谷氨酸棒杆菌S9114中谷氨酸脱氢酶破碎条件的研究

为了研究谷氨酸棒杆菌S9114中的谷氨酸脱氢酶的特性，对细胞破碎条件对其酶活性的影响进行了研究。结果发现不同破碎条件对谷氨酸生产菌S9114细胞内谷氨酸脱氢酶的释放量不同。利用超声波对S9114细胞进行破碎时，获得GDH较好破碎效果的条件是工作时间与暂停时间比为1：4，破壁工作时同为10min。而利用French pressure cell press进行了细胞破碎时，破碎条件为18，000Pa破碎两次。     

北京棒杆菌AS1．299发酵生产谷氨酸的研究

以淀粉为原料，利用北京棒杆菌AS1．299发酵生产谷氨酸。采用传统的发酵工艺，确定了北京棒杆菌AS1．299发酵工艺条件。     

过表达hom基因对谷氨酸棒杆菌发酵L-异亮氨酸的影响

谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）中hom基因编码的高丝氨酸脱水酶为L-异亮氨酸合成过程的关键酶,本研究通过在L-异亮氨酸生产菌cglutamicum YILW中过表达高丝氨酸脱水酶,考察过表达高丝氨酸脱水酶对发酵卜异亮氨酸产量的影响．以L-异亮氨酸生产菌cglutamicum YILW基因组为模板克隆horn基因,将horn基因与表达载体pXMJ19连接构建出重组质粒pXMJ19-hom,再转入Cglutamicum YILW构建C．glutamicum YILW（pXMJ19．hom）．通过5L罐发酵研究重组质粒对工程菌的生长、耗糖、L-异亮氨酸产量及副产物积累等方面的影响．结果显示,重组酶的表达使菌株对卜苏氨酸的抗反馈抑制作用得到加强．最终L-异亮氨酸和L-蛋氨酸积累量分别为36．5g／L和2．8g／L,分别较出发菌株提高7％和33％,同时L-赖氨酸合成量仅为2．1g／L,较出发菌株降低了63．8％．     

OtsAB途径对谷氨酸棒杆菌ATCC 13032胞内海藻糖含量及细胞耐受性的影响

OtsAB途径是谷氨酸棒杆菌胞内海藻糖3条合成途径中最主要的一条.从野生型谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC 13032出发,通过重叠延伸PCR及同源重组技术构建了OtsAB途径缺陷突变株Corynebacterium glutamicum(△otsAB);利用谷氨酸棒杆菌穿梭表达载体pEC-XK99E构建重组工程菌株Corynebacterium glutamicum(pECotsAB)过量表达同源otsA及otsB基因.考察了野生型、缺陷型及过量表达菌株对于不同渗透压和培养温度的耐受性及该条件下各菌株胞内海藻糖的含量.结果表明:不同培养条件下,Corynebacterium glutamicum(△otsAB)胞内海藻糖含量与同条件野生型相比减少了34.40%～44.96%,对于渗透压和温度的耐受性明显降低;在相同的培养温度(30℃)、不同的渗透压条件下,Corynebacterium glutami-cum(pECotsAB)胞内海藻糖含量与野生型相比增加了14.53%～34.5%;细胞对于温度和渗透压的耐受性随胞内海藻糖含量的增加而提高.     

过量表达苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌合成L–异亮氨酸的影响

考察过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶对谷氨酸棒杆菌发酵生产L-异亮氨酸的影响.将解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶基因ilvA（F383V）连接大肠杆菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pXMJ19,过量表达于L-异亮氨酸生产菌株Corynebacterium glutamicum YILW.经5 L发酵罐分批补料发酵产酸实验,与出发菌株C.glutamicum YILW相比,耗糖高峰期滞后,L-异亮氨酸产量增加了10.3%,副产物L-蛋氨酸、L-赖氨酸含量分别降低了33.3%2、6.5%,发酵液中没有L-苏氨酸的累积,乳酸的累积量增加了41.7%.对发酵稳定期的代谢流分布研究表明,过量表达解除反馈抑制的苏氨酸脱水酶使HMP途径流量增加了31.7%,L-异亮氨酸生物合成途径的代谢流提高了8.5%.     

