不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

蛹虫草发酵大米的成分分析及体外抗氧化活性研究

以大米为培养基,对蛹虫草菌发酵前后的营养和功能成分变化进行研究,通过测定总还原能力,对超氧阴离子自由基(O-2·)、羟自由基(·OH)及二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除能力来探究虫草米体外抗氧化活性。结果表明:经蛹虫草发酵大米后得到的虫草米不仅含有虫草酸和虫草素等功能性成分,而且与发酵前的大米相比,水溶性非淀粉多糖(Water soluble non starch polysaccharides,SNSP)含量提高,其中SNSP、虫草酸、虫草素含量分别为8.39%、18.07 mg/g、8.76 mg/g;抗氧化结果显示,与普通大米提取液相比,虫草米提取液具有明显的清除自由基作用和总抗氧化能力,浓度为5 mg/m L的虫草米提取液,对O_2~-·、·OH及DPPH·的清除率分别为40%、38%、79.1%,在提取液浓度为0~5 mg/m L范围内和剂量呈正比。由此说明虫草米具有一定的抗氧化能力,可为功能性虫草产品的研发提供理论依据。     

蛹虫草多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为了提高蛹虫草多糖的抗氧化活性,采用α-淀粉酶对蛹虫草多糖进行酶法修饰。以DPPH自由基清除率为响应值,运用响应面分析法对α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的工艺进行优化,研究酶修饰后蛹虫草多糖清除DPPH自由基、螯合Fe2+和还原力等抗氧化活性,并对其三螺旋体结构进行分析。结果表明:对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解pH值;α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的最优工艺条件为:酶解温度48.5℃、酶解pH 5.8、加酶量259.5U/g,在此条件下,酶修饰后蛹虫草多糖对DPPH自由基的清除率预测值为81.4%,验证值为(81.6±1.6)%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化实验表明,α-淀粉酶法修饰后,蛹虫草多糖清除DPPH自由基和螯合Fe2+的EC50值分别为:0.0247、1.0120mg/mL,分别比酶法修饰前提高了55.1%和39.8%;同时,蛹虫草多糖的还原力也得到了显著提高(P<0.05)。三螺旋体结构分析表明,蛹虫草多糖经α-淀粉酶修饰后,其三螺旋体结构有轻微破坏,但仍然保持三螺旋体结构。     

蛹、米虫草多糖含量及抗氧化活性比较研究

旨在研究不同来源北虫草子实体多糖的含量差异以及分级醇沉各组分的抗氧化活性差异。通过热水浸提、分级醇沉法分别获得蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)、米虫草多糖(Cordyceps oryzae polysaccharide,COP);以DPPH自由基清除率、羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力法(ferric reducing antioxidant power,FRAP)评价两种多糖的体外抗氧化活性;构建H_2O_2致PC12细胞氧化损伤模型,比较两种虫草多糖对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。不同乙醇浓度沉淀获得的虫草多糖中,米虫草多糖提取率及含量高于蛹虫草多糖;米虫草多糖对DPPH自由基、·OH清除率分别可达66.43%、69.22%,蛹虫草多糖可达73.69%、73.50%;FRAP法测得蛹虫草多糖抗氧化能力较强。细胞试验结果表明,氧化损伤的PC12细胞经两种多糖处理后细胞存活率皆有不同程度的提升,呈浓度依赖性,蛹虫草多糖组细胞存活率最高可达90.45%,米虫草多糖组细胞存活率最高可达82.62%。以蚕蛹为培养基的蛹虫草在多糖提取率及含量方面低于以大米为培养基的米虫草,但其多糖对自由基清除能力及PC12细胞保护作用优于米虫草多糖,具有较好的抗氧化能力。     

野生虫草无性型分离株分子鉴定及遗传多样性的研究

虫草具有较高的食用与药用价值,本文以19株野生虫草分离株为研究材料,利用ITS引物进行PCR扩增、测序,并从Genbank上下载虫草属相关序列,构建系统发育树,并对19株虫草无性型分离物进行ERIC-PCR扩增,同时还检测了上述无性分离物发酵液中虫草素的含量。系统发育分析表明在分子水平上19株虫草的无性型分离菌株,都为蛹虫草(Cordyceps militaris)。与高雄山虫草(C.takaomontana)、蝉花(C.cicadae)、古尼虫草(C.gunnii)以及冬虫夏草(C.sinensis)平均遗传距离分别为0.1269、0.1228、0.2251和0.2354,在遗传距离上,与高雄山虫草和蝉花较近,与冬虫夏草较远。ERIC-PCR相似系数在0.8水平上,可以将19个蛹虫草菌株分为3组,相似系数在0.9水平上19株蛹虫草菌种可以分为8组。对蛹虫草发酵液中虫草素含量检测发现,所有蛹虫草无性型分离物发酵液都含有虫草素,最高的可达到126.33 mg/L,为现有的蛹虫草生产菌株JD的119倍。     

