不同分子质量米糠多肽的抗氧化活性

采用截留分子质量为10000、3000D超滤膜对碱性蛋白酶水解米糠蛋白的水解液进行分离,获得不同分子质量(Mw)的米糠多肽混合物组分,以6种抗氧化活性指标对米糠多肽混合物组分的抗氧化活性进行评价。结果表明:米糠多肽的抗氧化活性与蛋白分子质量大小密切相关。Mw>10kD的米糠多肽对.OH的清除能力最强,属于活性氧自由基清除的抗氧化机制;Mw3～10kD的米糠多肽对Fe3+螯合能力最强,属于金属离子螯合的抗氧化机制;Mw<3kD的米糠多肽对O-2.的清除能力、DPPH自由基的清除能力、ABTS+.清除能力和Fe3+还原能力最强,属于电子转移(SET)的抗氧化机制。不同分子质量的米糠多肽抗氧化活性随多肽质量浓度的增加而增加。     

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析

以桃仁蛋白为原料,对响应面法优化多肽制备条件和酶解多肽各组分的抗氧化活性进行了研究。结果表明:以底物浓度3.5%、pH 10.4、加酶量4 200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度(61.12±0.7)%和多肽得率(67.91±0.5)%。桃仁蛋白及其酶解物的SDS-PAGE凝胶电泳图表明,酶解后的多肽分子质量大部分小于12 000 u。酶解液(PPH)及其超滤分离所得4组分分别采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试,结果显示不同分子质量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P0.05),分子质量越小,其抗氧活性越强。RP-HPLC分析表明,抗氧化活性最强的P-IV组主要由9种具有一定疏水性的多肽组成。     

芸豆蛋白抗氧化组分在大豆油热氧化过程中的抗氧化作用

为了寻找高效、安全性好的食用油脂天然抗氧化剂,利用差示热量扫描技术,采用非等温线和等温线分析方法,评价英国红芸豆蛋白抗氧化组分(相对分子质量1 000 u,1 000～3 000 u,3 000～5 000 u)在植物油热诱导中的抗氧化作用。研究结果表明,三种相对分子质量组分均具有抗氧化作用,其中相对分子质量为1 000～3 000 u的组分抗氧化活性最强。在β=10℃/min升温速率下,大豆油中添加相对分子质量为1 000～3 000 u的抗氧化组分后,起始氧化温度比未添加的大豆油高13. 3℃,大豆油热氧化反应的活化能提高了18.6℃。可见,芸豆蛋白抗氧化组分在植物油热氧化中具有抗氧化作用,能增加大豆油热氧化稳定性。研究为进一步探讨芸豆蛋白抗氧化组分的抗氧化机理提供了参考。     

亚麻籽粕制备小分子抗氧化活性肽

目的:以亚麻籽粕为原料,提取蛋白并制备抗氧化活性肽。方法:利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解蛋白,并通过测定总抗氧化能力(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)、羟自由基清除能力和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力表征酶解产物的活性。使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和凝胶色谱法分析蛋白和酶解产物的分子质量(mw)分布。利用高效液相色谱-串联质谱联用技术分析鉴定最具有抗氧化活性组分。结果表明,对于高分子质量(3～10 kDa)和低分子质量(3 kDa)的蛋白多肽,低分子质量多肽(碱性蛋白酶)的抗氧化活性优于其他。10 mg/mL低分子质量多肽(碱性蛋白酶)的FRAP相当于(1.77±0.03)mmol/L的FeSO_4,羟自由基清除率为(57.13±1.47)%,清除ABTS阳离子自由基的能力(以Trolox当量浓度计算)为(1.19±0.03)mmol/L。通过凝胶色谱分离的最具抗氧化活性组分F2的蛋白质量占整体组分的20%,0.1 mg/mL组分F2的FRAP相当于0.29 mmol/L的FeSO_4,占整体组分活性的45.3%。亚麻籽粕蛋白氨基酸组成齐全,含人体所需的8种必需氨基酸,是一种优质的植物蛋白;蛋白酶解的特异性和肽段分子质量共同影响亚麻籽蛋白多肽的抗氧化活性;亚麻籽粕可以制备高抗氧化活性多肽。     

大豆抗癌肽的分离纯化及分子量分布

为确定具有抗癌活性大豆多肽的分子量,对大豆抗癌肽粗提物进行超滤,采用MTT法(四噻唑蓝比色法)对得到的不同组分超滤液进行抗癌活性检测,初步确定分子量在5000～10000u范围的组分具有最高的抑癌活性,大豆抗癌肽的IC50为0.47mg/mL。用葡聚糖SephadexG-75凝胶柱对该组分进行进一步分离,收集各洗脱组分并进行抗癌活性研究。结果显示:组分A4具有最佳的抗癌活性,其IC50为0.37mg/mL。根据分子量标准曲线,得到其平均相对分子质量为6723u。     

不同分子量小麦面筋蛋白酶解多肽的分离及其抗氧化活性研究

采用截留分子量为10 000、5 000、3000 u超滤膜对小麦面筋蛋白中性蛋白酶水解液进行分离,分别获得WG-10,WG-5,WG-3,WG-0等不同分子量的多肽混合物组分;并结合DPPH自由基清除率、Fe3+还原能力、羟基自由基清除能力和超氧阴离子清除能力等抗氧化指标,对所获得各组分的活性进行评价对比.结果表明,WG-0组分抗氧化活性最强,具有较强的应用价值.     

