不同培养条件对银杏愈伤组织生长及黄酮含量的影响

以胚为外植体,通过固体培养,研究了培养基,激素和光照对银杏愈伤组织诱导的影响,以及继代培养中激1素和活性炭对愈伤组织生长和产黄酮的影响,结果表明:愈伤组织的诱导的最佳条件为DCR培养基+1.0mg/L2,4-D+0.5mg/LBA+完全暗条件培养。继代培养过程中既能促进愈伤组织生长又使黄酮含量最高的处理为0.3mg/LBA+2.0mg/L2,4-D,活性炭抑制愈伤组织生长但能促进黄酮的积累。     

固定化银杏克隆细胞悬浮培养产生黄酮的研究

采用银杏果实为原料诱导得到颗粒状愈伤组织,在MS培养液中筛选克隆细胞,单细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT中培养。细胞悬浮液与3%的海藻酸钠混合后滴入2%CaCl2MS,制成小球凝胶。固定化细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT+10mg/L肌醇的培养基中悬浮培养25d,黄酮生物合成量为85·63mg/L,克隆细胞增长速度提高24·45倍。     

银杏细胞的悬浮培养研究

研究了银杏在SH、MS、B5、N6等培养基中的愈伤组织诱导培养，考察了在MS培养基中悬浮培养下溶解氧含量、激素浓度等对银杏黄酮苷生产的影响．结果表明：银杏在SH、MS、B5、N6等4种培养基中均可以诱导出愈伤组织，其中N6、MS培养基中诱导率最高，愈伤组织生长最好．悬浮培养结果表明，溶解氧、激素浓度对黄酮苷影响最大．     

烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以鄂烟1号无菌苗的叶为材料进行愈伤组织的诱导,筛选出生长培养基的最佳激素配比,初步建立了烟草细胞悬浮培养体系。结果表明,愈伤组织诱导的最优基本培养基为MS培养基,以MS NAA1.0mg/L 6-BA0.5mg/L为最佳配方;愈伤组织最佳生长培养基为MS 2,4-D0.1mg/L NAA1.5mg/L 6-BA0.3mg/L,愈伤组织培养第6天进入对数生长期,第14天干重增至最初干重的12.536倍,并以此配方建立了烟草细胞悬浮培养体系。     

甘蔗原生质体分化成根

用 MS 培养基,从甘蔗嫩叶或幼穗诱导愈伤组织,将愈伤组织放置 MS 液体培养基中悬浮培养,每3—5d 继代一次。MS 培养基附加2,4—D3mg/L,水解乳蛋白500mg/L,盐酸硫胺素1mg/L 以及椰子水5%。经4至5个月培养的悬浮培养物所分离的原生质体具有很强繁殖能力。原生质体植板于 K8P 琼脂糖培养基,持续细胞分裂和生长。原生质体衍生的无性系移到 MS 琼脂培养基,形成愈伤组织。9个糖蔗品种的原生质体形成这种愈伤组织,其中一个品种的愈伤组织在不含任何植物生长调节剂的 MS 培养基中分化出根来。     

杜仲疏松愈伤组织诱导条件的优化筛选

杜仲愈伤组织生长过于致密从而导致难以实现悬浮培养,因此获得疏松、生长快速愈伤组织是实现杜仲细胞悬浮培养的前提.本文研究了不同外植体、激素和培养基对杜仲愈伤组织诱导率、疏松程度以及褐化率的影响,结果表明：上胚轴和子叶更容易被诱导为疏松愈伤组织,MS培养基是最适诱导培养基;适当增加6-BA浓度有助于褐化的减轻且提高愈伤组织疏松程度,杜仲疏松愈伤组织诱导最适激素配比为1.0mg/L 2,4-D＋1.0mg/L NAA＋1.0mg/L 6-BA.     

拳参愈伤组织的诱导及增殖效应的研究

目的研究适宜拳参愈伤细胞的诱导、组织分化及快速生长的培养基成分。方法以拳参的幼嫩叶柄为外植体,接种于附加2,4-D、N A A、6-B A、K T及其组合的M S培养基上,观察拳参愈伤组织的诱导、分化及愈伤细胞的生长状态。结果MS 0.4 mg/L 6-BA 2.0 mg/L NAA对拳参愈伤组织的诱导效果最好。MS 0.2 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D增殖培养的愈伤组织较适合于器官的分化,MS 0.2 mg/L 6-BA 4.0 mg/L NAA增殖培养的愈伤组织较适合于做细胞悬浮培养的材料。结论建立拳参愈伤组织诱导,愈伤组织分化和愈伤细胞快速增殖体系,为进一步研究药用植物拳参细胞的分子机制及次生代谢等提供资料。     

