白腐菌Trametes versicolor产漆酶发酵条件的优化

对白腐菌Trametesversicolor产漆酶的发酵条件进行了研究,结果表明摇瓶培养产漆酶的最佳培养基组成为:可溶性淀粉2g/L,氯化铵1.2g/L,KH2PO42g/L,MgSO4·7H2O0.5g/L,CaCl2·2H2O0.1g/L,VB10.001g/L,Tween802g/L,微量元素混合液7mL/L,愈创木酚0.015mmol/L,CuSO4·5H2O60μmol/L,pH3.5;最佳发酵条件为:在250mL三角瓶装50mL培养基,接种量(Φ8mm)2块,25℃,150r/min振荡培养10d时,漆酶活力达到862U/L,约是优化前的4倍。     

一株木质素降解白腐菌的筛选、鉴定及其产漆酶培养基的优化

为筛选产木质素降解酶的菌株,采用苯胺蓝-PDA平板法和愈创木酚-PDA平板法从铁皮石斛生长的树皮中筛选到菌株SHIHU-X2,经ITS测序分析将SHIHU-X2鉴定为白腐真菌白黄小脆柄菇(Psathyrella candolleana)。应用响应面法优化产漆酶培养基,结果表明SHIHU-X2菌株产漆酶的最优培养基是:去皮马铃薯200 g/L,葡萄糖20 g/L,蛋白胨1.24 g/L,KH2PO4 1 g/L,酒石酸铵0.02 g/L,CuSO4 0.01 g/L,MgSO4 0.56 g/L,MnSO4 0.057 g/L。漆酶活力从初始产酶培养基1.11 U/mL提高到响应面优化后的2.32 U/mL,漆酶活力提高了109 %。     

产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化

为开发新型高产β-葡萄糖苷酶的微生物菌种资源,本实验从腐木中分离获得1株产β-葡萄糖苷酶的青霉菌株L1;经等离子-硫酸二乙酯复合诱变后利用七叶苷平板法初筛,摇瓶发酵复筛,最终获得1株可稳定遗传的突变菌株D-6,经单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面试验确定了其发酵产酶最佳条件。结果表明,最佳产酶条件是:KH_2PO_4 6 g/L、MgSO_4·7H_2O1 g/L、CaCl_2 0.5 g/L、FeS04 0.1 g/L,初始pH5.2,接种量5%(孢子浓度10~8个/mL),碳源添加量(X_1)玉米秸秆45.74 g/L、氮源添加量(X_2)(NH_4)_2SO_47.23 g/L、装液量(X_5) 63 mL/250 mL发酵温度28℃摇床转速160 r/min,发酵时间132 h,D-6菌株的β-葡萄糖苷酶活力为142.92 U/mL,较出发菌株L1提高了274.4%。研究结果为产β-葡萄糖苷酶菌株发酵条件优化提供技术参考同时为该类菌株的开发和应用提供有效的菌种资源。     

以水稻秸秆为基质里氏木霉产酶条件优化

以里氏木霉(Trichoderma reesei)为研究对象,对水稻秸秆进行糖化试验。通过单因素试验及响应面法优化里氏木霉产酶培养基及产酶条件。结果表明,里氏木霉产酶最佳培养基为：水稻秸秆15.0 g/L、(NH₄)₂SO₄ 2.0 g/L、KH₂PO₄ 3.0 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、吐温-80 0.5 mL/L、微量元素液10.0 mL/L、FeSO₄·7H₂O 0.005 g/L。此优化条件下,菌株的滤纸酶酶活为0.612 PFU/mL,提高了52.6%。最佳发酵条件为：发酵温度29℃,初始pH 6、接种量5.0%、转速150 r/min、发酵时间8 d。在此优化条件下,滤纸酶酶活为1.12 PFU/mL,提高了83.2%。     

虎皮香菇漆酶的发酵优化

为制备食品级漆酶,以可用于食品的原料对虎皮香菇的漆酶发酵进行优化,考察培养条件、碳源、氮源及铜离子等因素对发酵产酶的影响。确定虎皮香菇产漆酶的发酵培养基为:果糖48 g/L,玉米粉12 g/L,胰蛋白胨9 g/L,NH_4H2_PO_41 g/L,KH_2PO_42 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.25 g/L,CuSO_4·5H_2O 1 mmol/L;培养温度为30℃,初始p H自然,种龄3 d,接种量6%(体积比),装液量150 m L/500 m L三角瓶,发酵1 d~4 d摇床转速为150 r/min,第4 d~11 d摇床转速为200 r/min,发酵液中漆酶活性达到462.59 U/m L,为优化前的26倍。     

培养基及培养条件对Pycnoporus sp. SYBC-L1分泌漆酶的影响

从作者所在实验室保存的3株白腐真菌中筛选到一株液态发酵产漆酶的密孔菌Pycnop-orus sp.SYBC-L1,以漆酶活力为指标,采用正交试验法,优化了Pycnoporus sp.SYBC-L1分泌漆酶的培养基:麸皮水煮液60 g/L,葡萄糖60 g/L,豆粕粉15 g/L,CuSO_4·5H_2O 1.0 mmol/L;培养条件:初始pH 3.0,装液量50 mL/250 mL,30℃、200 r/min培养13 d,漆酶活力达24.95 U/mL,为优化前的36.16倍.     

