黑曲霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF（Q-Sepharose FF）离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF（Phenyl-Sepharose 6 FF）疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP（Butyl-Sepharose HP）疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30～50 ℃,pH 2.0～8.0之间具有较好的稳定性。     

黑曲霉DB056分泌的柚苷酶分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉DB056发酵产生的柚苷酶进行分离纯化并研究其基本特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析分离,所得柚苷酶的比活力为1716.41U/mg蛋白,纯化倍数为17.52倍。柚苷酶具有4个相对分子质量的组分,较适pH值范围4.0～5.0,最稳定的pH4.5;该酶适宜的作用温度范围45～55℃,温度50℃时酶活力最大,45℃和50℃条件下可以分别稳定4h和2h,55℃时柚苷酶1h失活50%;Ag+、Hg2+对柚苷酶具有强烈的抑制作用,其它金属离子对柚苷酶的影响随离子浓度的不同而不同,如0.1mmol/LCa2+、K+、Al3+、Mn2+、Cu2+可提高柚苷酶的活力,而5.0mmol/LFe2+、Al3+对柚苷酶显示抑制作用。     

黑曲霉-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

\"绿色资源\"纤维素广泛应用于能源、医药、食品等领域,β-葡萄糖苷酶(BGL)作为纤维素降解酶系的限速酶是当前研究热点之一。作者对黑曲霉利用豆渣发酵所产的胞外β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并对该酶进行了酶学性质表征。实验结果表明,BGL最适反应温度为55℃,最适反应p H为2.0~2.5,p H稳定范围为2.0~7.5。在最适反应条件下,K_m值为8.4×10~(-4)mol/L,kcat为16 s~(-1),催化效率k_(cat)/K_m为1.92×10~4L/(mmol·s)。相比较其他报道的BGL酶,该酶具有更好的耐酸性能,可为BGL的理论研究与酶制剂的生产应用提供一定基础。     

黑曲霉菊粉酶的分离纯化与酶学特性

黑曲霉（Asperginusniger）105发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到菊粉酶组分,纯化倍数为7．73倍,活力回收率为4．39％。该菊粉酶的最适pH值为6．0,最适温度为50℃,Cu^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Fe^2＋对该酶有很强的抑制作用。菊粉酶活力与蔗糖酶活力之比为16．5,表现为内切酶活性。以菊粉为底物时,米氏常数（Kin）为0．1999 mmol／L,最大反应速度（Vmax）为117．32μmol／（mg·min）。     

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 k D的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适p H值为5.0,且在p H 5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数K_m为0.916 mmol/L,最大反应速率vmax为0.877 mmol/(L·min)。     

一种耐热性植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

采用半固态发酵方式培养泡盛曲霉(Aspergillus awamori)AS3.324,通过有机膜超滤、阴离子交换层析、凝胶层析后,得到纯化的植酸酶。酶学性质表明,其反应最适温度为50-55℃,最适pH为5.5,在37℃下以植酸钠为底物的Km值为1.03 nmol/L,Vmax为2.13μmol/(L.min)。EDTA基本不影响植酸酶活性;Ca2+,Mg2+,Mn2+对植酸酶活性有轻微的抑制作用;Fe2+,Zn2+对酶促反应有显著的抑制作用。对该酶的耐热性研究表明,经较高温度条件处理后,仍有较高残余酶活性,与当今商品化的植酸酶相比,有较强的耐热性。泡盛曲霉植酸酶作为动物饲料添加剂具有广泛的应用前景。     

黑曲霉液态发酵产柚苷酶的分离纯化及其性质研究

本文针对黑曲霉液态发酵所产柚苷酶的分离纯化工艺及其酶学性质进行研究。将黑曲霉液态发酵所产酶液,依次通过30%~70%硫酸铵盐析、膜透析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析后得到高纯度柚苷酶。经SDS-PAGE凝胶电泳仅得到一条清晰条带,分子量约为65.10 ku。纯化获得的柚苷酶比酶活可达6932.54 U/mg,纯化倍数和酶活回收率分别为13.82倍和13.30%,并且能有效水解柚皮苷。进一步研究发现,该酶的最适反应p H为4.5,最适作用温度为50℃,在20℃~50℃及p H 3.0~6.0范围内有良好的稳定性。在一定浓度范围内,K+、Ca2+和Na+对柚苷酶活性有促进作用,而Fe3+、SDS和EDTA-Na2对其活性有明显的抑制作用。本研究为深入理解柚苷酶分离纯化过程,明确其酶学性质,进一步探索柚苷酶应用于天然活性产物生物转化过程的相关机制提供了基础数据,具有非常重要的科学意义和潜在的应用价值。     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

