以酒糟为基质的高温型生物有机肥复合发酵菌剂的制备

以从高温酒糟中分离得到的DX[地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)]、XX[空气芽孢杆菌(Bacillus aerius)]、DF[产色高温单孢菌(Thermomonospora chromogena)]、M1[微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)]、M4[嗜热篮状菌(Talaromyces thermophilus)]、M5[黑曲霉(Aspergillus niger)]以及M6[肿梗根毛霉(Rhizomucor tauricus)]为菌种,首先对菌株做拮抗性试验,然后分别制备各菌株的单菌剂,以Plackett-Burman试验设计方案,以堆肥腐熟的各项指标为响应值来确定高温发酵菌剂的最优配比。复配后以一定的接种比例接种到酒糟中进行小规模试验。结果表明:菌株之间无拮抗作用,最优复合菌剂J7组的复配比例为:m(DX)∶m(XX)∶m(M1)∶m(M4)∶m(M5)∶m(M6)∶m(DF)=1. 0∶2. 0∶3. 0∶3. 0∶0. 5∶2. 0∶6. 0,其有效活菌数为8. 532×109CFU/g,种子发芽指数(GI)为86%。该菌剂在堆肥的有效活菌数以及种子发芽指数方面优于市售高温菌剂J13和J14。高温酒糟经过复合菌剂堆积发酵之后,可以作为生物有机肥,这对充分利用酒糟资源,改善环境污染有着积极的作用。     

枯草芽孢杆菌QDH-1-1对采后苹果青霉病的抑制效果

目的研究一种从番茄叶面分离获得的拮抗菌--枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)QDH-1-1对苹果采后青霉病的防治效果.方法通过拮抗菌的不同处理、使用浓度及与钙配合等方法研究了枯草芽孢杆菌对青霉病的抑制作用.结果表明拮抗菌使用浓度明显地影响苹果中病斑发生和病斑扩展,且使用浓度越大,其抑病效果越好.当拮抗菌的使用浓度达到109CFU/mL时,可完全抑制接种在苹果上的青霉菌(Penicillium expansum,104CFU/mL)的侵染.用108～109CFU/mL的拮抗菌与2%CaCl2配合对苹果采后青霉病的抑制效果明显地好于单独使用相同剂量的拮抗菌或2%CaCl2.拮抗菌的不同处理对病原菌孢子萌发的抑制效果与体内试验结果一致.结论枯草芽孢杆菌QDH-1-1主要通过营养和空间竞争作用抑制病原菌生长.     

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25 ℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25 ℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。     

采后番木瓜果实炭疽病病原菌分离鉴定及其拮抗菌的筛选

从采后发病番木瓜果实上分离炭疽病的病原菌,同时采用平板对峙法和滤纸片法从番木瓜果园土壤中筛选得到炭疽菌的拮抗菌W-2。通过形态学和分子生物学分别鉴定了病原菌和拮抗菌相关种属,并测试了拮抗菌W-2的拮抗活性。结果表明:番木瓜炭疽病病原菌鉴定为番木瓜炭疽菌Glomerella magna,拮抗菌W-2为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。拮抗菌W-2能够引起Glomerella magna菌丝体膨大和孢子畸形,且W-2浓度为1×108 CFU/mL时,对菌丝生长抑制作用最强,浓度为1×108和1×109 CFU/mL时,对孢子萌发的抑制作用最为显著(P<0.05)。活体生防实验表明,浓度为1×108 CFU/mL的W-2菌悬液处理能够有效控制番木瓜果实炭疽病病斑的扩展,并显著降低果实的发病率(P<0.05)。     

烟草黑胫病不同植物源生防菌的筛选及防效测定

植物内生菌是生防菌剂的宝贵资源,在作物病害生物防治中具有重要作用。本文采用稀释平板法从8种不同植物茎组织中分离内生菌,采用二次平板对峙法筛选拮抗菌,通过形态观察、生理生化反应及16S rDNA分析鉴定菌种,利用盆栽和田间试验检验其生防防效,并测定其促生作用。结果表明:分离出内生菌共89株,其中烟草疫霉菌拮抗效果较好的菌株6株,分别为J11、J21（构树）,T3、T23（马铃薯）,G3（枸杞）和KY（烟草）。KY被鉴定为亚麻假单胞菌（Pseudomonas lini）,J11、G3和T3为蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,T23为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）,J21为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。KY、T23及J11的相对防效较好,盆栽相对防效分别为75.41%、63.93%、70.49%,大田相对防效分别为63.62%、51.11%、52.67%,且对烟株的株高、茎围均有促生作用。      