蛹虫草子实体中抗氧化活性化合物的分离纯化

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性为指导对蛹虫草子实体中的抗氧化活性化合物进行了分离纯化。对蛹虫草子实体经甲醇浸提后获得的甲醇提取物,再进行硅胶柱色谱分离得到一个具有较强抗氧化活性的组分CM9,组分CM9利用反相高效液相色谱法进行活性指导下的分离得到抗氧化活性化合物CM9-1。该化合物采用薄层色谱和高效液相色谱法进行纯度检测发现此为纯品化合物,液相色谱-质谱分析结果表明该化合物相对分子质量为430,分子式为C22H22O9。该物质在质量浓度为1.0 mg/m L时对0.4 mg/m L的DPPH自由基试剂的清除率为(73.67±0.29)%。     

水提醇沉法提取蛹虫草多糖的工艺优化及体外抗氧化效果研究

目的优化蛹虫草多糖的提取工艺,研究蛹虫草多糖的体外抗氧化效果。方法以水提醇沉法提取蛹虫草中的多糖,采用正交试验优化提取工艺,并通过1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)和羟自由基清除能力测定评价虫草多糖体外抗氧化效果。结果蛹虫草多糖的最佳提取条件为菌粉粒度80目,料液比1:20,提取温度65℃,提取时间2 h,提取次数3次,在此条件下,提取率达10.42%。随着浓度的增加,多糖的体外抗氧化活性呈上升趋势,当浓度为1.2 mg/ml时,多糖对DPPH自由基、羟自由基的清除率分别为同浓度下抗坏血酸的54.29%,65.69%。结论优化后工艺提高了蛹虫草多糖的提取率,并保留了其抗氧化活性,可为蛹虫草多糖的开发利用奠定基础。     

蛹虫草多酚提取工艺优化及其抗氧化活性

以蛹虫草子实体为原料,采用响应面设计优化蛹虫草多酚提取工艺,分析蛹虫草多酚的抗氧化活性。以多酚的得率为指标,在单因素试验基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验,确定蛹虫草多酚最佳提取工艺,并对多酚体外总抗氧化能力及DPPH自由基、羟自由基清除能力进行分析。结果显示：蛹虫草多酚最佳提取工艺为提取温度51℃、提取时间1.6 h、液料比49∶1(mL/g),优化条件下多酚得率为6.03 mg/g。抗氧化活性分析结果表明：浓度为0～0.4 mg/mL时,蛹虫草多酚总抗氧化能力随着质量浓度的增加而增强,且始终高于同等浓度的维生素C溶液;多酚溶液对DPPH自由基的半抑制质量浓度为19.52μg/mL,为维生素C溶液的75.25%;对羟自由基半抑制质量浓度为86.47μg/mL,是维生素C溶液的8.31%。蛹虫草多酚的提取工艺可行,蛹虫草多酚具有较强的抗氧化活性。     

响应面法研制蛹虫草山药菌质饮料及抗氧化活性分析

以蛹虫草山药菌质为主要原料,以蔗糖、蜂蜜、柠檬酸、CMC-Na为辅料,研制出一款蛹虫草山药菌质饮料。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法对蛹虫草山药菌质饮料的配方进行优化,检测了饮料中的关键性功能成分,并分析了饮料的抗氧化活性。结果表明,该饮料的最佳配方是蛹虫草山药菌质添加量2.00%、蔗糖添加量8.16%、蜂蜜添加量3.26%、柠檬酸添加量0.79%、CMC-Na添加量0.34%。在该条件下,饮料呈亮黄色、酸甜可口、具有蛹虫草山药菌质特有的香味、清澈透明、感官风味较佳,感官评分达到88.2分,微生物检测指标符合相关标准,饮料中总黄酮的含量为30.93±0.28 mg/L、总皂苷的含量为54.99±1.15 mg/L、总酚的含量为25.56±0.48 mg/L,该饮料对DPPH自由基和羟自由基的最大清除率分别达到91.33%和81.26%,表明该饮料具有一定的抗氧化功效。     

