酱油曲霉蛋白酶及其用于酱油酿造的研究

为提高酱油生产蛋白质利用率,对酱油曲霉B和米曲霉进行了比较.通过酱油曲霉B和米曲霉所产蛋白酶的酶活比较;无机氮和拌水率对酱油曲霉B和米曲霉产酶的影响;无机盐对酱油曲霉B产酶的影响:米曲霉3.042和酱油曲霉B对大豆蛋白的消化能力及酱油曲霉B用于酱油生产的效果等试验.结果表明:酱油曲霉B能大量产生中性蛋白酶,所产碱性蛋白酶是米曲霉3.042所产的200倍,大豆蛋白消化能力也远高于米曲霉3.042,其蛋白质利用率比米曲霉高10%～20%,所产酱油口感不逊于米曲霉3.042生产的酱油.     

三株酱油曲霉蛋白酶特性的研究

通过对今野曲霉,沪酿３．０４２、３１１三株米曲霉生理特性和生长规律的研究,得出今野曲霉产酶高峰期为４４ｈ,沪酿３．０４２曲霉及３１１曲霉为４８ｈ;三株供试菌制曲最适温度为２５℃,培养基最适含水量１００％,最适ＰＨ为７;３１１曲霉最适盐分４％,沪酿３．０４２、今野曲霉最适盐分２％。     

酱油曲霉蛋白酶活力的提高

这是在上海海鸥酿造公司及上海粮油学会联合召开的科技会议上,上海工业微生物研究所胡学智教授等所送的论文。此文虽已在《工业微生物》发表,但内容与酿造工业有密切关系,而且叙述全面,为此特于转载。     

高蛋白酶酶活酱油发酵用米曲霉的复合诱变选育

以市售曲精分离菌株米曲霉CS3.03为出发菌株,经UV—DES复合诱变处理,采用酪素平板法及琼脂块法进行初筛,结合Folin—酚法复筛结果对比其初筛效果,低盐固态发酵试验测试高蛋白酶酶活突变株的发酵性能,传代试验测试其遗传稳定性。结果表明:琼脂块法的初筛效率明显高于酪素平板法;对初筛菌株进行制曲复筛,获得5株有生产潜力的高蛋白酶酶活突变株,酱油发酵试验结果证明突变株氨态氮含量、全氮利用率均高于出发菌,其中突变株P7、Y5发酵制得酱油氨态氮含量分别提高14.56%,11.26%,全氮利用率分别提高3.83%,4.09%;遗传稳定性测试证明P7具有良好工业应用价值且遗传稳定性好,其蛋白酶酶活平均为4 994.18U/g干基,比出发菌株提高173.92%。     

植酸质对米曲霉蛋白酶活力影响的研究

采用米曲霉为试验对象，以加入植酸钠为影响因素，经培养提取酶液测其蛋白酶活力，找出蛋白酶活力受因素影响后的变化情况。     

米曲霉和酱油曲霉制造酱油曲和酱油的比较分析

酱油、酱等传统的调味品,其制品的香气与使用的曲菌有很大的关系,这是人所共知的事。目前,日本制造酱油曲采用的曲菌主要有米曲霉(以下简称A)和酱油曲霉(以下简称S)两种。这两种曲霉产生的水解酶和酿造特性不同。简言之,即A比S产生的α一淀粉酶含量高,而植物组织分解酶群含量低。这样,表现在制曲时,A曲升温快,容易管理,原料中淀粉消费量高达30%左右。     

两种曲霉产蛋白酶特性的研究

经过多年选育的两种曲霉AOI－6及851－6B的特性，对影响该曲霉三种蛋白酶活力的各种因素（时间、温度、pH、混合培养基等）进行了探讨。试验结果表明：AOI－6产中性蛋白酶的最适温度、时间为25℃，72h；碱性蛋白酶为25℃，64h；酸性蛋白酶为25℃，48h；而851－6B三种蛋白酶均为30℃，48h。混菌培养时的最适pH值，中性蛋白酶为pH7.0，碱性蛋白酶为pH9.0，酸性蛋白酶为pH5.0。培养基配比：米渣：麸皮：豆粕为2：1：0．2时，各种蛋白酶活力最高。在混菌培养时，两种曲霉的互补和协同作用，有利于各种蛋百酶的产生。比单菌培养时达到最大酶活所需的时间缩短16～24h，各种蛋白酶活力也有很大提高，与单菌培养时中性、酸性、碱性蛋白酶最大酶活相比，酶活提高率分别为281．5％，159．6％，160．1％；混菌发酵时氨基态氮转化率达到70％。此研究为进一步开发和广泛应用AOI－6，851－6B两种优良曲霉，提供了理论依据。     

酱油发酵用2种米曲霉中性蛋白酶的酶学性质比较

米曲霉产蛋白酶的性质对酱油品质有重要的影响。研究以一株产中性蛋白酶的米曲霉CICIM F0899为研究对象,首先对其进行扫描电镜观察,与米曲霉沪酿3.042比较表明F0899的分生孢子头较小,分生孢子大于沪酿3.042。其次对F0899和沪酿3.042产蛋白酶酶学性质研究表明F0899产蛋白酶在20～40℃保持稳定,最适反应温度为60℃,在pH 6.0～8.0时保持稳定,最适反应pH为8.0,在盐浓度为18%的条件下,仍能保留20%的酶活,可达沪酿3.042的2.2倍,Ag+对F0899有严重的抑制作用,Fe3+没有明显的抑制。因此,米曲霉CICIM F0899产的蛋白酶在耐高温、耐低pH和耐高盐的性能优于沪酿3.042。     