产柚苷酶黑曲霉SL2K发酵条件优化

该研究以黑曲霉（Aspergillus niger）SL2K为研究对象,对其产柚苷酶的液态发酵条件进行优化。 通过单因素试验对碳源、氮 源、诱导物、接种量、初始pH值和培养时间进行考查,在单因素基础上,选取麸皮粉添加量、蛋白胨添加量、接种量、初始pH值4个因素 进行4水平正交试验优化。 结果表明,优化后的产酶发酵条件为麸皮粉添加量3%,蛋白胨添加量5%,接种量8%,初始pH值为5.0,鼠李 糖0.08%、KH2PO4 1 g/L,KCl 0.5 g/L,MgSO·4 7H2O 0.5 g/L,FeSO4 0.01 g/L,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速180 r/min,培养温度28 ℃, 培养时间96 h。 在此优化条件下,柚苷酶活力为233.89 U/mL,是优化前的2.13倍。     

蜜环菌产漆酶的发酵条件研究

对蜜环菌(Amillariella mellea)产漆酶的发酵条件作了研究。结果表明蜜环菌产漆酶的最佳培养基成分为:玉米粉30g/L,豆粕12g/L,微量元素混合液40mL/L,C/N2.5,吐温801g/L,木屑0.01g/L,CuSO4·5H2O0.05mmol/L。最佳发酵条件为培养基初始pH5.0,培养基装量为250mL三角瓶中35mL培养液,25℃条件下振荡培养(180r/min)18d。     

产酶溶杆菌L-43合成抗菌肽的发酵工艺优化

为提高产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)L-43发酵抗菌肽的产量,以抗菌肽效价为指标,采用单因素试验与正交试验对产酶溶杆菌L-43发酵合成抗菌肽的培养基与发酵条件进行优化,获得了发酵培养基配比为麦芽糖10.0 g/L,胰蛋白胨10.0 g/L,MgSO₄ 1.5 g/L,优化后效价达到3 770.52 AU/mL,与优化前相比,效价提高了6.26倍;在优化得到的发酵培养基基础上,探究发酵条件,培养基初始pH 7.0,装液量50 mL/250 mL,接种量2.0%(体积分数),发酵温度32℃,摇床转速180 r/min,发酵时间22 h,优化后效价达到9 422.33 AU/mL,比优化前提高了15.6倍。对产酶溶杆菌抗菌肽合成量进行多方面优化,进一步提高了抗菌肽发酵产量,同时降低了发酵成本,为后期产酶溶杆菌抑菌剂的规模化生产及应用提供了参考。     

一株纳豆芽孢杆菌的产酶条件优化

从一株实验室保藏的产纳豆激酶细菌出发,先对其液体发酵产酶的培养基和培养条件进行优化,在此优化基础上,利用Plackett-Burman试验筛选出影响纳豆芽孢杆菌产酶的3个主要因素:胰蛋白胨添加量、MgSO4添加量、发酵温度,利用Box-Behnken进行响应面试验设计,优化得到最优发酵条件。发酵培养基条件(g/L):胰蛋白胨26.6、乳糖10.0、Na2HPO45.0、NaH2PO41.0、CaCl20.2、MgSO41.35;发酵条件:种龄12h、接种量2%、发酵温度33℃、发酵时间56h、装液量50mL/250mL。此发酵条件下发酵液的纳豆激酶酶活力为743.65U/mL,比优化前提高了232.33U/mL。     

灵芝漆酶高产菌株的筛选及产酶诱导

通过对灵芝1个野生菌株和9个栽培菌株进行平板初筛和液体发酵复筛,得到一株漆酶高产菌株。以该菌株为研究对象,分别考察了不同浓度Cu2+和真菌诱导子对其产漆酶的影响。结果表明:在一定浓度范围内,Cu2+能够促进该灵芝菌株漆酶的生产,当Cu2+浓度为1.0 mmol/L时,灵芝漆酶的活性达到最高;真菌诱导子同样能够显著促进灵芝漆酶的生产,随着真菌诱导子浓度的升高,灵芝漆酶的活性也逐渐升高,当真菌诱导子浓度达到120μg/mL时,灵芝漆酶活性达到最高。     