乳清蛋白源铜螯合肽抗氧化活性评价

对以脱盐乳清蛋白粉为原料的乳杆菌A-2代谢产物中铜离子螯合活性多肽进行分离纯化并进行其抗氧化活性的评价。采用铜离子固定化金属离子亲和层析柱分离,筛选具有铜离子螯合活性多肽,得组分F1、F2、F3,分别经Sephadex G-15凝胶过滤柱层析经进行脱盐分离,得到组分F1-1、F1-2、F2-1、F2-2、F3-1、F3-2,采用ABTS法与抗氧化指数（oxygen radical absorbance capacity, ORAC）法进行抗氧化活性测定,组分F2-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC₅₀值为（3.068±0.15） g/L,组分F3-1的清除ABTS阳离子自由基能力IC₅₀值为（5.510±1.56） g/L;组分F2-1的相对ORAC值为（1 246.59±0.72）μmol TE/g,组分F3-1的相对ORAC值为（518.83±1.15）μmol TE/g。组分F2-1、F3-1与铜离子螯合率分别为（59±1.45）%和（6±0.32）%。结果表明,组分F2-1、F3-1具有铜螯合活性组分,具有良好的抗氧化活性。该实验为...     

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究

从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.     

超滤膜分离鲍鱼内脏酶解物及其体外抗氧化活性的研究

利用超滤膜对鲍鱼内脏酶解物进行分离,考察了各分子量段酶解物的成分组成和抗氧化活性。利用截留分子量为10000 u、3000 u、500 u的超滤膜分离得到FA、FB、FC和FD等四个组分中,FA组分的总糖和蛋白含量分别为34.06%和17.20%,而FB、FC和FD等组分主要是由蛋白组成,其游离氨基酸含量分别高达23.20、25.4、28.68 g/100g。根据Tricine-SDS-PAGE和β-消除反应的分析结果,表明FA中位于间隔胶的高分子组分(HMWF)含有N-糖苷键结合的糖蛋白,而分子量为25 ku的成分主要是蛋白。凝胶渗透色谱数据表明FB、FC和FD的分子量主要分布在300 u左右。另一方面,体外抗氧化结果表明,在低浓度下FA组分具有较强的DPPH自由基清除活性和还原力;当质量浓度高于5 mg/m L时,各超滤组分的DPPH自由基清除活性无明显差异,但FB、FC和FD组分的还原力明显高于FA组分;不管是低浓度还是高浓度,FB、FC和FD组分的羟自由基清除活性都明显高于FA组分。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

分子量对酪蛋白多肽抗氧化活性的影响

在对酪蛋白酶解产物制备工艺进行优化的基础上,对不同分子量抗氧化肽(>3ku,1～3ku,<1ku)的抗氧化活性进行了评价。首先对酶的种类、酶底物比及水解时间进行了单因素实验,最终确定采用碱性蛋白酶,在pH8.0,55℃,底物浓度5%,酶底物比0.192AU/g的条件下,酶解4h所得水解物抗氧化活性最高。经过超滤和凝胶过滤层析分离获得不同分子量的抗氧化肽,并采用2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS+.)、羟自由基和超氧自由基清除活性评价其抗氧化性。结果表明,ABTS+.清除活性与分子量呈负相关(r=-0.898,p<0.01),分子量低于1ku组分活性最强(2mg/mL,Trolox当量为2.08±0.05mmol/L);分子量低于3ku的抗氧化肽羟自由基清除活性较高(IC50:1～3ku,4.43±0.03mg/mL;<1ku,4.35±0.06mg/mL);分子量高于3ku组分主要分布在3～5ku,超氧自由基清除活最强(10mg/mL,66.1%±1.0%)。     

模拟胃肠道消化对大豆低聚肽结构及抗氧化作用的影响

大豆低聚肽是一种有益健康的功能性配料,所呈现的健康益处高度依赖于肽结构。采用紫外全波长扫描法及圆二色光谱法分析其结构是如何受胃蛋白酶、胰蛋白酶以及先胃蛋白酶后胰蛋白酶处理的影响。为探讨消化处理前、后大豆低聚肽抗氧化能力的变化规律,分别计算消化前、后大豆低聚肽的ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)和铁离子还原能力(FRAP)。结果显示:大豆低聚肽主要为分子质量<1000 u的组分,经胃蛋白酶、胰蛋白酶及先胃蛋白酶后胰蛋白酶处理后<1000 u的组分比例最大可达88.46%。在波长275 nm处均有最大吸收峰。二级结构中,4组大豆低聚肽中无规则卷曲所占比例均为30%左右,约占总二级结构组成的1/3,表明了大豆低聚肽无序性较高且结构疏松开放。大豆低聚肽的ABTS自由基清除能力和铁还原能力稳定性均较好。经胰蛋白酶消化后,DPPH自由基清除率有所降低,氧自由基吸收能力极显著提高(P<0.01)。     

