卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响

目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据.方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL.将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL.于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数(SI).结果:应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分.与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组(P=0.00)、B16TCL免疫组(P=0.01)和BCGHSP70免疫组(P=0.00).结论:BCGHSP70 能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究.     

白血病肿瘤疫苗联合1-甲基色氨酸免疫治疗荷瘤小鼠疗效观察

目的 探讨白血病肿瘤疫苗(简称瘤苗)主动免疫治疗及联合吲哚2,3双加氧酶(IDO)的抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT),在白血病荷瘤小鼠治疗中的作用.方法 采用FBL-3细胞皮下注射建立荷瘤白血病小鼠模型;实验分为5组:正常对照组、PBS对照组、环磷酰胺(CTX)化疗组、单用瘤苗治疗组和瘤苗联合1-MT治疗组;观察各组小鼠的一般状况、肿瘤缓解率、肿瘤大小、转移情况及生存期.结果 PBS对照组小鼠活动迟缓,体质量(含瘤结节质量)比其余各组均高;单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组小鼠活动、进食正常,体质量与正常小鼠筹异不大;化疗组体质量明显减轻,出现脱毛、弓背、活动减少等,差异有统计学意义(F=57.71,P=000);单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组治疗相关死亡率明显低于化疗组(0,0,40%).瘤苗联合1-MT组完全缓解率与单用瘤苗组(61.1%、70.0%)比较,差异无统计学意义(χ2=0.221,P>0.05),但瘤苗联合1-MT组的复发率低于单用瘤苗组(0,36.36%);复发小鼠再应用1-MT,能明显抑制瘤结节的生长.单用瘤苗组和瘤苗联合1-MT组小鼠中位存活期明显高于化疗组和PBS对照组(χ2=52.13,P<0.01).各组小鼠整体瘤结节的变化比较差异有统计学意义(F=89.966,P=0.000).结论 白血病瘤苗在动物实验具有肯定的疗效,能明显抑制肿瘤的生长,延长小鼠生存时间,且副作用小.免疫治疗联合1-MT对白血病进行治疗,可以显著减少肿瘤的复发率;而免疫治疗有效后复发时应用1-MT,可以显著抑制肿瘤的生长.     

核桃楸树皮乙酸乙酯提取物对原位移植荷胃癌小鼠的抑瘤作用

目的:研究核桃楸树皮乙酸乙酯提取物(HYT)对原位移植荷胃癌小鼠的抑瘤作用及其对免疫功能的影响,阐明HYT抗胃癌作用机理,为研发低毒高效的抗胃癌中草药提供理论依据.方法:建立HYT灌胃的原位移植荷胃癌小鼠研究模型,分为HYF高剂量组(60 mg·kg-1)、HYF低剂量组(40 mg·kg-1)、假手术组、阳性对照组(5-FU)及阴性对照组,观察每组小鼠抑瘤率及胸腺、脾脏指数,采用ELISA法及流式细胞术等检测荷胃癌小鼠IL-4 、IL-12、TNF-α水平及T淋巴细胞亚群情况.结果:HYT高剂量组抑瘤率与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组比较,HYT高剂量组小鼠胸腺指数及脾脏指数明显增加(P<0.05),IL-12水平升高(P<0.05),IL-4水平降低(P<0.05),TNF-α水平升高(P<0.05),T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值升高(P<0.05).结论:HYT可以增强机体免疫功能,具有明确的抑瘤作用,可以作为抗胃癌低毒高效的中草药.     

