巧克力中沙门氏菌检测能力验证结果与分析

目的 通过参加中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-135巧克力中沙门氏菌检验能力验证活动, 提高实验室沙门氏菌的检测能力, 增强实验室的竞争力。方法 按照GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》进行沙门氏菌的分离与血清学鉴定, 辅以VIDAS 30 全自动酶联免疫分析系统进行快速初筛, 并以VITEK 2 Compact自动微生物快速检测分析系统对分离出的可疑菌落进行生化鉴定。结果 样品编号为0148的检出鼠伤寒沙门氏菌, 0546的检出肠沙门菌双相亚利桑那亚种(沙门氏菌Ⅲb), 0676未检出沙门氏菌。结论 本次实验发现的肠沙门菌双相亚利桑那亚种在沙门氏菌属显色平板上出现蓝色菌落, 与以往判定的紫红色菌落有差异, 在检测中应当引起关注。     

能力验证巧克力样品中肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种的分离鉴定

目的验证国标法和实时荧光定量PCR法2种方法对能力验证中的沙门氏菌双相亚利桑那亚种分离与鉴定的效果。方法按照作业指导书要求及GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法分离菌株,以实时荧光定量PCR仪对分离菌株进行快速筛查,再将生化鉴定结果符合沙门氏菌特征的菌株进行血清学鉴定。结果样品CODE 0575在沙门氏菌显色平板上分离得到蓝绿色圆形菌落,在BS平板上分离得到灰绿色圆形菌落,经实时荧光定量PCR仪快速筛查,结果为阳性;再通过VITEK 2 compact鉴定为肠道沙门菌双相亚利桑那亚种;该菌不产硫化氢,ONPG为阳性,确定血清型为60:r:e,n,x,z15。结论以国标法为基准,借助实时荧光定量PCR仪和VITEK 2全自动鉴定系统进行检测,可确保沙门氏菌双相亚利桑那亚种不被漏检;应特别注意沙门氏菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上与常见沙门菌表型不一致;建议扩大对沙门氏菌双相亚利桑那亚种的监测范围。     

荧光酶免疫分析仪-微生物鉴定仪在水产品沙门氏菌检测中的应用

采用全自动荧光酶免疫分析仪进行初筛,全自动微生物鉴定仪进行阳性菌株的生化性状鉴定,建立了水产品沙门氏菌的快速检测方法。经过48h增菌之后,VIDAS法可在45min之内出具结果,阳性菌株经选择性培养基分离及纯化后根据VITEK检测结果判定是否属于沙门氏菌。联用法的灵敏度为菌悬液浓度≥103cfu/mL,一般染菌样品经48h增菌之后菌悬液浓度均能达到106cfu/mL以上。采用联用法与国标法对参考菌株和124种水产品进行检测,结果完全一致。联用法快捷、有效,适用于水产品沙门氏菌的检测。     

运用实时荧光PCR法辅助鉴定能力验证样品中的沙门氏菌

目的运用实时荧光PCR法辅助鉴定能力验证样品中的沙门氏菌,以提高检验准确度。方法采用传统的增菌、选择性培养、生化鉴定方法进行样品检验,实时荧光PCR法作为辅助手段对BPW增菌液及可疑菌落进行扩增,最后用API20E鉴定系统对可疑菌落进行确认。结果 3个样品经增菌、选择性培养、生化鉴定后均无显著符合沙门氏菌菌落特征及生化特征的可疑菌落;缓冲蛋白胨水增菌液实时荧光PCR法扩增结果表明样品S02为可疑样品,其分离得到的菌落S02-4有典型扩增曲线;经API20E鉴定系统确认,样品S02为阳性样品,阳性菌为猪霍乱沙门氏菌亚利桑那亚种。结论实时荧光PCR法操作简单,准确度高,可作为传统检验方法的有效补充。     

能力验证中沙门氏菌的分离鉴定与血清分型

目的通过参加NIFDC-PT-098乳粉中沙门氏菌检验的能力验证,提高本实验室的检测能力,增强实验室竞争力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对2份样品中的沙门氏菌进行分离和血清学鉴定。并以全自动荧光免疫分析系统(MINI VIDAS)进行快速初筛,利用全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号CODE423检出鼠伤寒沙门氏菌,其血清分型为O:4,5,12,H:I;1,2。编号CODE484未检出。结论本次能力验证获得满意结果,发现以国标法为基准,优先选用沙门氏菌属显色培养基平板和XLD平板为参照,同时使用VITEK2和MINI VIDAS作为辅助进行检测,综合这几种方法可确保实验结果的准确性,这为以后检验使用辅助方法检测提供了参考依据。同时本次能力验证也促进了实验室保持较高的检验水平。     

