脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原的研制

本研究利用丁基硼酸封闭DON的7,15-羟基,戊二酸酐酰化3-羟基合成3-HG-DON,通过活泼酯法将3-HG-DON偶联到载体蛋白OVA,制备检测抗原。采用CDI法将DON分子与载体蛋白MBSA偶联制备的免疫抗原免疫3只BALB/c小鼠,经4次免疫后,1号小鼠血清抗体效价达1∶25600,且小鼠抗DON多克隆抗体与DON-HG-OVA的结合能被DON阻断。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化产物的培养提取及制备

以禾谷镰刀菌Fusarium graminearum大型分生孢子定量接种大米培养物,制备毒素粗提液,采用硅胶柱一步洗脱分离、分段收集可同时获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）和乙酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇（acetyldeoxynivalenol,AcDON）,采用一步结晶法即可分别制备获得毒素纯品,并经红外光谱法、液相色谱-质谱联用技术及核磁共振氢谱等分析确证,液相色谱分析表明两种毒素纯度均大于98%。该培养提取及分离制备方法改变了常规多步骤繁琐过程,提供了一种切实有效的、大量制备纯化DON及乙酰化DON毒素的简便方法。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫检测方法的建立

应用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体12D1建立了竞争间接ELISA方法,用于检测小麦、玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为20ng/mL,检测范围为20￣460ng/mL。用蒸馏水提取掺合DON(250￣4000ng/g)的小麦样品,回收率为82.1%￣96.6%,变异系数为0.6%￣7.1%。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的生物降解研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)作为分布最广泛的镰刀霉毒素之一,不但给全球粮食产业造成巨大经济损失,也给人类健康带来潜在威胁。文中对清除脱氧雪腐镰刀菌烯醇的物理、化学和生物方法进行了综述,为在食品中有效控制其水平提供了思路。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA定量检测试剂盒的研制*

研制了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒,用于检测谷物粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxyni-valenol,DON).在抗DON单克隆抗体的基础上,用间接竞争酶联免疫吸附检测试剂盒各项指标.结果为:试剂盒最低检测浓度为20 ng/mL,检测线性范围为50～400 ng/mL,IC<,50> 103 ng/mL.平均加标回收率>80%,批内变异系数小于10%,批间变异系数<15%.用试剂盒测定盲样,其结果与德国拜发试剂盒及免疫亲和柱-高效液相色谱检测结果无显著性差异.说明试剂盒指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、准确、方便等特点.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物脱毒的研究进展

脱氧雪腐镰刀茵烯醇作为谷物及其制品中最常见的真菌毒素之一,严重威胁着人类和动物的健康。由于物理、化学脱毒方法存在着营养成分流失、脱毒不彻底等问题,而不能被广泛应用。微生物通过酶促反应将毒素转化成低毒或者无毒物质的生物脱毒方法不仅避免了这些缺点,还具有条件温和、安全环保的优点,是一种理想的脱毒方法。对近年来国内外脱氧雪腐镰刀茵烯醇的生物脱毒研究进展进行了概述,并对脱毒菌株、脱毒酶、脱毒方式及脱毒产物等研究内容作了重点介绍,旨在为脱氧雪腐镰刀菌烯醇的生物脱毒研究提供参考。     

酿酒过程中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇是大麦、麦芽和啤酒中主要的真菌毒素,不仅影响大麦的发芽率、影响啤酒的风味,还会导致啤酒喷涌。本文参照国内外研究资料,阐述了酿酒过程中脱氧雪腐镰刀茵烯醇的变化情况。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的物理和化学脱毒方法研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)主要污染小麦、玉米、大麦和燕麦等谷类作物,并可带入至面包、面条、麦片、饼干、啤酒和饲料中,是一种世界性粮食及其制品污染物。DON毒素具有较强的化学稳定性,在食物链中可持续对人和动物造成危害。DON毒素的脱毒方法主要包括物理、化学及生物脱毒。详细论述了加热、吸附、辐照等物理方法及碱性试剂、氧化试剂、还原试剂等化学试剂对DON毒素的影响,为降低DON毒素的潜在危害提供参考。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）又名呕吐毒素,是一种有很强细胞毒性、胚胎毒性、一定致畸性、弱致癌性且影响免疫系统的真菌毒素。重点介绍了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒检测法,以及用此法检测的抚顺地区2008年产部分玉米样品在2009年夏季DON的平均含量。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA定量检测试剂盒的研制