蛹虫草水提液对Cu2+诱发蚕豆根尖微核率的影响

通过蚕豆根尖细胞微核实验,研究蛹虫草水提液对Cu2+诱发蚕豆根尖微核的影响。结果显示,当蛹虫草提取液浓度为5mg/mL以上时,对蚕豆根尖细胞自然诱导的微核产生有显著的抑制作用,对Cu2+诱导的蚕豆根尖细胞微核亦有显著的抑制作用,抑制率均可达50%以上。结论:蛹虫草水提液可有效地抑制蚕豆根尖细胞微核的产生,且抑制作用随着蛹虫草水提液浓度的增大而增强,表明蛹虫草水提取液具有抑制Cu2+遗传毒性的作用。本实验为蛹虫草作为功能性食品开发利用提供新的应用范围。     

虫草花多糖提取工艺优化及其抗氧化特性

采用超声辅助法提取虫草花多糖,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验优化了虫草花多糖提取工艺;并就虫草花多糖对羟基自由基（·OH）、1,1-苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基的清除作用和还原能力进行研究。结果表明：虫草花多糖最佳提取工艺条件为超声功率300 W,液料比30∶1（mL∶g）,超声时间30 min,超声温度45 ℃。在此优化条件下,多糖的平均提取率为3.88%。抗氧化活性试验结果表明,虫草花多糖质量浓度在2.9～14.7 mg/L范围内,随着虫草花多糖质量浓度的增加,其OH、DPPH自由基清除能力及还原能力均逐渐增强,虫草花多糖质量浓度为14.7 mg/L时,对·OH和DPPH·清除率分别达到44.39%和56.34%,说明虫草花多糖具有较强的抗氧化活性。     

北虫草体外抗病毒、抗肿瘤活性部位的筛选

目的：采用系统溶剂法对北虫草子实体提取分离,并对各提取部位进行抗病毒和抗肿瘤活性研究。方法：采用CPE法进行体外抗病毒(抗流感甲型病毒和抗疱疹病毒)实验,按Reed-Muench法计算各提取部位的药物半数有毒质量浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)和选择指数(SI),观察各提取部位的抗病毒活性;用Alamar Blue法,采用体外肿瘤细胞株K562和MCF-7的增殖抑制实验模型,研究北虫草子实体的抗肿瘤活性。结果：抗病毒实验结果表明,氯仿相(CMCl)具有抗疱疹病毒HSV-Ⅰ和 HSV-Ⅱ的活性,CMCl对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒的半数抑制质量浓度(IC50)分别为194.01μg/mL和173.34μg/mL,选择指数(SI)分别为：＞1.29和 ＞1.44;3个部位均没有抗流感甲型病毒活性。抗肿瘤实验结果表明,北虫草3个部位提取物,在中、高质量浓度(50、200μg/mL)时,对抑制K562的增殖都有一定的活性,活性高低为：乙醇相(CMEtOH)＞氯仿相(CMCl)＞乙酸乙酯相(CMEtOAc);3个部位相比较,仅CMCl对人乳腺癌细胞株MCF-7具有抑制活性,在10、50、200μg/mL的抑制率分别为(9.6±3.0)%、(46.1±8.9)%和(68.5±9.2)%,呈现明显的质量浓度依赖性。结论： 在北虫草3个部位中,CMCl是抗肿瘤和抗病毒活性较高的活性部位,值得进一步开发利用。     

北虫草多糖提取工艺优化及其细胞氧化损伤保护作用

目的:优化北虫草多糖的提取工艺,研究北虫草多糖对血管平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用L₉(34)正交实验法优化多糖提取工艺,利用羟自由基法、DPPH自由基法和FRAP法检测北虫草多糖清除自由基的能力。在细胞水平上构建过氧化氢诱导细胞氧化损伤模型,采用MTT法、ROS细胞染色法评估北虫草多糖对过氧化氢诱导大鼠主动脉平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。结果:北虫草多糖的最佳提取条件为:提取温度90 ℃,料液比1:30 g/mL,提取次数3次,提取时间3.0 h,最高得率为7.94%±0.16%。在多糖浓度为1.6 mg/mL时对羟自由基和DPPH自由基的清除能力以及总抗氧化能力分别为75.57%±1.39%、80.23%±2.75%和(0.22±0.01) mmol/mg。细胞实验表明北虫草多糖可显著抑制过氧化氢诱导细胞内ROS生成,提高细胞存活率。结论:成功优化北虫草多糖提取工艺,北虫草多糖具备良好的体外清除自由基的活性,对由氧化应激所导致的心血管疾病中起到很好的防治意义。     

