韭菜过氧化物酶的分离纯化及性质

经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的韭菜过氧化物酶(POD)。该酶比活力达到14031.41U/mg,纯化倍数为102.96,回收率为10.85%。该酶分子质量约为28.4kD,最适温度40℃、最适pH值为4.6。该酶在20～40℃以及pH 4.0～8.0有较好的稳定性,在最适条件下测得其Km值为18.15mmol/L。低浓度草酸、Zn2+、Mg2+等对该酶有较强激活作用;甲醇、乙醇、异丙醇、SDS、抗坏血酸(AsA)以及Mn2+、Fe3+等对该酶有较强的抑制作用。     

蕹菜过氧化物酶的分离纯化及理化性质

新鲜蕹菜经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶（peroxidase,POD）,该酶的比活力、回收率、纯化倍数和产率分别为35 972.96 U/mg、12.21%、168.48和211.07 U/g。该酶的亚基分子质量为42.7 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6,并且在20～50 ℃及pH 5～8的范围内具有良好的稳定性。以不同浓度的H2O2为底物,测得该酶的Km值为18.32 mmol/L。NaCl、尿素（Urea）、Zn2+、Mg2+对该酶都具有较强的激活作用,十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）、硫氰化钾（potassium thiocyanate,KSCN）、抗坏血酸（ascorbic acid,AsA）、Ba2+、Mn2+ 、Fe2+、甲醇、乙醇、正丁醇和异丙醇对蕹菜POD活力均有抑制作用,其中抗坏血酸对POD有极强的抑制作用,当浓度为0.01 mol/L时,酶活力接近于0。     

韭菜过氧化氢酶的分离纯化及其部分酶学特性

为获得韭菜过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究,将新鲜韭菜通过匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,获得了电泳纯的韭菜过氧化氢酶(CAT),纯化倍数为70.36,回收率为18.33%,酶比活力达到22064.57U/mg。其全酶分子质量和亚基分子质量分别为241.76、62.43kD。该酶反应的最适温度为37℃,最适pH值为7.2。该酶在25～40℃以及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为46.93mmol/L。甲醇、乙醇、异丙醇、SDS以及Cu2+、Ag+、Fe2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用。     

蕹菜叶酪氨酸酶的分离纯化与部分性质

蕹菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的酪氨酸酶。该酶活力达到114.53 U/mg,酶活力回收率为11.33%,纯化倍数为99.59。全酶分子质量为77.60 kD,亚基分子质量为38.70 kD;最适温度为45 ℃,最适pH值为7.5,该酶在25～55 ℃及pH 6.0～8.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为10.05 mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2+和Pb2+对该酶有抑制作用,Mn2+、Zn2+和Co2+对该酶具有一定的激活作用,尿素和十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfonate,SDS）对该酶活性影响不大,Li+、K+对该酶活性基本没有影响。     

蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus SWWL6产耐有机溶剂脂肪酶发酵条件优化及酶学性质

以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus SWWL6为产耐有机溶剂脂肪酶的出发菌株,对发酵产酶条件进行优化并研究其酶学性质。通过四因素三水平L9(34)正交试验,确定产酶的最优发酵条件为：pH6.5、温度35℃、每250mL容量瓶中装液量55mL、接种量4%,此条件下酶活力达45.62U/mL。该酶最适pH值范围为7.0～8.0,碱性条件下稳定。最适温度为40℃,超过40℃,酶活力急剧下降。K+、Na+、Mg2+、Ba2+对该酶活性有激活作用,Al3+、Cu2+、Zn2+、Ca2+对该酶活性有一定的抑制作用,Fe2+对该酶活性的作用效果不明显。SDS、EDTA均对该酶活性有抑制作用,其中尤以SDS的抑制作用最强。该酶对所试有机溶剂甲醇、环乙烷、异丙醇、乙醇、甲苯、丙酮、异戊醇均有一定的耐受性。     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

尼罗罗非鱼肠道碱性蛋白酶性质的研究

系统研究了尼罗罗非鱼肠道中碱性蛋白酶的特性,发现其最适pH为9·0,最适温度为60℃;此蛋白酶在pH6·0～10·0及60℃以下具有较好的稳定性,Ca2+及低浓度的Na+对碱性蛋白酶有一定的激活作用,而Mg2+、Ba2+、Al3+、Zn2+、Pb2+、Cu2+、Fe2+等金属离子对该碱性蛋白酶有不同程度的抑制作用;甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛、丙酮等有机溶剂对碱性蛋白酶有不同程度的抑制作用,抑制作用大小依次为甲醛丙酮乙醇甲醇异丙醇;20mmol/L丝氨酸蛋白酶抑制剂甲苯磺酰氟(PMSF)、10mmo/L金属蛋白酶抑制剂EDTA、5mmol/L巯基还原剂DTT分别抑制了89·9%、88·8%、70·6%的酶活力;通过抑制剂对酶活性的影响初步判断出罗非鱼肠道中碱性蛋白酶主要为一类丝氨酸类蛋白酶、金属蛋白酶以及以二硫键为活性中心的蛋白酶混合物。     