发酵型梨果仙人掌酒的研制

以广东云浮郁南县优质成熟梨果仙人掌为原料,对发酵型梨果仙人掌果酒发酵工艺进行研究,通过正交试验及感官品评和理化指标检测,确定其生产工艺为:将梨果仙人掌破碎后,添加750mg/L的复合果胶酶进行酶解浸渍,酶解温度为11℃,时间12h,酶解完成后,添加混合菌酵母0.5g/L在13℃下进行发酵,7d后进行清汁分离,并按要求补加糖分后继续发酵,使其最终酒度在15%vol。最后经陈酿、澄清、冷冻、除菌过滤、包装后得到酒体丰满、晶莹剔透,呈橙黄色、口感纯正、醇厚甘甜的梨果仙人掌果酒。     

乳酸菌肉品发酵剂的选择

从发酵肉制品中分离、纯化乳酸菌132株，对它们的主要发酵特性进行了测定，以生产干发酵香肠誓前篓，从中选出4株乳酸菌优选菌株R17、P20、P30和J33。4株菌生长速度有显著差异，温度对其生长速度有显著的影响。其中R17和P20之间没有拮抗关系，可以作为混合发酵剂。P30和J33可以作为单菌发酵剂。     

一株防治花生采后黄曲霉污染的拮抗菌的筛选及其防控效果

为预防花生储藏过程中的黄曲霉污染,从农田土中分离出2株拮抗芽孢杆菌,通过平板对峙法优选出1株作为研究对象,研究其对黄曲霉的抑制效果及对花生采后黄曲霉污染的防控效果。采用平板对峙法检测拮抗菌的抑菌广谱性并绘制生长曲线,并通过生理生化实验、形态特征观察及16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定。结果表明：优选出拮抗菌B419作为研究对象,其可有效抑制黄曲霉的生长,在拮抗菌浓度为1.0×10⁶ CFU/mL,黄曲霉孢子浓度为1.0×10³ CFU/mL时,黄曲霉孢子萌发抑制率达到98%;相比拮抗菌无菌发酵滤液和拮抗菌细胞悬浮液,拮抗菌发酵液防治花生黄曲霉污染效果最好;该菌株对互隔交链孢霉、枝孢霉、青霉、拟盘多毛孢等多种霉菌都有抑制作用,对大肠杆菌、酵母菌也有抑制作用;该菌株在培养4 h后进入对数期,14 h达到最大,26 h后进入衰亡期;该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。综上,分离的拮抗菌B419对多种微生物都有抑制作用,不仅可以用来预防花生储藏过程中的真菌污染,在防治植物微生物病害方面也具有良好的应用潜力。     

果蔬保鲜中拮抗菌生物防治研究进展

拮抗菌具有天然、生态友好、安全高效等优点,其在果蔬保鲜上的研发和应用一直是研究者们关注的焦点。拮抗菌可降低果蔬采后腐烂损失,已经开发为各种新型生物防治菌剂用于各行各业。本文对近年来果蔬保鲜中拮抗菌的作用机制、筛选方法及其研发情况进行了综述,归纳了拮抗菌在不同水果和蔬菜病害控制中的应用研究,同时分析了目前拮抗菌研究存在的问题并对其前景进行了展望。     

晚熟桃采后褐腐病致病菌的分离鉴定及拮抗菌对其防治效果的研究

为了明确晚熟桃采后褐腐病的主要致病菌以及拮抗菌对其防治效果,以晚熟桃品种"映霜红"为试材,采用传统的形态学方法和18S-rDNA分子生物学方法对褐腐病病原菌进行分离鉴定,同时,进一步选用四种拮抗菌对晚熟桃褐腐病进行预防处理,研究其对晚熟桃褐腐病的生物防治效果。结果表明,从晚熟桃上分离的褐腐病病原菌属于真菌界子囊菌门(Ascomycota),柔膜菌目(Helotiales),核盘菌科(Sclerotiniaceae),核盘菌属(Sclerotinia),该病菌有伤接种发病率为100%。四种芽孢杆菌B001、B1、HB-2、B579对褐腐病病斑扩展均具有较好抑制效果,其中,B001、B579提前1 d和2 d预防效果显著好于0 d预防效果(p<0.05);B1、HB-2提前1 d预防处理显著好于其他两组(p<0.05)。四种拮抗菌还能够抑制晚熟桃贮藏过程中的V_C、可溶性固形物、可滴定酸含量降低和硬度下降。芽孢杆菌在晚熟桃采后褐腐病的生物防治中具有较好的应用潜力。     

