利用PCR方法检测转BT基因水稻

应用PCR技术进行转基因水稻检测研究。本文以转基因水稻为材料，以聚合酶链式反应（PCR）方法为基础，选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术，针对转基因水稻中普遍存在的花椰菜花叶病毒（CaMV35S）启动子、胭脂碱合成酶（NOS）终止子、和转入苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis，简写为Bt）基因水稻的CrylAc片段进行PCR检测，建立适合转BT基因水稻的检测方法。该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符。     

利用PCR方法检测转基因大豆加工食品中的修饰基因

市场上的转基因产品以及深加工产品越来越多,其安全性引起全世界的极大争论,很多国家的检验检疫机构相继开展了转基因产品的检测工作。本文以转基因大豆类食品为材料,以聚合酶链式反应(PCR)方法为基础,选择适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术,针对抗除草剂Round up Ready (RR)大豆的插入基因进行PCR检测,建立适合转基因大豆类食品的检测方法．该方法简便快速、检测结果与标准及其他文献资料相符．     

转基因水稻定性PCR检测体系的建立

采用PCR技术检测CaMV35S启动子、NOS终止子、Bt基因,判断水稻样品中是否含转基因成分,建立了稳定快速的转基因水稻定性PCR检测体系.PCR检测的灵敏度达到0.1%,稳定性良好.结果表明:PCR技术检测外源基因是灵敏和准确的,可以广泛地应用到转基因作物及其加工产品的转基因成分检测中.此外,进一步讨论了转基因成分检测中存在的问题、转基因产品标识的必要性和目前转基因检测技术在检测中的问题.     

复合PCR荧光检测方法检测转基因水稻品系

建立一种高通量的转基因复合聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）荧光检测方法,该方法通过对转基因检测内源、外源及品系基因检测引物进行荧光标记,经复合PCR扩增和毛细管电泳荧光检测,实现特异性强、高通量检测。结果表明,复合PCR荧光检测方法检测4 种转基因水稻品系特异性好,并且灵敏度达到0.1%,可以在进出口检验检疫、食品安全监测等领域进行应用。     

实时荧光定性聚合酶链式反应标准方法检测转基因产品的验证及应用

目的验证实验室大豆、玉米和水稻及其制品转基因检测方法,并应用于实际样品检测。方法根据GB 19495.4-2018《转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法》要求对无转基因标识的样品进行转基因成分检测。结果方法验证满意。40批次样品(大豆、玉米和水稻及其制品)中发现1批次的转基因成分检出,检出率为2.5%。结论市场中绝大部分未标示转基因成分的大豆、玉米和水稻及其制品确实未检出转基因成分,仅有极少数产品含有转基因成分,但未进行有效标识。     

多重PCR 检测转基因水稻的转基因成分

以水稻内源基因SPS、外源抗虫基因Cry1Ab、外源抗虫基因Cry1Ab/Ac、外源抗虫基因Btc、报告基因GUS、NOS终止子和CaMV35S启动子为检测对象,设计7对引物,通过优化PCR扩增体系中不同引物浓度的配比及退火温度,建立水稻转基因成分的七重PCR检测体系。结果表明：建立的七重PCR体系能有效检测出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的转基因成分,检测过程简便、特异性好。     

应用多重PCR-液相悬浮芯片技术检测转基因水稻品系

开展转基因水稻的多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）液相芯片检测方法研究。针对科丰6号（KF6）、科丰8号（KF8）、华恢1号（BT63）、克螟稻（KMD1）、M12、T1C-19、T2A-1、LL62和LL601九种转基因水稻的侧翼序列,设计合成了在生物素标记的多重PCR扩增引物与固定在荧光编码微球上的探针,建立了2 个多重PCR-液相芯片检测体系,可同时检测出这9 种转基因水稻成分。结果表明,9 种转基因水稻的引物和探针都具有较高的特异性,各组引物/探针之间无交叉扩增和非特异杂交,且在多重PCR-液相芯片检测中9 种转基因水稻品系的相对检测灵敏度达到0.1%水平,符合欧盟和其他国家有关转基因产品标识的要求。本方法的检测效率和准确性均高于传统方法,可作为进出口转基因产品和国内转基因检测的有效方法。     

利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数

为分析转基因水稻外源基因拷贝数，利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了14株T0代的转基因水稻植株，得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株，同时利用Southern Blot方法进行验证分析。随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株，用Southern Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数，Southern Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的，3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southern Blot的分析结果，主要原因是Southern Blot方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时，转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段，电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生，除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。     

Fapas大豆粉中转基因成分检测能力验证结果与分析

目的提升实验室检验人员的检验水平,扩大实验室影响力,增强竞争力。方法根据Fapas组织方提供的能力验证作业指导书及GB/T19495.4-2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》和SN/T1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》对一份100%大豆粉测试样品进行转基因成分检测。结果该批次大豆粉样品pCaMV35S、tNOS、Roundup Ready(GTS-40-3-2)品系检出转基因成分, MON89788品系未检出转基因成分。结论本次能力验证结果为满意。     

进口玉米酒糟粕中转基因品系检测方法的比较研究

以美国进口玉米酒糟粕(DDGS)中转基因玉米品系MIR162的实时荧光PCR检测方法为研究内容,分别采用3种常见商业化试剂盒提取基因组DNA,采用3个检测标准中规定的实时荧光PCR方法进行MIR162定性检测,比较了9种方法组合在检测玉米酒糟粕中转基因成分的检测技术性能。结果表明,使用TIANGEN?植物基因组DNA提取试剂盒和《SN/T 1196—2012转基因成分检测玉米检测方法》规定的荧光PCR方法,检测灵敏度最高,符合现行检验监管法规要求。考虑到大宗农产品及其加工产品的国际贸易普遍存在转基因成分低水平混杂的情况,进一步探讨了进口农产品转基因成分检验监管分类管理的必要性,提出针对不同风险级别的进口农产品采用灵敏度相适宜的检测方法。     

