草苁蓉环烯醚萜苷含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡中PI3K/Akt通路的作用

研究草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞活力与凋亡的影响并探讨其可能作用机制。MTT法检测IGBR含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞活力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白。结果表明,IGBR含药血清可降低人肝癌SMMC-7721细胞活力,诱导细胞凋亡。与对照组比较,5-FU组与IGBR组人肝癌SMMC-7721细胞中Bax蛋白表达增多,而p-Akt和Bcl-2蛋白的表达减少(p<0.05),两组间无明显差异(p>0.05);而总Akt没有明显改变。IGBR含药血清可通过PI3K/Akt信号通路,调节Bcl-2家族成员(Bax和Bcl-2),诱发人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

海参精囊水提物对模型小鼠睾丸生精细胞凋亡及 Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨海参精囊水提物对模型小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及相关蛋白的表达情况。方法 昆明种小白鼠72只随机分6组,除正常空白组用生理盐水外其他各组均腹腔注射环磷酰胺(CP,28mg/kg),每天1次,连续5天,复制睾丸生精障碍小鼠模型;同时治疗组每天灌胃不同剂量的药物1次,连续4周。用TUNEL法检测各组小鼠睾丸生精细胞的凋亡情况;用免疫组化的方法检测Bcl-2和Bax的表达,并与模型组进行比较。结果 海参精囊水提物能够抑制小鼠睾丸生精细胞的凋亡,使Bcl-2的表达增加,Bax的表达降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05、0.01)。结论 海参精囊水提物对环磷酰胺所致生精障碍模型小鼠的生精细胞凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

天然环烯醚萜化合物对蛋白质纤维的染色性能

通过染色试验,研究了环烯醚萜化合物与蛋白质纤维(皮胶原、蚕丝、白发)的染色条件,探讨了所产生的颜色与蛋白质纤维的种类以及环烯醚萜的分子结构的关系。结果表明:天然环烯醚萜类化合物以单体形式与蛋白质发生交联反应,从而产生颜色。这说明其染色机理与传统的天然染料或活性染料有本质的区别。其反应条件温和(35℃左右、弱碱性(pH=7.5～8.0水溶液中、较短时间内(2h左右))。用环烯醚萜化合物染蛋白质纤维时,所呈现出的颜色不仅与环烯醚萜的分子结构密切相关,而且与蛋白质纤维的种类有一定的关系。环烯醚萜很可能作为一类新型的天然活性染料,不仅可以用于皮革、裘皮、丝绸、毛制品的染色,还可以用于制备安全、环保的染发剂。     

海参精囊水提物对模型小鼠睾丸生精细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨海参精囊水提物对模型小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及相关蛋白的表达情况。方法昆明种小鼠72只随机分为6组,除正常空白组用生理盐水外其他各组均腹腔注射环磷酰胺(CP,28mg/kg),每天1次,连续5 d,复制睾丸生精障碍小鼠模型;同时治疗组每天灌胃不同剂量的药物1次,连续4周。用TUNEL法检测各组小鼠睾丸生精细胞的凋亡情况;用免疫组化的方法检测Bcl-2和Bax的表达,并与模型组进行比较。结果海参精囊水提物能够抑制小鼠睾丸生精细胞的凋亡,使Bcl-2的表达增加,Bax的表达降低,与模型组比较有统计学意义(P0.05、0.01)。结论海参精囊水提物对环磷酰胺所致生精障碍模型小鼠的生精细胞凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

核桃粕中环烯醚萜苷提取分离与抗疲劳活性研究

核桃粕经乙醇提取,乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,不同溶剂萃取物通过小鼠跑台试验和负重游泳试验确定抗疲劳作用,并对有明确抗疲劳效果的萃取物进行MCI分离柱、ODS反相柱层析分离,得到的单体化合物采用核磁共振法鉴定其结构。结果表明:核桃粕醇提物正丁醇萃取物抗疲劳作用效果最为明显,该部分上ODS柱经5%乙醇洗脱分离得化合物Ⅱ,鉴定得该化合物为4-羧基-7-羟基-8-乙酸乙酯基-3,6-环戊烯环烯醚萜苷,且能显著提高小鼠运动抗疲劳能力。     