酱油曲霉的选育

目前,我国调味品工业用于酱油生产的菌种主要为沪酿3042。此菌株适宜固态制曲,不但具有蛋白酶活力高,还具有生产快,易管理,提高原料全氮利用率等特点。但菌株经过长期的移种和保藏后,可能出现下述两种不良情况:一是保藏不妥,菌种出现杂菌污染;二是优良性状减弱或消失,产生菌种退化。无论出现那种不良情况,都会给酱油产量与质量带来不利影响。为此定期     

酱油曲霉发酵芝麻饼粕的条件优化

采用响应面法对酱油曲霉固体发酵芝麻饼粕提高抗氧化能力的条件进行优化。通过Plackett-Burman设计法,评价麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、麦麸、玉米浆、酵母膏和硫酸铵8个因素对清除DPPH自由基能力的影响。筛选出麦麸、葡萄糖和硫酸铵为影响芝麻饼粕发酵提取物抗氧化活性的3个显著因素,然后采用中心组合试验设计和响应面分析法,对3个关键因素进行优化。优化的发酵条件为:葡萄糖、硫酸铵和麦麸添加量分别为1.87%、1.54%和2.55%。在该实验条件下,DPPH自由基清除活性为80.26%。     

酱油曲霉产巯基氧化酶发酵培养基的优化

以提高酱油曲霉ATCC20235产巯基氧化酶(SOX)产量为目的,选择碳源、氮源、发酵培养基初始pH及8种金属离子分别进行单因素实验,在此基础上选取8个主要因素进行正交实验。结果表明,以碳源(蔗糖)30g/L、氮源(鱼粉蛋白胨)6.8 g/L,K2HPO4·3H2O 15 g/L,MnCl2·4H2O 2 mg/L,BaCl2 500μg/L,H3BO3 1 mg/L,起始pH 8.5的优化培养基在30℃下,220 r/min培养72 h,获得发酵液巯基氧化酶产量达240U/L,优化后的酶产量比在专利文献中记载的发酵培养基及培养条件下的产酶量提高了10倍。     

DJS水系对米曲霉酶活力提高的研究

研究了DJS水系在酿造酱油制曲中产酶及其活力的影响。试验中与自来水介质进行比较,结果表明:DJS水系能改变米曲霉的孢子数,对其酶活力的提高有显著的影响;在DJS-A介质中的孢子产量虽少于DJS-B介质,而其中的酶活力却较高。     

酱油曲霉孢子原生质体的制备与紫外诱变育种

由1株分离、纯化自曲精的酱油曲霉的分生孢子制备原生质体,并进行紫外诱变,得到7株中性蛋白酶活提高幅度较大的紫外突变株U系,中性蛋白酶活最高的1株达到6 197.4U,为出发株的1.94倍。对原生质体制备条件进行了优化:选取孢子生长旺盛的新鲜斜面培养物(培养5 d左右)制备孢子悬浮液;采用25 mmol/L-巯基乙醇+5 mmol/L Na2EDTA体系预处理20 min;酶解条件是:1%溶菌酶+1%蜗牛酶+1%纤维素酶,山梨醇作为渗透压稳定剂(0.6 mol/L,pH6.88),酶解温度33℃,酶解5 h;再生培养基为0.6 mol/L NaCl高渗透压豆汁培养基,涂布法再生。     

不同生化因子对米曲霉蛋白酶系活力的影响

研究不同生化因子（金属离子、乙二胺四乙酸（EDTA）和十二烷基磺酸钠（SDS））对米曲霉蛋白酶系（包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、氨肽酶和羧肽酶等5种）活力的影响,结果显示：生化因子都对羧肽酶活力有促进作用,影响最强的是Ca2+,其相对酶活达到310%;对酸性蛋白酶活力促进作用最强的是的Mn2+,相对酶活达到317%;而SDS完全抑制其活性。生化因子对中性蛋白酶、碱性蛋白酶和氨肽酶活力主要起抑制作用,抑制能力最强的分别是Ge2+,Fe3+和SDS。Ag+对氨肽酶活力促进显著,相对酶活力达到483%。     

黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究

以糖化酶活力为指标,通过单因素实验,分别考察了添加物、补料时间和补料量对黑曲霉发酵产糖化酶的影响。通过正交实验,考察了发酵条件对黑曲霉发酵产酶的影响。结果表明,添加0.4%的(NH4)2SO4作为促进剂可使酶活提高17%,最佳补料时间为48 h,补料量6 mL,补料可使发酵周期由原来的96 h延长到120 h;最佳发酵条件为接种量15%,250 mL三角瓶装液量50 mL,初始pH为4.5。     

含水量对黑曲霉ZM-8大曲酶活影响的研究

黑曲霉ZM-8大曲的质量对相关生产影响很大,黑曲霉ZM-8大曲的含水量直接影响大曲的生产结果。通过44%～51%含水量的培养试验,测定主要酶活,结果说明,考虑到各种酶系的特点,含水条件和酶活高峰的出现,大曲含水量控制在49%～50%,室温25℃,培养40h较适宜。其中:FPU酶可达105U/g、C1酶可达720U/g、CMC酶可达512U/g、β-葡萄糖苷酶可达1250U/g和淀粉酶可达30U/g的酶活,取得了较好的大曲制曲结果。