拮抗砀山梨炭疽菌的内生菌筛选及抑菌效果分析

从健康砀山梨中分离出15 株内生菌,筛选出1 株对砀山梨胶孢炭疽菌抑菌活性较高的菌株,命名为DSL-9,初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。DSL-9菌株对炭疽菌的抑制主要是通过胞外分泌物作用的结果。采用硫酸铵沉淀法获得DSL-9的粗蛋白提取液,蛋白提取液在30～60?℃抑菌率无明显变化,大于60?℃抑菌率下降;在pH?7～10区间抑菌活性较高,且无明显变化;紫外线对抑菌物质无明显影响;蛋白提取液经蛋白酶处理后,抑菌活性下降。研究内生菌DSL-9对感染炭疽菌砀山梨防御酶活性的影响,发现内生菌DSL-9可提高砀山梨果实对病菌的抗性。从砀山梨中分离筛选的枯草芽孢杆菌DSL-9?对砀山梨炭疽病害的生物防治具有潜在的应用价值。     

采后硅酸钠处理对苹果梨黑斑病的影响

以苹果梨作为实验材料,研究硅酸钠处理对苹果梨采后黑斑病的影响,实验结果表明:体外试验硅酸钠对黑斑病具有抑制作用,其中100mmol/L的硅酸钠抑制率达94.5%。     

枯草芽孢杆菌BJ3-2精氨酸脱羧酶基因speA的克隆与序列分析

根据GenBank中枯草芽孢杆菌168菌株的精氨酸脱羧酶基因speA序列设计特异性引物,提取Bacillus subtilis BJ3-2基因组DNA进行PCR扩增,并克隆至pGEM-T载体后测序。序列分析结果表明,Bacillus subtilis BJ3-2 speA基因ORF长为1 473 bp,可编码490个氨基酸,分子质量为53.53ku,基因登录号为KJ561348,与已报道枯草芽孢杆菌的speA基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均达93%以上,精氨酸脱羧酶氨基酸序列系统进化树分析,发现Bacillus subtilis BJ3-2的ADC与Bacillus subtilis 168亲缘关系最近,属于典型的III型PLP依赖型鸟氨酸/赖氨酸/精氨酸脱羧酶家族成员。speA基因序列分析及其蛋白保守结构域的分析,为有效控制水豆豉产品中生物胺含量的研究提供了理论依据。     

枯草芽孢杆菌基因的安全改良研究

为了构建能稳定表达外源基因且无抗性标记基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,分两段扩增定位于B.subtilis BJ3-2染色体上的谷氨酰胺酶基因(glsA)上下游基因片段作为同源臂。将同源臂及卡那霉素基因(Kan)克隆入温敏型载体pKSV7,构建了双交换载体pKUKD。并利用pKUKD质粒将kan基因定点整合入BJ3-2染色体上,通过Kan抗性筛选获得glsA敲除菌株BJ-kan。经检测BJ3-2菌株谷氨酰胺酶活力比重组菌株高3.2倍。结果显示:BJ3-2染色体上的基因可通过同源重组方式进行敲除与置换,为今后BJ3-2菌株以及野生型B.subtilis基因敲除与置换提供了更加便捷的方法。     

柠檬形克勒克酵母复合CaCl2处理对采后黄花梨果实轮纹病的控制

研究柠檬形克勒克酵母复合CaCl2处理对采后黄花梨果实轮纹病的控制效果及相关机理。结果表明：采用1×108 CFU/mL柠檬形克勒克酵母结合2% CaCl2处理黄花梨果实对其采后轮纹病有显著的控制效果,且明显优于酵母或CaCl2单独处理。在20 ℃条件下培养,柠檬形克勒克酵母能在果实伤口处迅速定殖生长,并持续保持较高水平,2% CaCl2对酵母生长状态无显著性影响。同时,柠檬形克勒克酵母与CaCl2结合使用能显著诱导黄花梨果实过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性的增强。研究结果说明了柠檬形克勒克酵母结合2% CaCl2处理能够用于控制黄花梨果实采后轮纹病,诱导果实抗病性是其作用机制之一。     