2018年巧克力中沙门氏菌检测能力验证结果与分析

目的参加中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-135巧克力中沙门氏菌检验能力验证,提高实验室的检测技术能力与水平。方法按照盲样作业指导书的要求对样品进行前处理后,依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对3份样品进行沙门氏菌的分离和血清学鉴定,对分离出的可疑菌落用全自动微生物鉴定系统进行鉴定。结果CODE0109样品中检出鼠伤寒沙门氏菌、CODE0143样品中检出肠沙门双相亚利桑那亚种(沙门氏菌Ⅲb),CODE0835样品中未检出沙门氏菌。本实验室顺利完成考核,测定结果与考核结果一致。结论本次能力验证检出的肠沙门双相亚利桑那亚种在沙门氏菌显色平板上出现蓝色菌落,而以往则为紫红色菌落,因此在检测中应引起重视。通过此次能力验证,本实验室的沙门氏菌检测技术水平得到了有效验证和提高。     

免疫磁捕获-荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(Real-time PCR)技术准确、快速检测食品中沙门氏菌(Salmonella spp)的方法。采用亲和纯化的羊抗沙门氏菌抗体与Dynabeads M-280磁珠制备沙门氏菌免疫磁珠,优化反应条件,建立免疫磁珠分离方法。同时根据沙门氏菌特异性ttr基因,建立Real-time PCR体系,并检测其特异性及敏感性。结果显示,沙门氏菌可产生荧光信号,而其他细菌均未见明显荧光信号。利用所建立的免疫磁捕获-荧光定量PCR(IMS-real-time PCR)方法可以检测初始含菌量最低为6.5CFU/25g的食品样品,全过程需时约8h。150份实际食品样品中,IMS-real-time PCR方法检出27份阳性样品,免疫磁珠联合XLT4平板培养法检出18份阳性样品,传统国标法检出14份阳性样品。     

肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究

目的:通过参加中国食品药品检定研究院组织的能力验证,比对不同检验方法对巧克力样品中沙门氏菌的检出及鉴定效果,找出不同检验方法对样品中不典型沙门氏菌分离及鉴定的特性,有效提升实验室对不典型沙门氏菌检验能力及质量控制水平。方法:实验中样品前处理按照考核方案作业指导书进行,沙门氏菌的分离按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)要求进行操作,通过BAX~? system Q7快速筛查可疑样品,MALDI-TOF-MS定位可疑菌株,VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统确认阳性菌株,MLST技术对沙门氏菌阳性菌株进行分子生物学分型。结果:3个样品中两个样品检出沙门氏菌,样品CODE-0695检出鼠伤寒沙门氏菌,样品CODE-0050未检出沙门氏菌,样品CODE-0542检出肠道沙门菌双相亚利桑那亚种。结论:实验发现肠道沙门菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上菌落形态及生化表征与常见沙门氏菌不一致,易漏检,实际工作中应加强对不典型沙门氏菌检验能力的建设。     

4种不同方法检测审核样本中沙门氏菌的比较研究

沙门氏菌是引起食物中毒的最常见食源性肠道致病菌之一,严重危害人畜健康。通过传统培养法、检测机器联用法、快速测试纸片系统及PCR共4种方法检测测量审核样本中的沙门氏菌,结果表明,不同方法均能在供试样品中检出沙门氏菌。在日常检验工作中,推荐使用以PCR或全自动荧光酶免疫分析仪mini-VIDAS完成快速初筛,继而以快速测试片或显色培养基分离可疑培养物,最后依托全自动微生物鉴定仪VITEK 2 Compact对特征性单菌落进行鉴定,以快速获得精准检验结果。     

食品检测能力验证中沙门氏菌的分离鉴定

目的 参加编号为CFAPA-375的食品中沙门氏菌能力验证,提高检验技能,验证实验室沙门氏菌的检测能力。方法 采用国标法对沙门氏菌能力验证样品进行检测,同时采用实时荧光PCR法作为辅助方法。对分离出的可疑菌落,采用全自动微生物鉴定系统和实时荧光PCR法进行全面鉴定。结果 样品N1和N3中检出沙门氏菌,样品N2中未检出沙门氏菌,实时荧光PCR法与国标法检测结果一致。结论 本次实验室的能力验证结果为“满意”,验证了实验室沙门氏菌的检测能力。实时荧光PCR法快速、简便、特异性强,可与国标法配合使用,以确保实验结果的准确快速。     

奶粉样品中沙门氏菌能力验证结果与分析

目的验证分析实验室对奶粉样品中沙门氏菌检测能力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、SN/T 1059.7-2010《进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法》进行改进,参照能力验证计划参试指导书来进行测定和结果判断。结果通过荧光定量PCR法进行快速初筛,初步判断样品含有阳性沙门氏菌;传统平板法结合生化鉴定套装和VITEK2进行复筛,将可疑沙门氏菌进行血清分型,检出2种血清型O:4,12 H:i,2和O:9,12 H:m,g:-,分别为鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌;同时采用Ribo Printer全自动微生物基因指纹鉴定系统对可疑单菌落进行确证性鉴定,结果与血清分型一致。结论本次实验室的奶粉样品中沙门氏菌检测能力验证结果合格。     