谷氨酸棒杆菌的氨基酸输送系统的存在、功能及其在氨基酸生产上的重要性

主要介绍了谷氨酸棒杆菌(Coryndbacterium glutamicum)中各种氨基酸输送系统及其基因、底物、特性和在氨基酸生产上的应用．     

钝齿棒杆菌产精氨酸代谢途径中argB基因的扩增及其序列分析

根据GenBank报道的谷氨酸棒杆菌ATCC 13032序列，设计并合成一对引物，获得了全长argB基因片段．将其克隆到pGEM—T—Easy载体中，经测序鉴定后，以其为DIG标记探针，通过Southern Blot分析钝齿棒杆菌A．S1．542与谷氨酸棒杆菌ATCC 13032，argB基因核苷酸同源性高达99％，氨基酸序列95％相同。     

微量稀土元素对工业纯铝电阻率的影响

通过稀土元素的净化作用和金属导电理论,研究了微量稀土元素镧、铈和混合稀土对工业纯铝电阻率的影响.结果表明,微量稀土元素可以改善工业纯铝的导电性能,当加入稀土铈或镧的质量分数为WCe<0.45％或WLa<0.40 ％时,工业纯铝的电阻率降低;加入混合稀土的质量分数为WM-RE<0.30％时,工业纯铝的电阻率稍有降低.     

稀土元素对工业纯铝机械性能的影响

通过稀土元素铈、镧和混合稀土对工业纯铝组织的改善，研究了它们对工业纯铝机械性能的影响，并利用金属学原理和凝固理论对其机理进行了分析．结果表明，加入质量分数为0．2％～0．3％的稀土元素La或0．4％的Ce，可以提高工业纯铝的拉伸性能；加入质量分数为0．2％-0．3％的稀土元素La或0．1％～0．3％的Ce，可以提高工业纯铝的延伸率；而混合稀土对工业纯铝的拉伸性能没有明显的影响．     

不同来源生物素对谷氨酸短杆菌的影响

利用玉米浆、麸皮水解液、甘蔗糖蜜、酵母膏和蛋白胨等原料提供生物素对谷氨酸短杆菌TG866进行培养,结果表明:添加酵母膏或玉米浆培养对菌体生长和发酵较为有利;添加酵母膏发酵,菌体生长量较大,产酸量较高.     

真空冻干过程对谷氨酸短杆菌的影响

为研究真空冷冻干燥过程对谷氨酸短杆菌TG866的影响,通过对冷冻干燥前后的谷氨酸菌种的生理生化特性、发酵能力进行比较研究.实验结果表明:冷冻干燥前后菌种的生理生化特性未发生改变,菌种发酵能力受冻干过程影响不大.     

植物乳杆菌乳酸脱氢酶的抽提与初步纯化

研究了从植物乳杆菌RS2—2中提取胞内乳酸脱氢酶的工艺过程，探讨了超声破碎时茵体质量浓度、处理量及处理时间对破碎效果的影响；对酶的提取工艺研究表明，0．05mol／L磷酸缓冲液(pH7．0)添加0．10～0．30mol／L NaCl可达到较好的抽提效果；对硫酸铵盐析去杂蛋白质及DEAE离子交换层析工艺进行了初步优化．在优化的工艺条件下，酶的总回收率为40．2％，比酶活提高到原来的18．9倍。     

营养条件对氧化亚铁硫杆菌生长和脱硫的影响

考察了氧化亚铁硫杆菌（T.f.）对不同氮源、能源的利用,研究了空气中氧化不同时间的煤系黄铁矿的脱硫情况.结果表明：在选择的3种氮源中,尿素经过诱导可被T.f.菌较好地利用,提示该菌可产生诱导性脲酶.在利用尿素初期由于尿素的水解,提高了溶液中的pH值.在选择的能源中,Fe^2＋是T.f.菌容易利用的能源基质.添加培养过的回收单质硫粉可提高菌体生物氧化速率.空气中氧化20 d的煤系黄铁矿有助于菌体的吸附,但吸附菌体的生物氧化速率较低.脱硫过程中30 d后对于空气中氧化4 d的煤系黄铁矿,同时接种亚铁与单质硫培养的菌种其黄铁矿硫脱除率达52.2%,接种亚铁培养的菌种其黄铁矿硫脱除率为43.2%,接种单质硫培养的菌种其黄铁矿硫脱除率为33.9%.     