海水酵母菌的分离鉴定及其在果实贮藏保鲜中的应用

本文研究了海水酵母菌对果实腐烂病的防治效果以及其在梨和苹果果实采后贮藏保鲜中的作用。通过显微观察结合分子生物学方法对分离的菌株进行鉴定,结果表明该菌与酵母菌(Galactomyces geotrichum)同源性相近,属于酵母菌类。通过平板抑菌试验及活体试验研究该菌对腐烂病菌的拮抗作用,发现该菌对腐烂病菌具有明显的拮抗作用,活体试验结果表明,5×107 CFU/m L该菌对接种了5×104 spores/m L病原菌的梨和苹果果实腐烂病具有良好的防治效果。经该菌悬浮液浸泡处理的采收后的梨果实,贮藏20 d时的腐烂率比对照少20%,贮藏60 d苹果的腐烂率比对照减少了30%。另外,该菌处理能够延缓梨和苹果果实的软化速率,保持果实较高的营养品质。本研究表明,从海水中分离的酵母菌在果实腐烂病的生物防治和果实保鲜方面具有极大的应用潜力。     

梨果实及其制品中真菌毒素的污染、检测及控制方法研究进展

梨果实营养丰富, 水分含量较高, 在生产、采收和贮运过程中易受病原菌侵染, 特别是在贮藏期间发生真菌性病害后腐烂霉变, 产生并积累各种真菌毒素。本文首先介绍了链格孢毒素、展青霉素、橘霉素和黄曲霉毒素的毒性和在梨果实及其制品中的污染状况, 其次, 对在梨和其制品中应用的薄层色谱法和液相色谱-质谱联用法的特点和应用实例进行了综述, 最后, 总结了果品中真菌毒素的降解方法, 并对有效防控真菌毒素的重点研究方向进行了展望。当前国内对于梨果实及其制品中真菌毒素的研究报道很少, 今后应加强这方面研究, 明确当前真菌毒素的种类以及污染水平, 并重点开展有效防控真菌毒素的研究, 提高我国梨果实及其制品的质量安全水平。     

枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B.subtilis LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B.subtilis LN基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B.subtilis LN中,获得重组菌B.subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌B.subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B.subtilis LN提高了115%。     

传统发酵霉豆渣菌种分离鉴定及其产酶能力分析

为实现豆渣的高值化利用,解决豆渣资源浪费以及霉豆渣规模化生产受限的问题。本研究以湖北咸宁传统发酵霉豆渣为材料进行微生物分离鉴定,共得到5种细菌和3种霉菌,分别命名为J1~J8。根据形态学观察、生理生化特征分析、16S rRNA及ITS测序结果,最终确定J1~J5分别为水生拉恩氏菌属B13菌株(Rahnella aquatilis strain B13)、戊糖片球菌属S1菌株(Pediococcus pentosaceus strain S1)、成团泛菌属NSD菌株(Pantoea agglomerans strain NSD)、肠膜明串珠菌属2020GS202菌株(Leuconostoc mesenteroides strain 2020GS202)和枯草芽孢杆菌属A10菌株(Bacillus subtilis strain A10),J6~J8分别为层出镰刀菌CanR-8菌株(Fusarium proliferatum strain CanR-8)、黑曲霉DZ-4-3-1菌株(Aspergillus niger strain DZ-4-3-1)和总状毛霉M-22菌株(Mucor racemosus f. racemosus strain M-22)。8株菌产酶能力测定结果表明,枯草芽孢杆菌(J5)产蛋白酶和纤维素酶的能力最强,分别达到153.247和66.552 U/mL,其他菌株的产酶能力相对较低。枯草芽孢杆菌、总状毛霉和黑曲霉可能是传统霉豆渣营养与特殊风味形成的主要发酵菌种。     

The use of microbial metabolites against post-harvest diseases of longan fruit

Summary  The effect of different concentrations of polyoxin and culture supernatant of Bacillus subtilis was tested against rot fungi on longan cv. Shixia fruit. Both have good control of rot caused by Botryodiplodia . Control of the fungus was better at the higher concentrations of the two treatments. Control of fruit decay, treated with the culture supernatant of Bacillus subtilis, polyoxin, or a combination of both, was good up to 30 days at 5 C after treatment, but markedly decreased when fruit was stored for a longer time. The combination was better than either treatment alone, and resulted in 96.3% good fruit in cold storage after 30 days compared with only 66.3% for the control.