稻花香活力型酒对大鼠肝细胞凋亡及Bax/Bcl-2的影响

目的:观察稻花香活力型酒对大鼠肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2的影响。方法:将体重相当的Wister大鼠随机分为5组,即稻花香活力型酒高剂量组、中剂量组,普通稻花香酒高剂量组、中剂量组,对照组。每组8只,雌雄各半。每日早上9∶00各实验大鼠经口给药1次(38°稻花香活力型酒高剂量组3.44mL/kg,中剂量组1.72mL/kg;38°稻花香白酒高剂量组3.44mL/kg,中剂量组1.72mL/kg;对照组给予蒸馏水1.72mL/kg),连续45d。末次给药后剖取肝脏,在距肝脏边缘0.5cm处取材,10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋切片。免疫组化测定肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2。结果:与普通稻花香酒组比较,稻花香活力型酒大、中剂量组细胞凋亡指数明显降低,差异有显著意义(P0.05)。稻花香活力型酒各剂量组其Bcl-2在肝细胞的表达均比普通稻花香酒各对应剂量组增强(P0.05);同时,Bax/Bcl-2的比值也降低。结论:稻花香活力型酒能有效减轻肝细胞凋亡,可能通过作用于Bax和Bcl-2,减轻肝组织损伤。     

草苁蓉提取物对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成的抑制作用

探讨富含环烯醚萜苷的草苁蓉提取物(IGBR)对H_(22)小鼠移植瘤血管生成的抑制作用。建立H_(22)肝癌皮下移植瘤模型,并用IGBR干预10 d。利用HE染色法观察肿瘤组织病理学改变,利用免疫组化法检测肿瘤组织内微血管密度(MVD),利用蛋白印迹法检测肿瘤组织缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)-2蛋白的表达。与模型组比较,IGBR组肿瘤细胞生长受抑,细胞数目较少,坏死程度较严重。与模型组比较,IGBR组肿瘤组织MVD显著降低;HIF-1α、VEGF和VEGFR-2蛋白的表达显著降低。提示IGBR对H_(22)小鼠移植瘤新生血管生成具有抑制作用,可能与下调肿瘤组织HIF-1α和VEGF的蛋白表达有关。     

四种天然环烯醚萜衍生物与甲胺的呈色性能研究

选取京尼平苷、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、梓醇四种天然环烯醚萜,通过简单的结构修饰获得相应的衍生物,并考察它们与最简单的含伯胺基化合物———甲胺的呈色反应性能,通过紫外-可见光谱(UV-vis)分析它们所形成色素的颜色与其结构之间的关系。结果表明:(1)采用β-葡萄糖苷酶对京尼平苷酸进行水解,可以得到相应的苷元;但按照同样的方法处理梓醇,却得不到相应的苷元;通过苷交换的方法处理龙胆苦苷和獐牙菜苦苷,都可以的到相应的目标产物——甲基龙胆苦苷苷元和甲基獐牙菜苦苷苷元,但是用同样的方法处理梓醇,却得不到甲基梓醇苷元。这可能是由于梓醇特殊的结构引起的。(2)甲基龙胆苦苷苷元与甲基獐牙菜苦苷苷元的结构相似,它们与甲胺反应生成色素颜色也相似,都是亮黄色。但是,京尼平与京尼平苷酸苷元的结构也很相似,但是二者与甲胺反应生成色素的差别很大,前者是蓝黑色,后者是紫红色。这说明,环烯醚萜骨架上取代基的位置对呈色性能影响很大。     

鸡屎藤中三种含硫环烯醚萜苷与含伯胺基化合物的呈色性能 Ⅰ.含硫环烯醚萜苷的制备、呈色条件和呈色性能研究

环烯醚萜是一类可以与含伯胺基的化合物发生交联呈色作用,在染色机理上与现有各类染料有本质区别的"交联呈色染料"。本文从鸡屎藤中制备了三种含硫的环烯醚萜苷,研究了它们与含伯氨基化合物的呈色反应条件,并初步推测了其呈色机理。结果表明:(1)与前期研究的不含硫的环烯醚萜(如京尼平)不同,这三种含硫环烯醚萜苷与含伯胺基化合物的交联呈色反应必须以水解和呈色反应同浴的方式进行;其中鸡屎藤苷和鸡屎藤酸甲酯即使不用β-葡萄糖苷酶的催化水解,也能在弱酸碱性条件下与含伯胺基化合物呈色;(2)三种含硫环烯醚萜苷与可溶性的牛血清蛋白和皮粉等蛋白质纤维反应所呈现的颜色,与它们和甲胺反应时生成的颜色相同,这说明环烯醚萜苷自身的分子结构决定着生成的颜色,这一特性与以前研究的不含硫的环烯醚萜是相同的。(3)含硫环烯谜萜苷在与含伯氨基化合物呈色时,可能是含硫环烯醚萜苷在伯氨基和β-葡萄糖苷酶的协同催化下于酸/碱介质中胺解形成色素中间体后,再发生中间体的聚合而产生颜色。     