吉林省双阳梅花鹿鹿茸水溶性蛋白组分的提取及对小鼠主要脏器病理形态学的影响

目的:探讨吉林双阳梅花鹿鹿茸水溶性蛋白组分应用的安全性,为鹿茸蛋白的开发应用提供实验依据.方法:将新鲜双阳梅花鹿鹿茸进行高速组织匀浆,离心取上清,用饱和硫酸铵进行沉淀,PBS溶解沉淀,最后通过SephadexG25分子筛层析方法过滤除盐,初步获取鹿茸水溶性蛋白组分.将58只 ICR小鼠随机分为生理盐水灌胃组、鹿茸蛋白溶液灌胃组、鹿茸蛋白溶液皮下注射组和鹿茸蛋白溶液腹腔注射组,按6.7 mg·kg-1给药,每天2次,第28天处死小鼠,取心、肝、肾和肺组织进行病理形态学观察.结果:鹿茸总蛋白溶液采用Sephadex G25层析过滤除盐后,平均浓度为0.685 g·L-1.病理形态学切片显示:鹿茸蛋白溶液灌胃组(50.0%)、皮下注射组(91.7%)和腹腔注射组(87.5%)小鼠可见散在的心肌细胞肌浆凝聚;蛋白溶液灌胃组(40.0%)、皮下注射组(64.3%)和腹腔注射组(77.8%)小鼠肝组织有炎细胞浸润和不同程度灶状坏死;3只皮下注射组小鼠肾小管上皮有不同程度的玻璃样变性;3只蛋白溶液灌胃组小鼠有肺炎病变;皮下注射组及腹腔注射组各有3只小鼠肺间隔增宽.结论:不同给药途径的鹿茸蛋白溶液对小鼠心肌组织、肝脏组织有一定程度的病理性损害,对肾、肺组织无明显影响.     

黏蛋白1基因磁转染树突状细胞诱导细胞毒性T细胞抗膀胱肿瘤免疫效应的研究

目的:探讨黏蛋白1(mucins 1,MUC1)基因磁转染体外人树突状细胞(dendritic cell,DC)的可行性,观察其诱导的特异性抗MUC1膀胱癌CTL的免疫效应.方法:以葡聚糖磁性纳米颗粒(DMN)作为载体,在多聚赖氨酸(PLL)的辅助下,通过静电作用结合MUC1基因的真核表达载体pEGFP-C1-MUC1,在钕-铁-硼稀土强磁块的磁场作用下转染DC,荧光显微镜下观察及流式细胞术检测转染效率,并用RT-PCR法检测转基因DC中MUC1基因的表达;再将转染MUC1基因的DC与自体T细胞共培养,并分别用乳酸脱氢酶释放法检测所致敏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)对MUCI特异性抗膀胱癌(膀胱肿瘤BIU87细胞系)的杀伤活性,用透射电镜观察CTL诱导靶细胞凋亡情况;ELISA法测定MUC1基因修饰后的DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力.结果:pEGFP-C1-MUC1转染效率为10%左右,荧光显微镜下可观察到明显绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到MUC1条带,转染MUC1基因的DC与自体T细胞混合培养后能诱导出MUC1特异性的CTL,对BIU87细胞的杀伤实验表明T-DC-MUC1的杀伤活性显著高于对照组T-DC-pEGFP-C1和T-DC诱导的CTL(P均<0.05);在透射电镜下也可观察到部分BIU87膀胱肿瘤细胞出现了细胞核核仁消失,染色质浓集于核膜周围等早期凋亡表现;基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平的IFN-γ,明显高于未转染的DC(P<0.05).结论:葡聚糖磁性纳米颗粒在同定磁场的作用下成功将MUC1基因转入DC,并可有效诱导出特异性抗MUC1膀胱癌的细胞毒性T细胞.     

NF-κB信号通路的阻断对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响

目的:利用siRNA技术抑制核因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)亚单位p65基因的表达,研究其对p65表达的抑制作用,并探讨其对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响.方法:将终浓度为50 nmol/L的p65 siR-NA转染皮肤鳞癌SCL-1细胞,通过RT-PCR检测p65 mRNA的表达;利用Western blotting检测p65、bcl-2和bax蛋白表达,利用Caspase-Glo(R)-3/7,8和9检测试剂盒检测caspase-3/9的活性;最后通过流式细胞术检测细胞凋亡.结果:p65 siRNA转染SCL-1细胞后的48 h,p65 mRNA的表达水平最低,与0 h相比,差异有统计学意义(0.23±0.10vs.0.66±0.05,P＜0.05);转染48 h后,p65和bcl-2蛋白表达水平下调,而促凋亡蛋白bax的表达上升,进一步caspase-3/9的活性也显著升高.流式细胞术结果表明,p65 siRNA能明显诱导SCL-1细胞发生凋亡,其早期凋亡的比率为20.28%±1.87%,显著高于未处理组和对照siRNA组(凋亡率分别为9.13%±1.51%和9.37%±1.38%,F=47.532,P＜0.01).结论:p65 siRNA能够阻断皮肤鳞癌细胞中NF-κB信号通路,并下调抑凋亡蛋白bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白bax的表达以及提高caspase的活性,提示NF-κB信号通路有望成为皮肤鳞癌基因治疗的分子靶点.     