香菜叶多酚氧化酶的分离纯化与部分酶学性质研究

新鲜香菜叶经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的多酚氧化酶。该酶比活力达到5 622.95 U/mg,酶活回收率为3.90%,纯化倍数为126.08;全酶分子质量为111.10 kD,亚基分子质量为55.60 kD;最适温度为37 ℃,最适pH值为6.5;在25～45 ℃及pH 6.0～7.0范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其Km值为4.04×10－2 mol/L;甲醇、乙醇、异丙醇、氯仿及柠檬酸、抗坏血酸、Ca2＋、Hg2＋、Ba2＋对其有抑制作用,Co2＋、Pb2＋对其具有一定的激活作用。     

牛肾溶菌酶的分离纯化及部分酶学性质

将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明：该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.66 kD,为单亚基酶。最适反应温度为65 ℃,在65 ℃以下较稳定;最适pH 9.0,pH值在3.0～9.0范围内稳定性较好;测得最适条件下牛肾溶菌酶对溶壁微球菌的Km值为0.399 μg/mL;甲醇、乙醇、异丙醇和硫氰化钾（KSCN）对该酶有激活作用;十二烷基硫酸钠、Pb2＋、Ag＋对该酶有明显抑制作用。     

韭菜β-木糖苷酶的分离纯化与部分性质研究

新鲜韭菜经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、羧甲基离子交换层析(carboxymethyl-sephar ose,CMSepharose)再通过Su perdex-200凝胶过滤层析,从而获得电泳纯的β-木糖苷酶。该酶的比活力达到18.25 U/mg,纯化倍数为12.59,回收率为1.83%,分子质量为123.02 k D,亚基分子质量为61.51 k D。通过对β-木糖苷酶的酶学性质研究得到最适温度为65℃,最适p H值为4。该酶在25~55℃及p H 3.0~5.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其米氏常数(K_m)值为0.28 mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和Ag+对该酶具有抑制作用,Mn~(2+)和Co~(2+)对该酶具有一定的激活作用。     

不同贮藏温度下鲜切紫甘薯褐变相关因素研究

为研究鲜切紫甘薯的褐变条件与机理,本文对不同贮藏温度下(4和12℃)的鲜切紫甘薯的褐变程度、褐变相关酶活力以及褐变底物酚类物质进行分析。结果表明,12℃贮藏组的鲜切紫甘薯褐变度始终显著高于4℃贮藏组(P<0.05)。贮藏期间,褐变重的鲜切紫甘薯多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)和过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性更高,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量更多。2~8 d,不同贮藏温度下鲜切紫甘薯绿原酸和阿魏酸含量显著不同(P<0.05),因此推断褐变相关酶活性、膜脂过氧化程度以及酚类物质含量可能是引起鲜切紫甘薯褐变的关键因素。通过相关性分析,多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)是引起鲜切紫甘薯褐变的关键酶。绿原酸和阿魏酸是鲜切紫甘薯褐变的主要底物。     

鲜切果蔬酶促褐变发生机理的研究

为了进一步揭示鲜切果蔬酶促褐变发生过程及其机理,采用鲜切茄子和鲜切甘薯为实验材料,研究了与酶促褐变发生密切相关的酶活性变化及伤害胁迫生理。结果表明:两种果蔬经鲜切处理后诱发了酶促褐变的快速发生,鲜切甘薯的酶促褐变反应滞后于鲜切茄子。在贮藏期间两种果蔬的过氧化物酶(POD)活性和丙二醛(MDA)含量逐渐上升,总酚含量与苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化一致,均先升后降。鲜切甘薯多酚氧化酶(PPO)活性逐渐上升,但鲜切茄子的PPO却呈下降趋势。结果还表明:鲜切果蔬不仅在切割表面发生酶促褐变反应,在远离切割部位也诱发了生理生化反应,这可能是由于切割伤害胁迫产生的刺激信号转导而引致组织的整体协同伤害防御反应的结果。     

鲜切甘薯不同部位褐变机理差异

以‘渝薯17’甘薯为实验材料,将鲜切甘薯分为皮部、周边以及中心3 个部位。通过对冷藏过程中鲜切甘 薯不同部位褐变情况、褐变底物酚类物质含量、褐变相关酶活力的比较研究,探讨鲜切‘渝薯17’不同部位的褐变 机理及差异。结果表明,绿原酸是甘薯褐变的主要底物,鲜切甘薯不同部位褐变存在差异,皮部褐变最严重,周边 次之,中心最弱。皮部总酚和游离酚含量均显著高于周边和中心组织（P＜0.05）,其中主要底物绿原酸含量为周 边和中心组织的3～4 倍。多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）是引起皮部组织褐变的主要酶,苯丙氨酸解氨酶 对酚类物质的积累起促进作用;周边组织褐变由PPO和过氧化物酶（peroxidase,POD）协同作用催化;中心组织 褐变则主要由POD引起。     

预处理对红薯叶热泵干燥品质的影响

以红薯叶为原料,研究不同预处理(盐渍、超声以及二者联合)条件下红薯叶热泵干燥过程中理化性质的变化。结果表明:当盐浓度为4%时,干燥后的POD酶活性较低,抗氧化能力较强,该条件下获得的红薯叶复水比普遍较高,且干燥时间最短,综合评分最高。     

