA可有效抑制酶活,在透析过程中添加0.2mmol/L Ca2+可增强脂肪氧合酶的稳定性.     

脂肪氧合酶的研究及应用进展

脂肪氧合酶广泛存在于植物和微生物中, 作为面粉改良剂如溴酸钾和过氧化苯甲酰的潜在替代品, 是绿色食品添加剂的研究热点。本文详细综述了脂肪氧合酶的发现历史、结构性质、应用、对粮食和果蔬保藏的影响及其提取方法, 并阐明了其最新研究现状。     

脂肪氧合酶及其对啤酒质量的影响

1.前言[1][2]反-2-壬醛是引起啤酒老化变质的主要物质。反-2-壬醛与脂肪氧合酶之间有着密切关系。用含有脂肪氧合酶的麦芽制得的麦芽汁，其中含有反-2-壬醛，这说明它是脂肪酸的酶催化或非酶氧化反应的产物，脂肪氧合酶是催化脂肪酸转化为壬醛的酶。脂肪氧合酶在啤酒的酸败过程和异味物的形成中起了关键作用。2．脂肪氧合酶对啤酒质量的影响[2]脂肪氧合酶催化的底物是自由脂肪酸，在啤酒生产中，自由脂肪酸主要来自类脂物质的分解。类脂物的含量占大麦子重的4．4％以上，主要存在于胚中的脂粒和糊粉层中。在发芽过程中，大麦中类脂物的含量…     

脂肪氧合酶催化亚油酸影响因素的研究

脂肪氧合酶催化亚油酸生成13位的氢过氧化物（HPOD），在过氧化物酶的作用下可生成具有青草芬芳的自然风味的化合物。为了得到大量的具有该种风味的化合物，本文对其中间产物13S－HPOD的形成因素作了研究，利用分光光度法进行检测，由实验得出：在底物浓度为2.54mmol/L，pH9，温度为0－5℃，缓冲液体积为30％时，生成的HPOD的量最大。     

麦芽脂肪氧合酶及其对啤酒新鲜度的影响

以脂肪氧合酶（LOX）为主的脂质降解途径是影响啤酒新鲜度的重要途径之一,本文检测了34个国内麦芽生产厂家的麦芽LOX活力水平,包括13个麦芽品种,共573个样本,大量数据显示不同麦芽生产厂之间的麦芽LOX活力差异很大,表明麦芽生产厂的制麦工艺和控制水平相差很大。又分析了316个麦芽LOX活力和麦芽感官品质指标的关系,发现高LOX活力麦芽的生青味较重,麦香较差,表明麦芽LOX活力影响着麦芽质量。通过啤酒中反-2-壬烯醛的添加品评试验,确立了反-2-壬烯醛对啤酒新鲜度的影响很大;又跟踪分析了分别使用低、高LOX活力麦芽的强制老化酒反-2-壬烯醛含量和新鲜度得分,明确了可用麦芽LOX活力来预测啤酒新鲜度。对糖化工艺进行优化试验,确定了试验条件下的最优蛋白休止温度和pH值,可降低脂肪氧合酶的作用,减少老化物质反-2-壬烯醛的生成及对啤酒新鲜度的影响。     

环糊精抑制脂肪氧合酶活性的影响因素探究

研究了环糊精抑制脂肪氧合酶催化活性的影响因素,单因素实验发现环糊精浓度、反应体系的温度、pH以及Fe3+和Fe2+均影响环糊精抑制脂肪氧合酶活性的行为;正交实验发现,在温度35℃,pH4.0,环糊精浓度为10mmol/L,Fe3+浓度为0.005μmol/L,Fe2+浓度为0.01μmol/L的条件时,环糊精抑制脂肪氧合酶达到最好抑制效果。以上结果表明,环糊精能够直接与脂肪氧合酶发生作用,从而抑制脂肪氧合酶的活性,但该行为受环境条件的影响。本文为CD-酶超分子体系的研究以及CD在大豆除腥中的应用提供一定的参考。      

大豆脂肪氧合酶同工酶活性的影响因素研究

通过不同pH,不同离子、金属络合物和抗氧化剂对从脱脂豆粕提取的酶液中脂肪氧合酶同工酶活性影响的研究,结果显示,在中性和碱性条件下,脂肪氧合酶(Lipoxygenase,简称Lox)活性有不同程度的降低;Na 不同化合物中,Na2CO3对脂肪氧合酶的抑制性最好;离子对脂肪氧合酶都有不同强弱的激活作用,其中Ca2 对Lox-2和Lox-3有着强烈的激活作用;络合物中酒石酸对Lox的抑制效果较好;抗氧化剂中抗坏血酸对Lox的抑制效果优于茶多酚.     

鱼腥藻脂肪氧合酶热稳定性提高的分子动力学模拟

为提高鱼腥藻脂肪氧合酶(Anabaena sp.PCC 7160 lipoxygenase,Ana-LOX)的热稳定性,探索其热稳定性机制。通过同源建模预测了Ana-LOX的三维结构,并通过分子动力学模拟技术手段分别模拟了Ana-LOX于298 K和320 K条件下在水溶液中的运动轨迹,计算均方根偏移与均方根涨落后,以均方根涨落为热稳定性评价指标,结合作用力分析,预测不稳定区域。结果表明:Ana-LOX的T94、I96、A325~Q327区域柔性较大,是导致Ana-LOX热不稳定的关键区域。通过I96V定点突变后,半衰期提高到野生型的2.5倍,验证了原预测结果的有效性,从而为脂肪氧合酶分子的热稳定性改造提供了理论依据。     

白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶的分离纯化与鉴定

采用硫酸氨沉淀和羟基磷灰石柱层析法分离白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX),同时采用反相高效液相(RP-HPLC)检测其反应产物,对鲢鱼肌肉LOX 进行鉴定,并研究鲢鱼肌肉LOX 的底物特异性。结果表明：白鲢鱼肌肉LOX 催化花生四烯酸主要形成12- 氢过氧化物,12-LOX 是鲢鱼肌肉中主要的LOX;白鲢鱼LOX的最适底物是亚麻酸。