柠檬酸钠对L-谷氨酸发酵代谢流迁移的影响

为更全面深入地理解细胞内谷氨酸代谢的调控机制,以黄色短杆菌GDK-9为供试菌株,应用MATLAB软件和代谢流分析方法,定量研究了添加柠檬酸钠后L-谷氨酸发酵中后期胞内的代谢流迁移．在L-谷氨酸发酵中后期添加3．0g／L柠檬酸钠后,合成副产物L-丙氨酸和乳酸的代谢流量明显减少,分别降低了18．7％和27．4％,EMP途径和乙醛酸循环的代谢流分别减少了0．88和2．12,HMP途径的代谢流增加了0．88,而L-谷氨酸生物合成的代谢流从73．59增长至76．47,较未添加前提高了3．9％．添加柠檬酸钠能使关键节点发生代谢流迁移,提高L-谷氨酸合成中心代谢途径的代谢流量．     

前体物质和碳氮源补加策略对钝齿棒杆菌发酵生产L-精氨酸的影响

研究了前体物质和碳氮源补加策略对钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatumSYAN7发酵生产L-精氨酸的影响。结果表明，发酵24h后添加前体物质谷氨酸，以初始硫酸铵质量浓度20g／L，分别于24、48h补加20g／L硫酸铵的补氮方式，和以初始葡萄糖质量浓度100g／L，分别于24、48、72h均匀添加葡萄糖，使总糖质量浓度达175g／L的补碳方式，摇瓶发酵96h后，L-精氨酸产量最高达37．8g／L。     

克雷伯杆菌甘油脱氢酶的分离纯化及性质

在有氧条件下，利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和B1ue Sepharose CL-6B亲和层析提纯克雷伯杆菌胞内甘油脱氢酶．酶的纯化倍数和回收率分别为32．61倍和5．83％．通过SDS-PAGE电泳测得该酶亚基的相对分子质量约为34000．该酶最适表观反应温度和最适反应pH值分别为60℃和11．在30℃以下及pH值10～12时，该酶具有良好的稳定性．在45℃和pH值11条件下，该酶以甘油和NAD^ 为底物的米氏常数Km分别为0．75mmol／L和0．12mm01／L．甘油脱氢酶对甘油的生理反应活性最大，对其它醇类如1，2-丙二醇、乙二醇也有氧化能力．NH4^ 和Na^ 对酶有显著激活作用．巯基保护剂可明显地提高酶的活力．     

营养因子对乳酸发酵短杆菌合成赖氨酸的影响

通过正交试验探讨了碳源、氮源及豆饼水解液对赖氨酸产量的影响，确定了最佳工艺条件。添加醛酸盐、生物素、泛酸盐等对FP094菌株中由磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸和草酰乙酸构成的“三角区”进行扰动，定性分析了此扰动对赖氨酸合成所需前体物代谢流量的调节机制。添加2.0%的醋酸钙可使赖氨酸的产量及葡萄糖的转化率均得到显著提高，生物素的添加量在200～500ug/L时可明显提高赖氨酸的产量和转化率。泛酸钙的限量添加可弱化泛酸缺陷突变株中丙酮酸向乙酰辅酶A的转化，并提高天冬氨酸-β半醛流量向赖氨酸合成分支的分配。     

稀土元素对红豆杉细胞膜损伤的影响

研究在 Ca^2 及-Ca^2 条件下,稀土元素对红豆衫细胞质膜的影响．结果表明,在缺乏Ca^2 条件下,0．1μg／L的稀土元素处理的红豆衫细胞中细胞质膜电解质泄漏率和丙二醛(MDA)含量下降,过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性增加,1μg／L的稀土元素处理效果则相反．在加钙条件下,稀土元素处理组未呈现显著性差异.     

γ-聚谷氨酸的发酵优化及其对辣椒生长的影响

采用实验室分离的一株高产 γ-聚谷氨酸（γ-PGA）枯草芽孢杆菌发酵生产 γ-聚谷氨酸。利用单因素优化实验选择最佳碳源、氮源及发酵前体，响应面分析法Box-Behnken。实验结果表明最佳发酵培养基配方为蔗糖60.39 g /L、硫酸铵6.00 g /L、谷氨酸钠93.27 g /L，γ-PGA产量达到70.285 g/L。将发酵提纯后获得的产品与尿素混合制备成叶面肥对辣椒进行喷施，辣椒的株高、茎粗、挂果数、果重以及叶绿素含量等显著增加，喷施10 g/L 尿素 + 0.6 g/L γ-PGA增产效果最佳，γ-PGA复合肥料的生物可降解性、环境友好性和保肥增效特性有利于农业的可持续发展。