Effects of combined radio frequency with hot water blanching on enzyme inactivation,color and texture of sweet potato

Sweet potato is an important food crop with rich nutritional value, and also a commonly used feed and industrial raw material. However, the quality of sweet potatoes may decline during storage and thermal processes because of enzymatic reaction induced by peroxidase (POD). Radio frequency (RF) blanching was thus proposed to reduce POD activities. Effects of electrode gaps and sample thicknesses on the RF heating rate and uniformity in sweet potato were studied. Influences of hot water blanching and combination of RF heating with hot water blanching on enzyme inactivation and physiochemical properties of sweet potatoes were also analyzed. Results showed that the optimum RF heating uniformity was obtained at an electrode gap of 90 mm and a sample thickness of 60 mm. Combined RF with hot water blanching effectively inactivated POD in sweet potatoes. Compared to hot water blanching, combined RF with hot water blanching gave better sample color, texture values, and lower weight loss when achieving the same level of enzyme inactivation (< 10%). Therefore, combined RF with hot water blanching is recommended as an effective, uniform and high-quality blanching technology for sweet potatoes.     

不同品种甘薯叶提取物抗氧化及对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

本研究旨在通过比较7个品种甘薯叶提取物的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性,探讨甘薯叶抗氧化和降血糖的潜力。以甘薯叶为研究对象,测定其总多酚和总黄酮含量,体外实验评价其抗氧化活性(DPPH·清除能力、ABTS+·清除能力、·OH清除能力和还原能力)及对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明7个品种甘薯叶提取物总多酚和总黄酮含量、抗氧化活性以及α-葡萄糖苷酶抑制活性具有明显差异。甘薯叶总多酚含量介于15.02~33.33 mg GAE/g DW,总黄酮含量介于1.06~3.11 mg RE/g DW。徐薯18、济薯18和龙薯9甘薯叶总多酚和总黄酮含量最高,品种间无统计学差异(P>0.05)。龙薯9自由基(DPPH·、ABTS+·、·OH)清除能力最强;济薯18还原能力最强;商薯19抑制α-葡萄糖苷酶活性最强。总多酚和总黄酮含量与抗氧化活性之间具有极显著的正相关性(P<0.01),而与α-葡萄糖苷酶抑制活性之间没有显著的相关性(P>0.05)。本研究表明甘薯叶是潜在抗氧化剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂的优质来源,为甘薯种植和生产品种的选择提供理论依据。     

红薯叶黄酮类化合物提取及其抗氧化作用研究

采用不同方法提取红薯叶中黄酮类化合物,比较不同提取方法提取率及提取物中黄酮类化合物含量,从而确定最佳提取方法;结果表明,用体积分数为60%乙醇提取法是较为理想方法。同时采用烘箱贮存法测定红薯叶黄酮类化合物在猪油中抗氧化活性,实验结果表明,红薯叶黄酮类化合物具有明显抗氧化效果,且抗氧化活性随加入量增加而增强,其抗氧化效果强于抗坏血酸和柠檬酸。     

表面活性剂十二烷基硫酸钠协助超声波提取甘薯叶总黄酮

目的 探究表面活性剂十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)协助超声波提取甘薯叶总黄酮的最佳工艺条件。方法 以甘薯叶总黄酮提取量为考察指标, 采用Box-Behnken法进行试验设计, 对SDS质量浓度、乙醇体积分数、料液比、超声时间进行响应面优化。结果 各因素对甘薯叶总黄酮提取量的影响程度为C(料液比)>A (SDS质量浓度)>B(乙醇体积分数)>D(超声时间), 甘薯叶总黄酮最佳提取工艺参数为SDS质量浓度1.0%、乙醇体积分数81%、料液比1:50 (g:mL)、超声时间49 min, 在此条件下, 总黄酮提取量为 132.08 mg/g, 与回归模型预测值134.63 mg/g相差1.89%, 表明该模型与实际情况拟合良好。结论 利用表面活性剂十二烷基硫酸钠协同超声提取甘薯叶总黄酮的工艺方法稳定可行, 可为甘薯叶总黄酮的进一步开发利用提供参考依据。     

红薯叶、紫薯块根及不同时期紫薯叶中主要活性成分含量比较

研究紫薯叶中主要活性成分含量的动态变化规律,确定紫薯叶的最佳采样时期;比较紫薯叶、红薯叶、紫薯块根中主要活性成分的含量。总多酚、总黄酮、花色苷的含量采用紫外分光光度计测定,绿原酸、芦丁含量采用高效液相色谱测定。结果表明:不同品种紫薯叶中活性成分含量的动态变化特征大体一致,但不同采收期的含量变化并不完全一致,且不同品种间活性成分含量差异显著。紫薯叶中活性成分的含量较红薯叶、紫薯块根更高,因此更具营养价值。紫薯叶中几种活性成分的累积含量均在采收期150d时达到最大,此时薯叶资源丰富,采收紫薯块根的同时采收紫薯叶进行开发和研究,有利于紫薯资源的综合利用。