紫薯愈伤组织诱导和培养条件优化及绿原酸类化合物的积累

以紫薯叶片为外植体,通过筛选培养基和培养条件建立了紫薯愈伤组织培养体系。研究6-苄基氨基嘌呤(6-BA)及萘乙酸(NAA)不同浓度组合对紫薯愈伤组织诱导的影响,之后分别考察基础培养基MS、1/2MS、B5、WPM、White及NAA、6-BA、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)三种激素对紫薯愈伤组织继代生长的影响。确定最适基础培养基后,对激素进行单因素实验后再做正交实验。结果表明1/2MS基本培养基中添加1.5 mg/L 6-BA和0.4 mg/L NAA适合紫薯愈伤组织诱导,诱导率为81.82%。MS为优选基础培养基,通过正交实验优化的激素配比组合为1.0 mg/L NAA,0.4 mg/L 6-BA,1.0 mg/L 2,4-D。最佳继代培养基为MS+1.0 mg/L NAA+0.4 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+6 g/L琼脂+30 g/L蔗糖,此优化激素条件下愈伤组织的生物量增长倍数为23.46倍,3-咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰宁酸、4,5-二咖啡酰宁酸三种绿原酸类化合物含量分别为0.30%、1.91%、1.10%,三者总含量3.31%,因此,通过紫薯愈伤组织培养生产绿原酸类化合物是可行的。     

紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸条件研究

通过诱导紫苏下胚轴和子叶外植体产生愈伤组织,建立细胞悬浮培养体系,以提高细胞产量及细胞中迷迭香酸含量。结果表明,在MS液体培养上添加3.0mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)＋0.3mg/L萘乙酸(NAA)培养基上,下胚轴愈伤组织呈嫩黄色松散状态,出愈时间短,出愈率可达100%。紫苏细胞悬浮培养产生迷迭香酸的最佳条件为培养时间7d、接种量鲜质量浓度20g/L、摇床转速110r/min、蔗糖30g/L、L-苯丙氨酸0.15g/L,此条件下可获得高达2.283mg/g的迷迭香酸。     

银杏愈伤组织单细胞克隆的研究

利用银杏单细胞克隆系研究银杏单细胞生长稳定性与细胞均一性之间的关系。结果显示:培养基过滤杀菌是促进细胞生长的好方法,当悬浮培养愈伤组织3代和向培养基中加入0.5g/L的酪蛋白水解物,能显著增加植板率,单细胞克隆的植板率为27.04%。克隆系GB-11平均生长率为0.55gfw/gfw·d。     

银杏黄酮抑菌作用的研究

本文采用液相色谱法对银杏仁提取物主成分进行了定性测定,并对其抑菌作用进行了研究。结果表明：银杏仁乙醇提取物的主要成分为黄酮类化合物。在抑菌圈试验中,黄酮类化合物对细菌和真菌都有一定的抑制作用,且对细菌的抑制作用略好于真菌。在食物抑菌试验中,20mg/m L提取液对培养72h牛肉中的大肠杆菌、白葡萄球菌和毛霉都有很好地抑制作用;对豆腐中的毛霉抑菌作用明显,对大肠杆菌和白葡萄球菌没有抑制作用,反而呈现促进作用,食品的特性决定了黄酮类物质对菌类的抑制效果。     

银杏叶提取液结合异抗坏血酸钠对鲜切砀山梨贮藏品质的影响

目的:研究银杏叶提取液结合异抗坏血酸钠对鲜切梨的保鲜效果。方法:以鲜切砀山梨为材料,探究总黄酮含量分别为0.25(处理1)、0.50(处理2)、0.75 mg/m L(处理3)的银杏叶提取液结合1%的异抗坏血酸钠(D-sodium ascorbate,D-VCNa)溶液对鲜切砀山梨在4℃条件下贮藏品质的影响。采用SPSS软件分析了贮藏期间鲜切梨的呼吸强度、质量损失率、色差、VC含量、硬度、可溶性固形物含量(soluble solid content,SSC)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活力、相对电导率及pH值的变化等。结果:不同质量浓度黄酮的银杏叶提取液结合D-VCNa溶液都可以在不同程度上减缓鲜切梨的呼吸强度、质量损失率、色差的增加,减缓VC含量、硬度、SSC的下降速率,延迟褐变发生、POD活力高峰的出现时间,抑制果实pH值和相对电导率的上升。结论:银杏叶提取液结合D-VCNa对鲜切砀山梨的贮藏品质有一定的保鲜作用,其中以总黄酮含量为0.50 mg/m L银杏叶提取液结合1%的D-VCNa溶液处理的鲜切梨保鲜效果最好。     