利用A¨KTA UPC-900快速蛋白液相色谱系统(FPLC)从黑曲霉发酵粉中分离纯化出内切β-葡聚糖苷酶。分离纯化后的酶比活力提高了8.1倍,回收率为7.5%。经SDS-PAGE电泳分析该内切酶的相对分子质量为26 400。酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为4.8,Lineweaver-Burk法求得动力学参数,Km和Vmax分别为6.838×10-3mg/mL、2.906×10-2(mL.min)/mg。并确定了FPLC层析缓冲液的离子强度为4.8 mmol/L时分离效果达到最佳。     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

一株产酸性α-淀粉酶菌株的筛选及酶学性质研究

从酿造大曲中筛选到高产α-淀粉酶菌株A-5-3,对其进行生物学鉴定,鉴定结果为黑曲霉;对其发酵液进行酶学性质初步研究,结果表明:该酶的最适pH值为3.6,最适温度为70℃,热稳定性良好。在pH3.0~5.0之间,具有很好的酸稳定性且为非Ca2+依赖型水解酶,在工业生产上有良好的应用前景。     

黑曲霉产β-呋喃果糖苷酶酶学性质研究

对来源于黑曲霉的β-D-呋喃果糖苷酶的酶学特性进行了研究。结果表明,β-D-呋喃果糖苷酶的最适pH值为5．0,最适温度为50％。在40℃～60℃、pH值5．0～7．0其具有较好的稳定性。金属离子对β-呋喃果糖苷酶活性有影响。Mn^2＋和Ca^2＋能明显增强酶活,而Cu^2＋和Ag^2＋能抑制酶活。     

氯化锂诱变黑曲霉原生质体选育高产植酸酶菌株

采用氯化锂诱变黑曲霉原生质体,筛选高产植酸酶菌株。获得制备黑曲霉原生质体的最适条件:纤维素酶1.0%,蜗牛酶0.5%,菌龄24 h,酶解温度30℃,酶解时间2 h,渗透压稳定剂0.7 mol/L NaCl。采用氯化锂对制得的原生质体进行诱变,结果表明:经0.15%LiCl诱变后,原生质体存活率为23.37%,此时,获得一株植酸酶活最高的突变株,为19.24 U/mL,比出发菌株提高54.41%,该菌株具有良好的遗传稳定性。     

一株酸性糖化酶的分离纯化及酶学性质研究

从土壤中筛选得到一株产酸性糖化酶的黑曲霉ASP-S21,粗酶液通过（NH4）2s04沉淀、Sepharose HP阴离子交换层析、SephacrylS-200层析柱分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量为120kDa。该酶最适作用温度为65℃;酶的最适反应pH值为4．0;在pH2．2-7．6之间,具有较好的酸稳定性;酶的Km值为0．94mg／mL,Vmax=142．43mol（Glu）／min-L。Cu2＋和Co2＋对酶活有较强的促进作用,10mM的Cu2镟酶活力提高到129％,Fe^3＋对酶催化活力抑制作用较强。该酶且具有部分降解生淀粉的能力,在pH4．0,50℃反应1h,生淀粉酶活力为0．39U,RDA值为4．57％。得到的黑曲霉ASP-S21酸性糖化酶,产生的糖化酶活力高、耐酸稳定性好,酶争陛质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,具有良好的研究前景。     

黑曲霉SL2-111产果胶酯酶的纯化与性质

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛柱层析3个步骤,从黑曲霉SL2-111发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酯酶。经SDS-PAGE测定其分子质量约为48.8ku。最适pH值和最适温度分别为5.8和60℃。在50℃以下,pH值5.8-6.2之间酶活力相对稳定。     

Purification and Characterization of a Novel Protopectin-Solubilizing Enzyme from Aspergillus niger Z-25

A mutant, Aspergillus niger Z-25 derived from A. niger XZ-131 with N⁺ supplementation, produced a protopectin-solubilizing enzyme (protopectinase). The enzyme was purified to homogeneity by a procedure involving ammonium sulfate fractionation and gel chromatographies on DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-100 columns. The molecular weight of the protopectinase was estimated at 68.4 KD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was stable from pH 3.0 to 7.0 and up to 60°C. The optimum pH and temperature for enzyme activity was 4.0 and 50°C, respectively. The purified enzyme had 268-U/mL PPase (protopectinase) activity on citrus protopectin, and also showed 100-U/mL PGase (polygalacturonase) activity, which catalyzed the hydrolysis of polygalacturonic acid. The Km value for protopectin was 0.215 mg/mL, while the Km value for polygalacturonic acid was 39.09 mg/ml. The PPase/PGase q-value was 2.68, more than 0.5. Therefore the enzyme was considered a novel pectinase and classified as protopectinase.