红平菇漆酶基因异源表达及对染料脱色的研究

以白腐菌红平菇Pleurotus djamor RNA为模板,通过RT-PCR得到漆酶Pd-lac1基因的完整CDS序列。构建毕赤酵母表达载体pPICZB-Pd-Lac1,并通过电转化法导入Pichia pastoris中,通过PCR结果证明,Pd-lac1的CDS序列部分阳性转化子已经整合到甲醇毕赤酵母染色体上,经摇瓶液体培养后筛选出蛋白表达较高的酵母工程菌株。漆酶活力达54 U/L。进而研究了重组漆酶对染料脱色的影响。结果表明：重组漆酶对蒽醌类SN4R脱色可达52.8%;杂环类中性红、偶氮类甲基橙和三苯基甲烷类孔雀绿的脱色率低于SN4R,脱色率分别为14.8%、14.5%、0.24%,显示出重组漆酶对SN4R脱色效率具有较大的应用潜力,从而对废水处理具有更广的应用前景。     

金针菇漆酶的固定化及其性质研究

采用海藻酸钠包埋法制备固定化漆酶,结果表明,固定化pH值为4.5,海藻酸钠与CaCl2质量浓度均为2％,酶液与海藻酸钠体积比为1∶1时,漆酶的固定化效果最佳,酶活回收率为48.6％.固定化酶的最适pH值为3.0,最适温度为40℃,米氏常数Km为21.5μmol/L,游离酶的最适pH值为3.0,最适温度为30℃,米氏常数Km为18.6μmol/L,与游离酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显提高,耐酸性略有增加,最适反应温度提高了10℃.     

漆酶在饮料中的潜在应用

介绍漆酶在葡萄酒、果汁和啤酒生产中的潜在应用。     

基于漆酶的时间-温度指示剂研究

目的研制基于漆酶的时间-温度指示剂(time-temperatureintegrators,TTI),指示并预测相应食品的货架期。方法利用漆酶对愈创木氧化分解反应的催化作用,通过调节加酶量,使愈创木酚的氧化反应产生随时间和温度累积的颜色变化效应,从而获得4种不同效果的TTI。在4、10、25、35℃恒温条件下对4种不同TTI动力学参数进行了研究,计算其反应活化能值。结果 4种TTI的活化能指示范围分别为0～50、17～67、15～65、11～61kJ/mol。结论该方法操作简单,颜色变化所产生的指示效果明显。根据TTI反应的终点与食品货架寿命的终点相吻合的原则, 4种TTI可分别用于牛奶、肉类新鲜度的指示。     

漆酶的结构及其应用研究进展

漆酶是一类含铜的多酚氧化酶,它通过将分子氧还原成水来氧化多种酚类和非酚类化合物。近年来,该酶已被应用于纺织、纸浆造纸以及食品行业,其也被运用于生物传感器和生物燃料电池的设计、医学诊断工具、生物修复剂进行清理除草剂、杀虫剂和修复含有炸药的土壤等方面。该文综述了漆酶的结构、作用机理、特性、生产及应用的研究进展,以期对该酶的深入研究提供一定的借鉴。     

Catalytic activity of laccase hosted in reversed micelles

Nanostructured reversed micelles induce a high laccase activity in organic solvents, because enzymes can maintain their highly dimensional structure in water pools of reversed micelles [RMs]. Laccase attracts considerable attention as a novel industrial enzyme due to its high capability to catalyze the oxidation of aromatic compounds. The catalytic activities of lyophilized laccase and laccase entrapped in RMs were compared using an oxidative reaction. Laccase hosted in an anionic RM effectively catalyzed the oxidative reaction in various organic solvents, while lyophilized laccase exhibited no such catalytic activity. To optimize the preparation and reaction conditions for laccase in RMs, we examined the effects of pH of water pools of RMs, the concentrations of both enzyme and surfactant for the preparation of RMs, the hydration ratio (Wo), and the reaction temperature on laccase catalytic activity in organic media. Laccase entrapped in RMs exhibited the highest catalytic activity in isooctane under the following conditions: bis-2-ethylhexyl sulfosuccinate sodium salt (AOT) of 100 mM, pH 6.0, Wo=40, and reaction temperature of 60 degrees C. Under the optimum conditions, environmental pollutants such as bisphenol A, 2,4-dichlorophenol and 2,4,6-trichlorophenol were effectively degraded in 3 h.     

Potential applications of laccase in the food industry

Laccase is a widely studied enzyme because of its potential use in several areas such as textile, paper and pulp industries. This review presents the potential application of this enzyme in the food industry. Laccase can be used in bioremediation, beverage (wine, fruit juice and beer) processing, ascorbic acid determination, sugar beet pectin gelation, baking, and as biosensor and to improve food sensory parameters. Laccase could increase productivity, efficiency and quality of food products without a costly investment and has the advantage of being a mild technology.     

真菌漆酶的生产、性质和应用

本文总结了真菌漆酶的发酵法生产与活力测定方法，介绍了漆酶的结构和活性部位，重点介绍了漆酶的理化性质和乍物学功能，还详述了真菌漆酶在有机合成、环保、食品和造纸等行业中的应用。