茯苓多糖对2型糖尿病小鼠肾组织抗氧化能力及Bax、Bcl-2蛋白表达影响

研究探讨茯苓多糖(WRP)对2型糖尿病(NIDDM)小鼠肾组织抗氧化能力及Bax、Bcl-2蛋白表达影响。采用高糖高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)方式诱导NIDDM动物模型,然后将动物分成正常对照组、模型对照组、WRP灌胃组、罗格列酮灌胃组,药物连续灌胃42 d,检测小鼠肾组织抗氧化能力以及Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果表明,WRP能使NIDDM小鼠肾组织中超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平明显升高,丙二醛的水平明显降低;即WRP能增强机体肾脏的抗氧化性,降低脂质过氧化,保护自由基介导的氧化损伤,减轻糖尿病对肾脏的损害。WRP能抑制NIDDM小鼠肾组织中Bax基因过多表达;使糖尿病状态下肾组织细胞凋亡趋势受到抑制,对糖尿病肾病具有一定预防作用。     

草苁蓉多糖抑制J774A.1巨噬细胞炎症小体活化及细胞焦亡机制研究

目的：探讨草苁蓉多糖（BRPS）对脂多糖（LPS）联合三磷酸腺苷（ATP）诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症小体活化及细胞焦亡的抑制作用。方法：LPS联合ATP刺激J774A.1巨噬细胞,建立巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体模型。用细胞增殖毒性试剂盒检测J774A.1细胞存活率,微板法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放,免疫荧光染色法检测细胞膜损伤情况,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素-1β（IL-1β）水平,免疫印迹法测定J774A.1细胞NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、IL-1β、消皮素D（GSDMD）以及核转录因子-κB（NF-κB）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）蛋白的表达情况。结果：BRPS能增高LPS/ATP诱导的J774A.1巨噬细胞存活率,降低细胞培养液中LDH释放,减少细胞膜损伤,下调细胞NLRP3蛋白表达,上调Caspase-1前体蛋白水平,下调IL-1β以及GSDMD N端活性片段水平。此外,BRPS下调J774A.1巨噬细胞NF-κB核转位及其磷酸化水平,以及细胞外信号调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、p38 MAPK磷酸化水平。结论：BRPS可抑制LPS/ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症小体活化和焦亡,其作用可能与调控NF-κB和MAPK信号通路有关。     

草苁蓉多糖对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：研究草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡 的抑制作用。方法：利用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）损伤人脐静脉血管内皮细胞制备细胞 氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）比色法检测细胞存 活率,分光光度法检测细胞内丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）水平。采用二氯荧光乙酰乙酸盐（dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用JC-1荧光染色法观察 细胞线粒体跨膜电位（mitochondrial membrane potentials,ΔΨm）水平,采用Hoechst染色和原位末端标记（TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法观察细胞凋亡情况。Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、细胞色素c （cytochrome c,Cyt c）、Bid片段（truncated Bid,tBid）、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。 结果：BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,提高SOD活性与GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制细胞凋亡。Western blot结果显示,BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平,减小细胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有 抑制作用,机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

6-姜烯酚诱导人结直肠癌细胞凋亡及与Bax、BCL2、Caspase3和PARP1基因表达的影响

本文通过体外细胞实验应用6-姜烯酚对HCT116和HT29进行干预,以探讨6-姜烯酚诱导结直肠癌细胞凋亡及与相关凋亡蛋白(Bax、BCL2、Caspase3和PARP1)表达之间的关系。利用倒置荧光显微镜观察不同浓度的6-姜烯酚干预HCT116及HT29后细胞形态的变化,CCK8法测定不同分组HCT116及HT29抑制率,并绘制细胞增殖曲线,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同分组HCT116及HT29凋亡,Western-blot检测分析凋亡相关蛋白表达情况(Bax、BCL2、Caspase3和PARP1)。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可不同程度地诱导HCT116及HT29凋亡,促进Bax、Caspase3和PARP1蛋白水平表达(p0.05),抑制BCL2蛋白水平表达(p0.05),并增加Bax/BCL2比值比例(p0.05)。因此,6-姜烯酚诱导HCT116、HT29发生凋亡可能是与激活Bax、Caspase3和PARP1的表达以及增加Bax/BCL2比值比例相关,这一发现可为结直肠癌的临床治疗与预防提供有效参考依据。     

