从东北红豆杉树叶中提取紫杉醇的过程分析

通过实验分析了和讨论东北红豆杉树叶中紫杉醇的提取过程,采用无毒,无污染的乙醇作为提取溶剂,在高分子树脂柱和Ｚｏｒｂａｘ－ＳＷ柱上进行了逐级提纯,得到了较高纯度的产品,测定了洗脱过程中紫杉烷类化合物的浓度分布情况,为进行规模化生产提供了合理的工艺路线。     

两种红豆杉属植物细胞悬浮培养生产紫杉醇的初步研究

进行了不同培养条件对东北红豆杉悬浮细胞生长影响的研究，比较了东北红豆杉(T．cuspidata)和曼地亚红豆杉(T．media)悬浮细胞体系中紫杉醇的生产量。结果表明，东北红豆杉细胞悬浮培养适宜的接种量是2g／瓶、培养基为B5基本培养基、蔗糖质量浓度20～30g／L时悬浮培养细胞的生长较好。东北红豆杉悬浮细胞在B5培养基中质量浓度为0．127mg／L，曼地亚红豆杉悬浮细胞在B5培养基中质量浓度为0．487mg／L。     

紫杉醇提取分离方法的研究

探讨了采用ＣＬＣ－Ｃ８柱,以乙腈：乙醇：水（９：２：９）为流动相,在２２８ｎｍ下检测的一套快速、准确的测定东北红豆杉中紫杉醇含量的高效液相色谱方法。其相关系数ｒ＝０．９９９１,变异系数为１．８２％,最低检出限可达２．０μｇ     

日本东北红豆杉枝化学成分研究

采用甲醇浸泡提取制得浸膏,再将浸膏加饱和食盐水溶解后依次用正己烷萃取除去油脂,再用二氯甲烷萃取浓缩萃取物。用柱层析、重结晶和高效液相色谱等进行分离,得到两种单体化合物,经1H-NMR,13C-NMR和IR鉴定并与文献对照,确定一种为紫杉吉酚,另一种为紫杉平F。     

转盘式反应器中高密度培养红豆杉细胞的研究

研究了红豆杉细胞在转盘式反应器中的高密度培养,并与摇瓶培养进行了比较,结果表明：转盘式反应器可以在高密度条件下进行红豆杉细胞的培养,并明显提高紫杉醇生成率,获得较高的细胞产率。在稀释率为0．05d^-1条件下,最高紫杉醇含量达到14．4mg／L。     

光培养条件对东北红豆杉外植体组培效果的影响

为了研究不同光培养条件对东北红豆杉外植体生长状况的影响,本文以带芽幼茎为试验材料,探讨了在光培养条件下,培养基中蔗糖的最佳用量,并采用正交试验设计分析得到适合东北红豆杉外植体生长的最佳光培养条件.试验结果表明:在光质为LED红蓝光(色比R∶B=3∶1),CO2体积浓度为1500 mg/L,光照强度为12.5 μmol·m-2·s-1,光周期为10 h/d的环境下,培养基中蔗糖的最佳用量为10 g/L.此时,外植体芽萌动率和出愈率最高,芽萌动时间和初愈时间短,褐化率最低.正交试验得到适合东北红豆杉外植体生长的最佳光培养条件组合为:CO2体积浓度为3000 mg/L+光照强度为37.5 μmol·m-2·s-1十光周期为14 h/d.验证试验表明:该环境下外植体与对照组(无光)对比,染菌率降低了4.33％,芽萌动时间和初愈时间分别降低了2.33、3.75 d,芽萌动率和初愈率分别提高了16％、6.33％,愈伤组织鲜重增长倍数提高了0.35倍,紫杉醇含量提高了0.09 mg/L,为东北红豆杉在光培养环境条件下组织培养提供了理论基础和技术支持.     

低温诱导红豆杉细胞同步化的研究

研究了用低温处理悬浮培养红豆杉细胞同步化,比较了2℃、4℃、6℃、8℃不同的温度,12h,24h,36h不同的处理时间以及12h,24h,36h不同的恢复时间对红豆杉细胞分裂指数的影响,结果表明：2℃处理12h,恢复12h,红豆杉细胞分裂指数能达到最高8．62％,提高了115％。     

溶瘤腺病毒AdCN103联合紫杉醇抗癌研究

紫杉醇(paclitaxel,Taxol)通过抑制人或动物细胞微管蛋白和组成微管蛋白的二聚体的动态平衡来抑制肿瘤细胞生长.通过AdCN103联合使用不同浓度Taxol及单纯使用Taxol对不同癌细胞的杀伤效应进行对比研究.结果表明,Taxol对AdCN103在癌细胞中的复制能力没有显著影响.当Taxol浓度增高至4 μmol/L以上,Taxo联合AdCN103杀伤肿瘤细胞的能力明显好于单纯使用Taxol.     

应用现代发酵技术生产植物源珍稀药物的产业化前景——以天然抗癌药物紫杉醇为例

紫杉醇（Paclitaxel,商品名Taxo1）是当今世界公认的广谱、疗效确切的二萜类抗癌药物,广泛用于卵巢癌、乳腺癌等的治疗。本文对紫杉醇的药用价值及其生产技术概况进行了综述,尤其就利用现代发酵技术解决紫杉醇药源稀缺问题的前景进行了详细探讨。     

红豆杉为何能走进联合国总部?