乳粉能力验证中沙门氏菌的分离鉴定和血清分型

目的参加编号为NIFDC-PT-220的能力验证,考核从乳粉中检出沙门氏菌及血清分型能力。方法参照国标方法对中国食品药品检定研究院提供的随机乳粉样品(CODE140、CODE121)进行沙门氏菌的检验,并将荧光酶联免疫法和荧光定量PCR技术作为辅助方法。对分离出的疑似菌进行生化鉴定,并且采用全自动微生物鉴定系统进行全面鉴定。结果编号CODE140血清分型为O:4,5,12, H:i; 1,2被确定为鼠伤寒沙门氏菌。编号CODE121未检出。结论荧光酶联免疫法和荧光定量PCR技术缩短了检测时间,特异性和敏感性好,与国标方法配合可确保实验结果的准确性。     

食品中沙门氏菌检出能力验证结果与分析

目的为了提升实验室的食品中沙门氏菌检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-010食品中沙门氏菌检出能力验证。方法利用全自动免疫检测系统(VIDAS)对能力验证中的5个样品进行快速筛查,依据GB4789.4-2010沙门氏菌检验进行血清学试验,采用16S r DNA全序列分析、全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对分离出的疑似菌进行鉴定。结果编号为CODE 1的样品检出阿贡纳沙门氏菌和婴儿沙门氏菌,CODE 3检出蒙得维的亚沙门氏菌,CODE 5检出鼠伤寒沙门氏菌,CODE 2和CODE 4未检出。结论 5个样品测试均取得优秀的结果。     

DETECTION OF SALMONELLAE IN CHICKEN AND FISH SAMPLES USING DNA PROBE

The use of DNA probes for rapid identification of foodborne pathogens is an emerging field. We have standardized a method for the detection of Salmonella in food samples by using a specific insertion sequence (IS-200) of Salmonella chromosomal DNA as the probe. The procedure for colony hybridization, and washing conditions for the stringency were established. All the ten Salmonella strains, belonging to various serotypes tested were positive while 18 other bacterial cultures, mainly belonging to the family Enterobacteriaceae such as E. coli Shigella, Proteus etc., were negative in colony hybridization. The sensitivity of the detection was found to be 10⁵ cfu using ³²P-labeled probe. We surveyed 16 chicken and 6 fish samples from local market using IS-200 probe after preenrichment and selective enrichment. All the samples tested were found positive with DNA probe. The major strains of Salmonella isolated from these samples were S. gallinarum, S. typhimurium, S. enteritidis, S. choleraesuis and S. paratyphi A. These results were confirmed by standard Salmonella identification method.     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证

目的通过能力验证提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力和实验室质量管理水平。方法依据GB 4789.30-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检测,利用BAX system Q7全自动病原微生物检测系统对能力验证中的3个样品进行快速筛查,采用VITEK2COMPACT全自动细菌鉴定系统、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和溶血素O基因(hlyA)序列比对分析鉴定可疑菌株。结果编号CODE1和CODE3的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,编号CODE2的样品未检出。结论本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证测试,取得了满意的实验结果。     

一起肠炎沙门菌引起的食物中毒检测及菌株同源性分析

检测食物中毒样品中致病菌,分析其同源性,为追踪污染源、明确病因诊断提供帮助,为控制和减少食物中毒提供依据。方法 荧光定量PCR快速筛检致病菌,参照GB 4789.4—2010《食品安全国家标准 食品卫生微生物检验 沙门氏菌检验》分离致病菌,全自动细菌鉴定仪鉴定致病菌,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性。结果 从21份病人和从业人员粪便样品中检出8株肠炎沙门菌,9份食品样品中检出2份肠炎沙门菌,检出率分别为25.00%和6.25%;食堂用水及井水检测均未检出肠炎沙门菌等致病菌。荧光定量PCR法阳性率结果与GB 4789.4—2010方法一致。PFGE分型显示10株肠炎沙门菌的DNA条带图谱完全一致,相似性100%,聚类分析为同一型,表明菌株来自同一克隆系。结论 采用荧光定量PCR筛检能提示食物中毒样品中病原菌是否存在的信息,通过GB 4789.4—2010方法仔细寻找到目标菌,两法联合使用能快速、准确地检测出引起食物中毒的致病菌。运用PFGE对致病菌进行溯源,分析其亲缘关系,能追踪到菌株来源,有利于防止食物中毒的发生。     

沙门氏菌快速测试片在食品检测中的初步应用研究

目的应用3M沙门氏菌SALX测试片法检测食品中的沙门氏菌。方法对67批自然样品,以及使用3个沙门氏菌标准菌株进行人工污染的20批样品,同时采用3M沙门氏菌SALX测试片法与国家标准方法GB 4789.4-2010进行检测并比较,评价3M SALX沙门氏菌测试片法检测沙门氏菌的检测性能。结果 3M沙门氏菌SALX测试片法与国标法符合率达95.5%,各有1例假阳性和假阴性。结论 3M沙门氏菌SALX测试片法操作相对简便,稳定性好,与国标法有较高的符合率,作为一种新的沙门氏菌检测方法,仍需进一步积累检测数据。