CHO细胞Kcmf1基因内定点整合ZsGreen1报告基因的表达稳定性研究

以Kcmf1基因NW_003614172.1第629890碱基处定点整合ZsGreen1报告基因的CHO-K1细胞(2C3)为研究材料,采用倒置荧光显微镜和流式细胞仪定量分析ZsGreen1的表达,开展系统的稳定性表达研究。2C3细胞贴壁培养连续传代50代次,100%的细胞可以稳定表达ZsGreen1报告基因。无血清悬浮驯化培养2C3细胞后,细胞表达ZsGreen1的平均荧光强度明显降低;连续悬浮传代培养60代次,表达ZsGreen1的细胞数目显著增多,添加体积分数10%FBS到悬浮培养的细胞池,ZsGreen1阳性细胞比例上升到95%以上。流式细胞术分选细胞池中高、低表达ZsGreen1蛋白的2C3细胞,PCR确认它们均含有ZsGreen1报告基因;Q-PCR发现在高、低表达ZsGreen1蛋白的细胞中,相关的ZsGreen1 mRNA水平有明显的差异。提示CHO-K1细胞Kcmf1基因内非编码区域定点整合外源基因后,不会因细胞分裂和生长而丢失外源表达基因;悬浮驯化需要优化培养基和培育条件,达到构建工程细胞的需求。     

大豆异黄酮对青年雌性大鼠卵巢、子宫组织中Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 表达的影响

目的：通过动物实验研究,观察Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 在青年雌性大鼠卵巢和子宫组织中的表达情况,从细胞凋亡角度研究大豆异黄酮对青年雌性大鼠的抗衰老作用。方法：选用2 月龄青年雌性大鼠50 只,按体质量分成5 组,每组10 只,分别为对照组(基础饲料)、低剂量组(大豆异黄酮100mg/(kg bw·d))、中剂量组(大豆异黄酮200mg/(kg bw·d))、高剂量组(大豆异黄酮300mg/(kg bw·d))、雌激素组(己烯雌酚0.5mg/kg 饲料),实验周期7 周。采用原位杂交法检测各组大鼠卵巢和子宫组织中Bcl-2 mRNA 和Bax mRNA 的表达水平。结果：大豆异黄酮能够增强大鼠卵巢和子宫组织中Bcl-2 mRNA 的表达水平;而各剂量组大鼠卵巢和子宫组织中Bax mRNA水平呈下降趋势。结论：大豆异黄酮可以增强抗凋亡基因Bcl-2 mRNA,拮抗促凋亡基因Bax mRNA 的水平,推测这是大豆异黄酮对青年雌性大鼠发挥抗衰老作用的途径之一。     

绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

本研究探讨了绿茶富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用.采用DEEM培养基培养对数生长期的肝癌HepG2细胞,并将其作为对照组,将浓度分别为0.11 g/L、0.18 g/L、0.25 g/L、0.50 g/L的绿茶富硒蛋白为实验组;将添加二甲基亚砜(DMSO)的DMEM培养基作为参考组.通过光密度值计算抑制率,采用流...     

草苁蓉多糖对氧化损伤致血管内皮细胞凋亡相关蛋白表达的影响

该研究探讨草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化损伤致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）凋亡相关蛋白表达的影响。以叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,t-BHP）损伤HUVEC建立体外凋亡模型,分为正常组、t-BHP组（损伤组）、BRPS组,分别应用细胞增殖毒性检测试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法和流式细胞术检测细胞存活率和细胞凋亡率,用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶原（pro-cysteine aspastic acid-specific protease,Procaspase）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase,PARP]、Survivin、p53、核转录因子-кB（nuclear factor-кB,NF-кB）信号通路蛋白以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）信号通路蛋白活化水平。结果显示,与正常组比较,损伤组HUVEC细胞活力降低50.6%,细胞凋亡率升高41.0%;与损伤组比较,BRPS组HUVEC细胞活力升高16.4%,细胞凋亡率降低了22.2%。此外,t-BHP降低HUVEC细胞的Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP和Survivin蛋白水平,升高Cleaved-PARP、p53、NF-κB、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signalregulated kinase,p-ERK）、磷酸化 c-Jun N 末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38）蛋白水平。而BRPS升高Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP 和 Survivin 蛋白水平,降低 Cleaved-PARP、p53、NF-кB、p-JNK、p-p38 蛋白水平。研究结果表明,BRPS对t-BHP引起HUVEC凋亡具有抑制作用,其机制可能与JNK、p38及NF-κB调控有关。     

蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的影响

为探讨蜂胶醇提物对人肝癌细胞Hep G2 增殖和凋亡的影响,采用MTT 法检测蜂胶醇提物对Hep G2 细胞增殖的抑制作用,用荧光倒置显微镜和流式细胞仪分析蜂胶醇提物对Hep G2 细胞凋亡的影响。结果表明：12.5～200μg/mL 质量浓度的蜂胶醇提物作用24、48h 后,均能不同程度地抑制Hep G2 细胞的增殖,呈明显的时间、剂量依赖关系,半数抑制质量浓度(IC50)分别是115、78μg/mL。作用8h 后,Hep G2 细胞出现不同程度的凋亡,凋亡率由6.36% 上升到21.9%,呈现出剂量依赖关系。故蜂胶醇提物可显著抑制人肝癌细胞Hep G2 的生长,诱导其凋亡。