研制了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒,用于检测谷物粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)。在抗DON单克隆抗体的基础上,用间接竞争酶联免疫吸附检测试剂盒各项指标。结果为:试剂盒最低检测浓度为20ng/mL,检测线性范围为50～400ng/mL,IC50103ng/mL。平均加标回收率>80%,批内变异系数小于10%,批间变异系数<15%。用试剂盒测定盲样,其结果与德国拜发试剂盒及免疫亲和柱-高效液相色谱检测结果无显著性差异。说明试剂盒指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、准确、方便等特点。     

盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定

目的：获得敏感性高,特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride,CLO）鼠源多抗血清。方法：以CLO的衍生物盐酸阿可乐定（Apraclonidine hydrochloride,ACLO）为半抗原,采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和鸡卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）偶联,合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA。采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清。利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果：合成的人工抗原免疫效果较好,所获小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800以上,其中3号小鼠敏感性最好,半数抑制质量浓度（IC₅₀）为82.75 ng/mL,与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9%,特异性良好。结论：通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原,并获得敏感性高,特异性强的CLO鼠源多抗血清。     

玉米赤霉烯酮多克隆抗体的制备及特性分析

合成玉米赤霉烯酮半抗原,应用液相色谱-质谱联用法进行鉴定,并采用活泼酯法将半抗原与载体蛋白OVA或BSA偶联,分别作为免疫原或包被原,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描法鉴定偶联效果,免疫3只BALB/c小鼠,制备玉米赤霉烯酮多克隆抗体。结果表明:抗血清效价最高达1∶32 000,以此多抗建立的玉米赤霉烯酮间接竞争标准曲线IC50为39.8ng/mL,IC10为0.71ng/mL,多抗与玉米赤霉烯酮类似物β-zearalenol、zear-alanone、α-zearalanol、β-zearalanol交叉反应率分别为4.80%,3.07%,0.96%,0.09%。说明试验成功制备了玉米赤霉烯酮人工抗原及高特异性多克隆抗体。     

2,4-二氯苯氧乙酸人工抗原合成及鼠源多克隆抗血清的制备

采用碳化二亚胺法(EDC法)将2,4-D与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,合成免疫原2,4-D-BSA和包被原2,4-D-OVA,采用紫外扫描(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法进行鉴定;用2,4-D人工免疫抗原(2,4-D-BSA)免疫BALB/c纯系小鼠,采用间接ELISA测定多抗血清效价、阻断ELISA鉴定其抑制。结果表明:BSA与2,4-D偶联后,波峰出现右移,表明偶联成功;SDS-PAGE电泳中BSA的泳动速度大于2,4-D-BSA,表明2,4-D已与BSA成功偶联;6只小鼠血清效价均达到了1:1.28×104,且1号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制IC50为72.48ng/mL,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力较高的鼠源抗2,4-D多克隆抗体血清,为2,4-D残留免疫学检测方法的建立奠定了良好的基础。     

除草剂莎稗磷多克隆抗体的制备

根据莎稗磷的化学结构特征,设计合成莎稗磷半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白偶联,免疫新西兰大耳白兔获得抗莎稗磷多克隆抗血清用于免疫分析试验。抗血清效价高达1∶160 000,100μg/L莎稗磷的抑制率达到了59.76%。抗体经Protein A-Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,50μg/L莎稗磷的抑制率提高到92%,其它有机磷农药及结构类似化合物与抗体的交叉反应率均小于0.01%,表明了所制备莎稗磷抗体的高特异性。     

沙丁胺醇多克隆抗体的制备与鉴定

为了对沙丁胺醇进行酶联免疫吸附法(ELISA)测定,通过四种方法制备沙丁胺醇衍生物,分别将其与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,制备人工完全抗原,采用紫外分光光度法测定蛋白质浓度并计算偶联比,用所制备的四种免疫原免疫新西兰白兔获得抗沙丁胺醇(SAL)抗体,每一种抗体都用四种包被抗原进行配对筛选,据此得到最佳的抗体-包被抗原的组合,对筛选出的抗体用正辛酸-硫酸铵法进行纯化,采用间接ELISA法测定多克隆抗体(pAb)的效价并进行特异性鉴定。结果表明:成功偶联了完全抗原,四种免疫原的偶联比分别为9:1、6:1、6:1、12:1,得到最佳的抗体-包被抗原的组合,筛选出的抗体效价达到1:64000,此抗体对克伦特罗和特布他林的交叉反应率分别为144%和169%,对其他类似物几乎没有交叉反应。本研究为沙丁胺醇、克伦特罗和特布他林多残留酶联免疫检测法的建立奠定了基础。     