红豆杉到底是什么植物?为什么在联合国总部门前都可以看到它靓丽的身姿?1965年11月,美国探险家詹森·威廉夫妇在阿拉斯加沿海岸探险时发现一个村落,村上有100多位百岁以上的老人,年龄     

东北矮紫杉人工种子的制备

以矮紫杉的愈伤组织及腋芽为繁殖体,对人工种子的制作工艺、胚乳配方和萌发条件等进行初步研究。采用滴注法在海藻酸钠凝胶系统中添加不同种类及浓度的可溶性淀粉、诱导子和植物激素制备人工种子。结果表明,3.0%海藻酸钠加2.5%CaCl2为人工种子的最佳种皮配方;添加1.5%的可溶性淀粉能提高人工胚乳的保水性,24℃下储藏15 d之后失水率为25.29%;在人工胚乳中添加诱导子,以10-6mg/L水杨酸效果最好,种子颗粒均一透明;在人工胚乳中添加NAA能提高人工种子的萌发率,以1.5 mg/L NAA的效果最好,培养30 d后萌发率达38%。     

东北矮紫杉人工种子的制备

以矮紫杉的愈伤组织及腋芽为繁殖体,对人工种子的制作工艺、胚乳配方和萌发条件等进行初步研究。采用滴注法在海藻酸钠凝胶系统中添加不同种类及浓度的可溶性淀粉、诱导子和植物激素制备人工种子。结果表明,3.0%海藻酸钠加2.5%CaCl2为人工种子的最佳种皮配方;添加1.5%的可溶性淀粉能提高人工胚乳的保水性,24℃下储藏15 d之后失水率为25.29%;在人工胚乳中添加诱导子,以10-6mg/L水杨酸效果最好,种子颗粒均一透明;在人工胚乳中添加NAA能提高人工种子的萌发率,以1.5 mg/L NAA的效果最好,培养30 d后萌发率达38%。     

红豆杉原生质体制备和培养研究

采用不同浓度的纤维索酶和果胶酶混合液对红豆杉种子的胚进行了处理,采用3％ 0.5％(m／v)的纤维索酶 果胶酶混合液效果好．得到了红豆杉胚原生质体;同时采用了B5、V-KM、MS3种培养基对所得到的原生质体进行了初步培养;实验结果表明．采用V-KM附加椰子汁(含天然植物激素)培养基培养胚性原生质体效果较好,并研究了植物激素的浓度和光照强度等对愈伤组织的诱导的影响,表明采用IAA和NAA对愈伤组织生长效果较好,光照强度在1000lx生长效果较好.     

曼地亚红豆杉枝叶挥发油化学成分的GC-MS分析

采用多种方法提取了曼地亚红豆杉混合枝叶和单独的枝干或叶中的挥发油,并用气相色谱-质谱（GC-MS）方法对它们的化学成分进行鉴定,用面积归一法测定了各组分的百分含量。实验表明：采用微波辅助水蒸气蒸馏法、微波辅助溶剂提取法、超声波辅助溶剂提取法和溶剂加热回流提取法分别提取曼地亚红豆杉混合枝叶中挥发油,其中分别鉴定出27、26、13及20种成分;运用溶剂加热回流提取法从曼地亚红豆杉单独的枝干和叶中提取的挥发油中可分别鉴定出16和24种成分,挥发油得率分别为4.21%和9.70%。从实验结果可知：不同提取工艺所得曼地亚红豆杉枝叶中挥发油种类差异较大,且叶中挥发油含量明显高于枝干。     

东北矮紫杉体细胞胚的诱导

为了建立东北矮紫杉体细胞胚的诱导培养体系,以东北矮紫杉种胚为实验材料,研究了基本培养基及2,4-D、NAA、Kinetin(KT)和Zeatin(ZT)等植物生长调节剂对体细胞胚诱导效果的影响,筛选出适合诱导愈伤组织和体细胞胚的培养基配方。结果表明,种胚在mB5+0.5 mg/L 2,4-D+4 mg/LNAA+0.2 mg/L KT培养基上暗培养27 d后成功诱导出大量的愈伤组织,并且生长迅速,诱导率达66.7%;将诱导出的愈伤组织转移到mB5+3 mg/L ZT培养基中培养,20 d后表面上出现白色的颗粒状培养物,经显微观察发现白色颗粒状培养物为胚性组织,可以观察到球状细胞团。适合东北矮紫杉成熟种子诱导愈伤组织的培养基是mB5+0.5 mg/L 2,4-D+4 mg/L NAA+0.2 mg/L KT,适合诱导体细胞胚的培养基是mB5+3 mg/L ZT。     

南方红豆杉叶中活性多糖的分离与纯化

采用水提醇沉方法从南方红豆杉枝叶中得到红豆杉总多糖，经DEAE-Sepharose FF阴离子交换色谱分离得到3种酸性多糖，分别命名为红豆杉多糖-1(PTM-1)、红豆杉多糖-2(PTM-3)和红豆杉多糖-3（PTM-3），条件为：色谱柱先用pH值为8.5的HCl-Tris缓冲液平衡，然后用0.1、 0.3、 0.5、0.7 和 0.9 mol/L的NaCl溶液阶跃洗脱.PTM-3进一步采用凝胶过滤色谱纯化、脱盐和冻干后，用高压凝胶渗透色谱、紫外、红外和薄层色谱分析其结构, 发现PTM-3不含蛋白和核酸，重均相对分子质量Mw为12.3 kD，单糖组成含有L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-鼠李糖，以β-(1,3)糖苷键连接.