Genetically modified maize and soybean on the Egyptian food market

The results of a survey study on food samples produced from genetically modified soybean and maize collected from the Egyptian market are presented. Forty samples of soybean and 40 samples of maize products have been gathered randomly from markets in Cairo and Giza. The genetic modification was detected by polymerase chain reaction (PCR) using official detection methods according to section 35 of the German Foodstuffs Act. Samples were investigated for the presence of material derived from the following genetically modified organisms (GMOs) all of which are approved for food use in Europe: Roundup Ready soybean (RRS) and maize lines Bt176, Bt11, T25 and MON810. In addition, samples were examined in qualitative and quantitative analysis for the presence of material derived from the transgenic maize line StarLink (Aventis) which was approved for animal feed use exclusively in the US. Twenty % of 40 investigated soy samples contained Roundup Ready soybean; 15% of 40 maize samples tested positive for Bt176 and 12.5% positive for Bt11 maize. Furthermore, the presence of StarLink maize could clearly be demonstrated in four samples mixed with Bt176 and Bt11. The percentage of StarLink was less than 1% in quantitative analysis. The maize lines T25 and MON810 were not detected.     

转基因食品及其发展

介绍转基因食品的概念及其与传统食品的区别,建议性地提出新的转基因食品分类法,概述转基因食品的研究现状和安全评价体系,分析转基因食品的潜在危险性,阐述转基因食品的检测方法和技术并探讨了其发展趋势,详细叙述转基因食品标识法的历史进程和现状,展望转基因食品的发展前景。     

转基因食品的检测方法进展

为满足转基因食品标记的需要，必须检测鉴定食品中外源基因或其基因产物的有无。对转基因食品检测的方法进行了综述。     

Screening of genetically modified organisms and specific detection of Bt176 maize in flours and starches by PCR-enzyme linked immunosorbent assay

Polymerase chain reaction (PCR)-enzyme linked immunosorbent assays (ELISAs) targeting either the 35S promoter or the Bt176 specific junction sequence were developed to screen for the presence of genetically modified organisms (GMOs) and specifically detect Bt176 maize in flours and starches. Two additional PCR-ELISA assays were developed to validate the results: one, based on the detection of the maize alcohol dehydrogenase 1 promoter specifically detected the presence of maize, and the other, based on the detection of a conserved sequence of plants ( 26S ribosomal RNA gene), validated the extracted DNA amplification. The PCR-ELISA assays developed here were highly specific and found to be as sensitive as the reference Southern hybridisation assay. The PCR-ELISA tests were at least 6 times more sensitive than gel electrophoresis and allowed 0.1% GMOs to be detected in Bt176, Bt11, Mon810 maize and Roundup Ready soybean. The PCR-ELISA tests are a method of choice for GMO screening and identifying Bt176 maize in flours and native starches. They may offer a cheaper alternative to the expensive real-time PCR assays and may be useful in laboratory GMO monitoring.     

食物中潜在致敏物质的评价研究进展

食物中的潜在致敏物质包括天然存在和人工修饰两种来源,转基因食品的致敏性一直是其食用安全性评价的重要部分,本文以转基因食品为例对食物中潜在致敏物质的评价策略和方法研究进展进行了综述。     

转基因食品安全评价及展望

介绍了转基因食品的实验室操作步骤和外源基因在转基因动、植物上的表达方法，同时叙述了目前国内外在转基因食品方面所采用的先进的检测手段，探讨了人们对转基因食品的安全性评定及其现存的危害，最后展望了转基因食品的发展前景。     

美国转基因食品强制标签立法及对我国的启示

2016年7月29日,美国总统奥巴马签署了《国家生物工程食品披露标准》法案,使其正式成为法律。这标 志着美国转基因食品标签制度发生了重大改变,由自愿标签制度转变为强制标签制度。该法案一方面明确要求披露 转基因食品信息,保障消费者的知情权;另一方面又以产品为导向,允许使用包括通过智能手机扫描二维码在内的 多种形式披露转基因信息,便于食品生产者履行义务。美国转基因食品强制标签制度在一定程度上均衡了消费者和 生产者的利益,对完善我国的转基因食品标签制度具有一定的借鉴意义。     

转基因食品成分分析检测技术研究进展

随着转基因研发技术的快速发展及在农业领域产业化应用的不断推进,抗逆、抗病和高产优质的转基因(genetically modified,GM)作物品种日渐增多。但转基因食品(genetically modified food,GMF)在带来极大经济效益同时,其安全性也备受争议。因此,世界各国不断建立和完善GM产品标识制度,有些国家甚至规定了转基因成分(genetically modified ingredients,GMIs)具体阈值限量。为更好地对GMF安全性提供评价,识别和量化转基因成分(GMIs)检测技术的持续创新与发展尤为重要。本文从基于外源核酸水平的检测技术和基于外源蛋白的检测技术两个方面,系统介绍了定性PCR技术、定量PCR技术、等温扩增技术、基因组测序技术、酶联免疫吸附技术、免疫层析试纸条技术以及较新的CRISPR/Cas核酸检测技术等重要技术的原理、应用情况和研究进展,并总结分析各转基因食品成分检测技术的优缺点和亟需解决的难点问题,以期为促进GMF快速、准确及高通量检测技术发展,为确保我国GMF安全的高效准确的监督提供有效支撑。