葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗氧化活性比较研究

在体外模型上,对人工养殖的葛仙米藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行比较研究。通过考察羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力,对葛仙米中藻胆蛋白粗提物、藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗氧化活性进行评价。体外抗氧化作用结果显示藻胆蛋白、藻红蛋白和藻蓝蛋白都有明显的抗氧化作用,但作用方式和抗氧化程度也有不同,在羟基自由基清除试验中,抗氧化活性由强到弱依次为藻胆蛋白藻蓝蛋白藻红蛋白;在超氧阴离子清除试验中藻红蛋白≧藻蓝蛋白藻胆蛋白;在抑制脂质过氧化试验中藻红蛋白藻胆蛋白藻蓝蛋白。人工养殖的葛仙米中藻蓝蛋白、藻红蛋白及藻胆蛋白粗提物具有很好的体外抗氧化活性,但三者抗氧化方式略有差异。     

葛仙米藻胆蛋白提取工艺及藻蓝蛋白稳定性研究

对葛仙米藻胆蛋白的提取工艺及其稳定性进行了研究。采用单因素实验优化葛仙米藻胆蛋白的提取工艺。结果表明，NaCl浓度为0．24mol／L，pH7及提取时间为4．2h时，藻胆蛋白的得率最高，分别为7．004％，7．438％，5．924％；藻蓝蛋白的稳定性实验表明，藻蓝蛋白在30℃以下，酒精浓度在10％以下，pH值在6～8的范围内比较稳定，     

鱼腥藻藻蓝蛋白的抗氧化作用

目的:探讨鱼腥藻藻蓝蛋白(AnabaenaPhycocyaninAPC)的体外抗氧化作用。方法:采用化学比色法测定APC在体外的(1)总抗氧化能力;(2)抑制活性超氧阴离子自由基(O2·)的能力;(3)清除羟自由基(·OH)的能力;(4)在其作用下的小鼠肝组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的变化。结果:一定浓度范围内不同纯度的APC均有总抗氧化能力,能清除O2·和·OH及抑制MDA的生成,且呈现一定剂量关系。结论:APC在一定浓度范围内具有抗氧化作用。     

葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗炎和抗紫外活性比较研究

目的:对葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎和抗紫外活性进行体外比较研究。方法:通过Lipopolysaccharide(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α,比较葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎活性;通过Ultraviolet radiation B(UVB)辐照诱导NIH-3T3成纤维细胞损伤,考察藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗紫外损伤活性。结果:体外抗炎结果显示LPS能极显著诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α(P<0.01),藻蓝蛋白和藻红蛋白均能极显著抑制LPS诱导RAW264.7分泌的NO和TNF-α的含量水平(P<0.01),其中藻红蛋白抑制NO分泌能力高于藻蓝蛋白,藻蓝蛋白对TNF-α的分泌抑制作用高于藻红蛋白。体外抗紫外损伤结果显示UVB 4000 mJ/cm²可以成功诱导NIH-3T3细胞的紫外损伤,但是藻蓝蛋白和藻红蛋白对NIH-3T3细胞的紫外损伤并无明显保护作用。结论:葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白具有很好的体外抗炎活性,但两者对UVB诱导的细胞损伤并无明显保护作用。     

葛仙米藻胆蛋白和藻蓝蛋白对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及其作用机制

目的:对人工养殖的葛仙米藻胆蛋白和藻蓝蛋白在S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及作用机制研究。方法:通过考察S180荷瘤小鼠肿瘤体积、小鼠脏器指数和肿瘤组织切片观察,对葛仙米中藻胆蛋白、藻蓝蛋白的体内抗肿瘤活性进行评价,并初步研究了其作用机制。结果:体内抗肿瘤作用结果显示,葛仙米藻胆蛋白12.5、25、50 mg/kg剂量组对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为11.19%、20.14%、37.65%。葛仙米藻蓝蛋白12.5、25、50 mg/kg剂量组对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为19.74%、35.00%、52.06%。藻蓝蛋白能够明显促进抑癌蛋白P53和促凋亡蛋白Bax的表达,抑制凋亡抑制蛋白Bcl2的表达。结论:葛仙米藻蓝蛋白高剂量组可显著减少S180肉瘤细胞的增殖,葛仙米藻蓝蛋白低、中剂量和葛仙米藻胆蛋白高剂量也有一定的抑制作用,人工养殖的葛仙米中藻胆蛋白和藻蓝蛋白具有较好的体内抗肿瘤活性。     