杜仲籽粕水解肽的制备及其抗氧化活性分析

以碱提酸沉得到的杜仲籽粕蛋白为原料,以水解度和总抗氧化能力（T-AOC）为指标,在单因素实验的基础上,以酶添加量、酶解时间和底物浓度为考察因素,采用Box-Behnken法进行三因素三水平响应面试验优化设计得出杜仲籽粕水解肽的制备最佳工艺参数,并对得到的杜仲籽粕水解肽进行体外抗氧化测定。结果表明,中性蛋白酶为最优蛋白酶,最佳酶解条件为酶添加量10000 U/g,酶解时间1.50 h,底物浓度20 g/L,在该条件下的水解度为47.45%±1.50%,T-AOC为30.62±0.59 μmol/g;最佳工艺下得到的杜仲籽粕水解肽,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基以及ABTS自由基清除率的IC₅₀值分别为0.731、4.258、0.407 mg/mL,表现出良好的抗氧化性,为杜仲籽粕高值化利用及抗氧化肽功能产品开发提供理论依据。     

Purification and identification of antioxidant peptides from corn gluten meal

Corn gluten meal was hydrolyzed by alkaline protease and Flavourzyme to obtain the antioxidant peptides. The antioxidant activities of the hydrolysates or peptides were evaluated by free radical scavenging capacity (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl/2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) diammonium salt/hydroxyl radical/superoxide radical anion), metal ion (Fe²⁺/Cu²⁺) chelating activity and lipid peroxidation inhibitory capacity. The hydrolysates were separated by ultrafiltration, and those with molecular weight <10 kDa exhibited highest antioxidant activity in all relevant assays. The hydrolysates were subsequently purified by gel filtration chromatography, and fraction F3 showed the highest antioxidant activity. Three peptides were identified from fraction F3 using LC–ESI–Q–TOF MS/MS as Leu-Pro-Phe (375.46 Da), Leu-Leu-Pro-Phe (488.64 Da) and Phe-Leu-Pro-Phe (522.64 Da). These peptides exhibited good free radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effect. Thus, corn gluten meal may be used as a potential source of antioxidant peptides for food and nutraceutical applications.     

Purification,characterization, and in vitro digestion of novel antioxidant peptides from chicken blood hemoglobin

The study aimed to purify and characterize antioxidant peptides from chicken blood hemoglobin hydrolysate. The fraction M₂ (< 3 KDa) with the strongest antioxidant activity was isolated by ultrafiltration, and its DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical) free radical scavenging rate, ABTS [2,2′-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)] free radical scavenging rate, and iron ion chelation activity were 82.91%, 77.49%, and 80.99%, respectively. After in vitro digestion, the antioxidant capacity of chicken blood hydrolysate was significantly higher than that before digestion (p < 0.05). M₂ exhibited the strongest antioxidant activity after stomach digestion, with a DPPH radical scavenging rate and iron ion chelating power of 82.91% and 79.61%, respectively. Component A was purified from M₂ by Sephadex G-25 gel chromatography. The peptide sequences were identified by LC-MS/MS from fraction A, and four peptides, AEDKKLIQ (944.54 Da), APAPAAK (625.36 Da), LSDLHAHKL (1033.57 Da), and LSNLHAYNL (1044.54 Da) were synthesized using the solid-phase peptide method, among which APAPAAK was a novel antioxidant peptide. Molecular docking was used to simulate the binding of these four peptides to the key active site of Keap1 via hydrogen bonding. This study suggests that chicken blood may provide a new natural source of antioxidant peptides.     

体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响

本实验以金瓜籽为原料,以还原力、羟自由基清除率、DPPH自由基清除率为考察指标,采用响应面试验探讨了制备金瓜籽抗氧化肽的工艺参数,并研究了其经体外模拟人体胃肠道消化后的游离氨基酸组成、分子质量分布及抗氧化活性变化。结果表明：制备金瓜籽抗氧化肽的最优工艺条件为底物（金瓜籽粕）质量分数为6%、添加碱性蛋白酶3%、在pH?8.5的体系中55?℃酶解90?min,此条件下所得羟自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力分别为（58.19±0.80）%、（60.27±1.73）%和0.49±0.01;分子质量小于3?kDa、3～5?kDa及大于5?kDa的抗氧化肽经体外模拟胃肠道消化后分别含游离氨基酸41.72%、36.94%和33.93%,其主要为分子质量小于500?Da的肽段,占比分别为73.50%、60.15%和53.30%;与消化前相比,消化产物对羟自由基的清除能力分别提高了26.04%、29.06%和34.43%,还原力分别提高了50.98%、64.53%、67.35%。该研究可为金瓜籽抗氧化肽作为功能性抗氧化剂的生产和应用提供参考。