山药-蛹虫草双向发酵的抗氧化活性增效性

本实验研究山药-蛹虫草（Cordyceps militaris）双向发酵的抗氧化活性增效性。以超氧阴离子自由基清除率、2,2-二苯基-1-苦基肼自由基清除率和羟自由基清除率为指标，比较分析山药-蛹虫草菌质和山药基质的抗氧化活性。通过抗氧化活性成分含量测定以及高效液相色谱指纹图谱、扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱分析，研究菌质抗氧化活性的增效原因。结果表明：发酵结束后菌质的自由基清除率显著高于山药的自由基清除率（P＜0.05），菌质中总酚、总黄酮和总皂苷含量显著高于山药（P＜0.05）；菌质不仅含有一些山药中不存在的成分，而且山药中原有6 种成分的含量也发生明显变化；蛹虫草菌丝对山药结构有分解作用；山药中的多糖、纤维素等糖类物质作为碳源被蛹虫草所代谢，转化成多酚类、皂苷类物质。本研究发现，山药-蛹虫草发酵体系在抗氧化活性方面具有增效性，菌质成分的种类、含量变化以及菌质微观结构变化是产生抗氧化活性增效性的主要原因。     

蛹虫草子实体中新型类胡萝卜素的提取工艺优化

蛹虫草作为一种新食品原料,富含水溶性的新型类胡萝卜素。以蛹虫草子实体为原料,筛选一种安全的提取溶剂和无环境污染的细胞破碎方法,以获得类胡萝卜素的最适提取工艺参数。以类胡萝卜素得率为指标,采用7种溶剂分别提取类胡萝卜素,最终确定乙醇溶液为最适提取溶剂。分别采用超声波破碎法和酸热法提取类胡萝卜素,结果表明超声波破碎法较酸热法更有利于类胡萝卜素的提取。在单因素试验基础上,选取乙醇浓度、提取时间、提取温度为自变量,采用Box-Behnken试验设计建立回归模型,获得了类胡萝卜素的最适提取工艺参数为乙醇体积分数73.4%,提取时间30.4 min,提取温度54.4℃。在此条件下,类胡萝卜素得率的预测值为2969.23μg/g,验证试验的试验值为3017.31μg/g,预测值和试验值差异不显著,回归模型拟合程度良好。     

白蜡多年卧孔菌多糖提取工艺优化及其抗氧化活性

采用超声辅助水提醇沉法提取白蜡多年卧孔菌（Perenniporia fraxinea）子实体与菌丝体多糖,利用单因素试验结合Box-Behnken响应面法优化子实体与菌丝体多糖提取工艺参数,并测定其DPPH·、ABTS+·清除能力。结果表明,子实体多糖的最佳提取工艺条件为：料液比1∶60（g∶mL）、提取时间76 min和超声时间16 min,在此优化条件下,子实体多糖提取率为4.39%;菌丝体多糖的最佳提取工艺条件为：料液比1∶30（g∶mL）、提取时间101 min和超声时间16 min,在此优化条件下,菌丝体多糖提取率为6.33%。当子实体和菌丝体多糖质量浓度为2.0 mg/mL时,子实体对DPPH·、ABTS+·清除率分别为45.67%和72.89%,菌丝体多糖对DPPH·、ABTS+·的清除率分别为51.67%和75.83%。子实体和菌丝体多糖能降低植物油过氧化值（POV）,表明白蜡多年卧孔菌多糖具有一定的抗油脂氧化的能力。     

蛹虫草多糖的化学修饰及体外抗氧化能力

将醇沉法得到的粗多糖,经柱层析得多糖纯品。对多糖纯品进行硫酸化、羧甲基化、乙酰化化学修饰,用于体外抗氧化活性研究。纯化后的蛹虫草多糖可以被多种化学试剂修饰,其取代度大小的顺序是：羧甲基化＞乙酰化＞硫酸化;修饰后的多糖表现出不同程度的抗氧化活性,其中羧甲基化和硫酸化可以明显提高多糖的抗氧化能力,对烷基自由基清除率提高最大,分别达到95.19%和73.58%,其次是清除羟自由基和超氧阴离子自由基,乙酰化修饰后抗氧化能力有所下降。因此,采用合适的修饰方法,可以明显提高蛹虫草多糖的抗氧化活性。     

在线抗氧化分析和超滤亲和液质联用技术快速筛选桂花抗氧化及抑制酪氨酸酶的活性成分

目的:研究桂花水提物的抗氧化活性及酪氨酸酶抑制活性,并初步研究其活性化学成分.方法:以DPPH·清除能力、ABTS+·清除能力和FRAP这3种抗氧化活性评价指标来衡量桂花水提物及其化合物的抗氧化能力;采用超高效液相-ABTS+·-质谱(UPLC-PDA-QDa-ABTS+·)在线法对桂花中的抗氧化活性成分进行定性鉴别,...