丙烯酰胺多克隆抗体的制备

通过活化酯法制备了三种丙烯酰胺人工抗原并进行动物免疫,得到高效价抗体,经测定三种抗血清效价分别为1∶32000、1∶40000、1∶80000.比较三种人工抗原,使用对巯基苯甲酸衍生方法获得的抗体对衍生产物表现了很高的特异性,经测定针对1μg/mL衍生产物的抑制率达到80.7％,而针对丙烯酰胺及对巯基苯甲酸均无交叉反应.本研究为建立快速检测食品中丙烯酰胺残留的ELISA方法奠定基础.     

消旋氧氟沙星抗体制备及其手性识别特性研究

采用活泼酯法（A）和直接EDC（1-乙基-3-（3-二甲氨丙基）碳二亚胺盐酸盐）法（D）,合成两种包被抗原（OFL-A-OVA和OFL-D-OVA）和两种免疫抗原（OFL-A-BSA和OFL-D-BSA）,然后分别用两种免疫抗原免疫小鼠获得与其对应的多克隆抗体,建立消旋氧氟沙星残留免疫检测方法。研究结果表明：紫外扫描图谱证明四种抗原均合成成功,OFL-A-BSA、OFL-D-BSA、OFL-A-OVA和OFL-D-OVA的偶联比分别为19.67、3.03、1.93和0.99。消旋氧氟沙星的间接竞争ELISA法的线性检测范围为16.35～444.10ng/mL,IC50为5.42ng/mL,最低检测限为6.23ng/mL。消旋氧氟沙星抗体与恩诺沙星、环丙沙星、加替沙星等其他同类药物的交叉反应率较低,表明消旋氧氟沙星抗体具有较高的特异性,且消旋氧氟沙星抗体对左旋氧氟沙星和右旋氧氟沙星的识别并非对等,对左旋的识别能力较大,左旋氧氟沙星对抗体的产生起主要作用。     

脱氧雪腐镰刀烯醇（呕吐毒素）酶标抗原的合成及免疫抗体的制备

利用琥珀酸酐法合成了脱氧雪腐镰刀烯醇-琥珀酸酐衍生物(3-HS-DON),并用DCC法将该衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到的结合物(DON-HS-BSA)作为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶10000的特异性抗脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)的抗体。同时,用EDC法将3-HS-DON与辣根过氧化物酶(HRP)偶联得到酶标抗原(DON-HS-HRP)。通过圆二色光谱(CD)看到偶联后蛋白二级结构发生了改变,酶活稍有下降;用分光光度法测得酶标抗原酶活损失<5%,偶联物中DON与HRP的结合比为5.29。说明:该酶偶联物及制备的抗体可作为酶联免疫吸附法(ELISA)或免疫传感器法测试脱氧雪腐镰刀烯醇时所需的酶标抗原及抗体。     

新霉素酶联免疫检测方法的研究——新霉素抗体的制备

以碳化二亚胺作为偶联剂,分别将新霉素(Neomycin,NEO)和牛血清白蛋白(Bovine serum albu-min,BSA)、血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)进行偶联,得到偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO。对BSA、KLH、NEO及其偶联产物BSA-NEO、KLH-NEO进行红外光谱分析,结果显示偶联产物的红外光谱中同时存在载体蛋白和NEO的特征吸收峰,初步证明偶联成功;将偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO作为新霉素免疫抗原,分别免疫新西兰大白兔,成功获取新霉素抗血清,间接ELISA法测得抗血清效价可达1.28×105以上。     

甲硝唑人工抗原的合成及鼠源多抗的制备

为了获得效价高、特异性好的甲硝唑（metronidazole,MNZ）的小鼠多抗血清,采用琥珀酸酐法将甲硝唑上的羟基改造成羧基,然后通过碳二亚胺法把改造后的甲硝唑分别与牛血清白蛋白（albumin from bovine serum,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）进行偶联,制备免疫原MNZ-BSA和包被原MNZ-OVA。经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步鉴定偶联成功。将免疫原MNZ-BSA分成20 μg/只和50 μg /只2 个剂量分别免疫8 周龄的BALB/c小鼠。获得了效价高、特异性好的小鼠多抗血清,效价均达到1∶104以上,IC50值为61.39 ng/mL。