不同剂量电离辐射对小鼠脾脏调节性T细胞及TGF-β1表达的影响

目的:观察不同剂量X射线照射后小鼠脾脏调节性T细胞(Treg)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的变化,探讨X射线对Treg阳性率及TGF-β1表达水平的影响.方法:雄性ICR小鼠,用X.S.S.205(FZ)型固定式X射线深部治疗机进行不同剂量的全身照射(低剂量组为0.050、0.075、0.100和0.200 Gy;高剂量组为0.500、1.000、2.000、4.000 和6.000 Gy),同时设立假照组,于照射后16 h处死小鼠,取脾脏,分别采用流式细胞术、RT-PCR及Western blotting法检测Treg和TGF-β1的表达水平.结果:与假照组比较,低剂量照射组小鼠脾脏Treg阳性率无明显变化(P>0.05);高剂量照射组,1.000 Gy照射后开始脾脏Treg阳性率明显高于假照组(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性升高.与假照组比较,小鼠脾脏细胞TGF-β1 mRNA表达水平从0.500 Gy剂量组开始升高,2.000 Gy组达到假照组的2倍以上,但随后略有下降;在低剂量照射范围时,0.100 Gy组小鼠TGF-β1蛋白表达水平明显高于假照组(P<0.05),而在大剂量组呈递增趋势,4.000 Gy和6.000 Gy组与假照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:在高剂量X射线诱导下小鼠脾脏Treg阳性率增高,同时TGF-β1分泌增加,这种变化可能是高、低剂量X射线诱导不同免疫效应的又一原因.     

海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(seaweed pigment glycoprotein,SPG)对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:将不同浓度SPG与小鼠H22肝癌细胞共同培养,用MTT法测定癌细胞增殖活性.建立H22移植瘤小鼠肝癌模型,随机分为SPG高、中、低剂量组,对照组及环磷酰胺组.实验组小鼠每天分别给予不同剂量(100、50、10 mg/kg)的SPG灌胃,连续10 d,对照组同法给予等量生理盐水,环磷酰胺组小鼠腹腔注射20 mg/kg环磷酰胺,隔日一次.各组小鼠均于末次给受试物后24 h处死,取肿瘤组织用免疫组化法检测各组Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:SPG高剂量组瘤细胞增殖活性(0.545±0.002)明显高于对照组(0.404±0.008)(P<0.05);SPG高剂量组Bcl-2和Bax蛋白阳性表达率分别为16.78%和38.1%,对照组分别为65.16%和4.68%,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05).结论:SPG具有抑制小鼠H22肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用.     

RNA干扰沉默HMGN5基因对肺癌H1299细胞增殖和周期的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因对肺癌H1299细胞增殖和细胞周期的影响,为肺癌的基因靶向治疗提供理论依据.方法:构建HMGN5特异性siRNA慢病毒载体,感染肺癌H1299细胞,设阴性对照组及干扰组,应用Real-time PCR和Western blotting方法分别从mRNA和蛋白质水平检测各组干扰质粒对HMGN5基因的干扰效果,MTT和BrdU法检测HMGN5 siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果:与阴性对照组比较,干扰组HMGN5的mRNA表达量下降了50.7%(P< 0.05),蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;BrdU实验RNAi干扰组细胞增殖率(37.8%)明显低于对照组(55.0%)(P< 0.05);流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(54.6%±0.9%)高于阴性对照组(46.5%±0.4%)(P< 0.05).结论:运用RNA干扰技术能够有效沉默H1299细胞的HMGN5基因,并抑制肺癌细胞的增殖能力,提示HMGN5在肺癌的发生发展中起重要作用,抑制HMGN5的表达可能成为一种治疗肺癌的方法.     

肾细胞癌组织中Notch信号途径蛋白表达水平的检测及其意义

目的:检测人肾细胞癌(RCC)组织中Notch信号途径相关蛋白的表达水平,探讨Notch信号途径分子与人RCC发生发展的关系.方法:手术方法获得6例经病理检查诊断为RCC组织标本,采用Western blotting法检测RCC组织和癌旁组织中Notch信号通路受体、配体蛋白表达水平.结果:与癌旁组织比较,RCC组织中Notch信号的受体Notch-1以及配体Jagged-1的表达水平均明显降低(P<0.05),受体Notch-2及配体Jagged-2表达水平均明显升高(P<0.05).结论:RCC中Notch信号途径蛋白表达水平发生了明显的变化,Notch信号途径可能参与了RCC的发生发展过程.