重组别藻蓝蛋白（holo-apcB）的抗氧化活性研究

本研究利用代谢工程技术原理在重组大肠杆菌表达合成了嗜热聚球藻(Thermosynechococcus elongatus BP-1)别藻蓝蛋白β亚基(holo-apcB),并利用亲和层析的方法对holo-apcB进行了分离纯化。SDS-PAGE电泳胶图显示,holo-apcB分子量与18.4 ku的蛋白条带相近,与理论分子量吻合。光谱学分析结果显示,其最大吸收峰为615 nm,最大荧光发射峰为640 nm,与天然别藻蓝蛋白β亚基具有相同的分子量和光谱学性质。在55℃条件下,holo-apcB的半衰期高达31.9 h。以嗜热聚球藻天然别藻蓝蛋白(APC)及脱辅基别藻蓝蛋白β亚基(apo-apcB)为参照,分析了holo-apcB的抗氧化活性。结果显示,holo-apcB具有最强的抗氧化能力,其清除羟自由基和氢过氧自由基半数抑制浓度(IC50)分别为224.9μg/mL和20.6μg/mL,显著低于apo-apcB和天然APC的IC50,这表明holo-apcB中的藻蓝胆素也参与了抗氧化过程。     

藻蓝蛋白抗氧化肽的制备工艺研究

研究了藻蓝蛋白抗氧化肽制备的最佳酶解工艺及抗氧化活性。以还原能力为考察指标,藻蓝蛋白为底物,木瓜蛋白酶为水解酶,采用正交设计优化水解条件。结果表明,影响藻蓝蛋白抗氧化肽制备的各因素排列顺序为:时间>温度>pH值>[E]/[S],制备藻蓝蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为温度50℃、时间为3h、[E]/[S]1:20、pH7.0,此条件下制备的藻蓝蛋白抗氧化肽还原能力最强为0.948。另外藻蓝蛋白抗氧化肽对超氧阴离子和羟基自由基均具有显著的清除作用,且表现出一定的量效关系。     

葛仙米藻胆蛋白与色度降解动力学

以葛仙米藻胆蛋白为原料,研究pH值、温度和光照对其色度和含量的影响,建立葛仙米藻蓝蛋白及其色度的降解动力学,结果发现pH 3色素溶液在可见光区几乎没有藻蓝蛋白特征吸收峰,随pH值增加藻蓝蛋白特征吸收峰值逐渐增强,至pH 6达最高,之后逐渐下降;pH值增加藻蓝蛋白特征峰有轻微的蓝移效应。pH 4色素溶液Hunter-b最小,其蓝色最深,且每种pH值色素溶液的Hunter-b差异极显著。藻蓝蛋白在50 ℃半衰期分别是60 ℃和70 ℃的8.09 倍和11.05 倍;而色度在50 ℃半衰期分别是60 ℃和70 ℃的29.17 倍和72.74 倍。     

葛仙米藻胆蛋白的提取工艺优化及其纯化研究

以葛仙米为原料,研究葛仙米藻胆蛋白的超声辅助提取工艺。以藻胆蛋白提取率为评价指标,对提取工艺中葛仙米粉粒径数、超声功率、处理方法、液料比、提取时间、提取温度共6个因素进行单因素试验,并结合响应面分析对提取工艺进行优化。结果表明:采用超声辅助处理方法(超声功率700 W),当葛仙米粒径数120目~200目、液料比58∶1(m L/g)、提取温度42℃、提取时间6 h时,葛仙米藻胆蛋白的提取率达到最大为26.13%,达到预测值的99.54%。采用一步离子交换树脂层析法纯化藻蓝蛋白(Phycocyanin,PC)和藻红蛋白(Phycoerythrin,PE),经聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、凝胶过滤色谱(Gel filtration chromatography,GFC)、紫外可见吸收光谱(Ultraviolet-visible absorption spectroscopy,UV-Vis),藻蓝蛋白纯度达到93%,藻红蛋白纯度83.5%。     

逐级盐析法结合双水相萃取纯化葛仙米藻蓝蛋白

利用逐级盐析法结合双水相萃取对葛仙米藻蓝蛋白进行纯化,设计三因素二次回归正交旋转组合试验对提取工艺进行优化,并应用Design-Expert 7.0软件建立了各影响因素与萃取纯度的数学回归模型。结果显示最佳的提取工艺为:20%(NH4)2SO4盐析去沉淀后用40%和50%(NH4)2SO4盐析得藻蓝蛋白,再用质量分数10%的聚乙二醇6 000、质量分数18%的(NH4)2SO4进行双水相萃取。所得产物纯度可达到8.6,回收率为71.40%。对所得产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得到清晰的两条条带(条带1和条带2),其分子质量分别在35 ku和15 ku左右。通过质谱分析可知,条带2的分子质量为15 ku左右,等电点5.35,部分肽的氨基酸序列为TPLTEAVAAADSQGR和DIGYYLR。通过SWISS-MODEL网站模拟蛋白质结构得出,条带2可能是葛仙米藻蓝蛋白的α亚基。     