高效液相色谱法测定银杏保健品中总黄酮

目的：建立一种适用性好,能作为国家标准方法用于测定银杏保健品中总黄酮化合物的测定法。方法：对盐酸浓度、水解时间、水解温度三因素采用响应曲面优化保健品中黄酮化合物水解提取条件;采用高效液相色谱方法,梯度洗脱程序测定黄酮类化合物含量。结果：水解最佳条件为水解时间114min,水解温度79℃,盐酸浓度3.4mol/L,该条件下得到的银杏总黄酮含量最高为8851.468mg/100g;流动相 A：0.1% H3PO4,B：CH3OH;梯度洗脱程序为：0～20min,A 45%,B 55%;20～30min,A 由45% 线性变化为50%。该法线性关系良好,平均加标回收率在95.04%～104.56% 之间,RSD 小于2%。结论：该法操作简单、快速、分离效果好、专属性强、准确度和重现性好、适用性好,可作为国家标准方法推荐使用。     

甘蔗新品种桂糖48号的组织培养技术研究

甘蔗组织培养技术是加速繁殖新品种和加快新品种大面积推广的主要手段,不同品种的离体培养中其培养基中激素配比存在差异,因此筛选合适培养基是提高品种快繁效率的关键。本文以桂糖48号为材料,以MS基本培养基加外源激素浓度梯度进行试验处理设计,对品种的愈伤组织诱导、愈伤分化、试管苗增殖和生根阶段进行培养基筛选试验,以其筛选出最合适桂糖48号的培养基配方。试验结果表明:诱导愈伤组织培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L;愈伤组织分化培养基为MS+BA 1.0 mg/L;初代增殖培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.5 g/L;继代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 12 mg/L。在该培养基下,生根最好,苗绿,比较高,长势好,对加快甘蔗新品种桂糖48号在广西大面积推广起到积极的作用。     

蛹虫草银杏叶保健饮料的研制

以蛹虫草和银杏叶为原料,以木糖醇、柠檬酸、蜂蜜为调味剂,羧甲基纤维素钠作为稳定剂,研制蛹虫草银杏叶保健饮料。通过正交试验设计和感官品质评价,确定了该保健饮料的最佳配方为蛹虫草和银杏叶浸提液体积比为1∶3,木糖醇的添加量为40 g/L、柠檬酸的添加量为0.4 g/L、蜂蜜的添加量为20 g/L、羧甲基纤维素钠的添加量为3 g/L。经过有效成分含量检测结果表明,该保健饮料中虫草素及总黄酮含量分别为0.01 mg/L和12.0 mg/L。该饮料保健性能突出、口感协调、有效成分含量稳定、质量符合相关标准。     

银杏黄酮处理绿豆黄化幼苗生产保健芽菜的工艺研究

用富含黄酮的银杏叶提取物(EGB)处理绿豆黄化幼苗,证明绿豆黄化幼苗能从溶液中吸收银杏黄酮,并引起某些营养生长方面的变化,从而改善绿豆芽菜的外观品质;银杏黄酮处理在提高绿豆芽菜黄酮含量的同时,降低其淀粉和游离氨基酸的含量,并使可溶性糖和可溶性蛋白质的含量提高。添加0.3mg/LIAA可明显地促进绿豆黄化幼苗对银杏黄酮的吸收,大幅度提高绿豆芽菜中的总黄酮含量。实验结果表明,通过EGB水溶液处理绿豆黄化幼苗,生产高黄酮含量的保健芽菜是可行的。实验得出了高黄酮绿豆芽菜的生产工艺:即在25℃至30℃下,绿豆种子经清水精选后浸种12h,用含40mg/L银杏黄酮的EGB水溶液添加0.3mg/LIAA暗处理萌动种子48h,补充清水继续暗生长2～3d。     

不同采收期银杏叶总黄酮含量及对花生油抗氧化作用

本试验主要测定了不同采收期银杏叶总黄酮含量及对花生油的抗氧化作用,采用紫外分光光度法对7~11月份采收的银杏叶总黄酮含量进行了测定,采用Schaal烘箱法,考察了各采收期银杏叶黄酮对花生油的酸价(AV)及过氧化值(POV)的影响。结果表明:各采收期银杏叶黄酮对花生油均有一定的抗氧化作用,10月份采收的银杏叶总黄酮含量较高,且对花生油抗氧化性能较好。因此,10月份为银杏叶的最佳采收期,且该期的银杏叶总黄酮对花生油具有良好的抗氧化能力。     

大花金挖耳细胞悬浮系的建立及黄酮类化合物的产生

研究不同培养基、蔗糖质量浓度、pH 值、接种量、NAA、6-BA、VB1 及培养时间对大花金挖耳细胞生长和黄酮类化合物合成的影响。结果表明：NT 液体培养基在pH5.5、蔗糖质量浓度40g/L、接种量40g/L 鲜质量细胞、NAA 1.0mg/L+6-BA 0.2mg/L 时有利于细胞的生长和黄酮类化合物合成,向NT 培养基中添加1.0～4.0mg/LVB1 有抑制细胞褐化的作用,大花金挖耳悬浮细胞的生长及黄酮类化合物合成随培养时间的延长,表现出先升高后降低的趋势,在接种15～21d 后,细胞生物量可达23.54～24.51g/L,黄酮类化合物得率为1.19%～1.23%。