碱液和木瓜蛋白酶预处理对葛仙米多糖提取效果的影响

多糖的保健功能日益得到学术界的重视与证实。葛仙米中含有丰富的多糖。以碱液和木瓜蛋白酶对葛仙米进行预处理,正交试验确定最佳预处理工艺。多糖提取条件为料水比1:300,于90℃水浴提取2次,2h/次。结果说明,以木瓜蛋白酶预处理葛仙米,按100mg葛仙米加入10ml水充分吸胀后,加入含1.5mg木瓜蛋白酶的缓冲液,在50℃的水浴条件下,经过10h预处理后,葛仙米多糖得率最高,为29.53%。以NaOH溶液预处理葛仙米,最佳的条件是0.4mol/L的浓度,于40℃处理2h,多糖得率可高达35.15%。将碱与酶结合使用,则多糖的得率可以高达47.56%,比对照高出25.12%。     

反复冻融法在葛仙米破壁技术上的应用

葛仙米营养价值较高，但传统的加工方法使人体不易吸收其营养成分，为了能使人体更有效的利用其营养成分，本文以葛仙米为原料，采用反复冻融法进行破壁处理，并以葛仙米中蛋白质的溶出率作为破壁指标。实验结果表明，反复冻融法可以一定程度的破坏细胞壁，其最佳破壁条件为：将葛仙米粉在0℃保持30min，取出研磨，如此反复3次，并且于30℃，pH7时进行提取，做壁效果最好，蛋白质的溶出率最高。     

发状念珠藻胞外多糖的抑菌与抗炎作用

采用BG-11培养液,悬浮培养发状念珠藻,提取发状念珠藻胞外多糖。通过测滤纸片周围抑菌圈直径大小,研究发状念珠藻胞外多糖抑菌作用;通过研究发状念珠藻胞外多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响及对角叉菜胶致小鼠足跖肿胀的影响,探究它的抗炎性能。结果表明,发状念珠藻多糖在一定的质量浓度范围内对研究的几种细菌及青霉和红曲霉都有一定的抑菌作用,而对根霉无抑制作用;其能够有效缓解二甲苯和角叉菜胶引起的小鼠耳部与足部炎症。发状念珠藻胞外多糖具有一定的抑菌抗炎性。     

超声波辅助提取发菜藻蓝蛋白工艺的优化

以发菜细胞干粉为原料,超声波辅助提取藻蓝蛋白。在单因素试验的基础上,选取液固比、超声功率和超声时间为影响因子,Box-Behnken中心组合设计3因素3水平试验,回归分析确定最优提取条件。结果表明,超声波辅助提取发菜藻蓝蛋白的最佳工艺条件为:液固比172:1(mL:g)、超声功率540W、超声时间11min,在此条件下藻蓝蛋白得率为4.49%。     

地木耳多糖的抗氧化性与抑菌作用

利用水提醇沉法从地木耳中提取多糖,再经初步纯化后,进行多糖的抗氧化性及抑菌作用实验.结果表明,地木耳多糖对·OH和DPPH自由基有较强的清除作用,且最高清除率分别为71.53％和66.35％.但地木耳多糖对O2-·自由基和亚硝酸盐几乎没有作用效果,最高清除率分别只有33.33％和22.38％.地木耳多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,最小抑菌质量浓度MIC在125～250μg/mL之间.而对金黄色葡萄球菌的抑制作用不明显.     

葛仙米多糖体内抑瘤及对免疫的影响

实验采用50、100、200mg/kg bw·d的葛仙米水溶性多糖对接种S180的昆明雌性小白鼠进行了10d的注射给药,并以20mg/kg bw·d环磷酰胺为对照,测定了瘤重、胸腺指数、脾淋巴细胞转化、细胞活性和迟发超敏反应(DTH)及体内抗氧化指标,以探讨葛仙米多糖的抑瘤效果和对肿瘤所致免疫力下降的作用.结果表明:葛仙米多糖显著抑制小鼠肿瘤的生长,且抑瘤率呈剂量效应,其高中低剂量抑瘤率分别为64.08%、38.24%和29.91%,对肿瘤所致小鼠细胞免疫力包括脾淋巴细胞转化、NK细胞活性、迟发型变态反应(DTH)下降有显著抑制作用,但是对小鼠血液和肝脏的氧化指标无显著影响.