菲律宾蛤仔过敏原的性质研究

文章以菲律宾蛤仔为对象,对其过敏原进行性质研究。采用丙酮沉淀、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热处理等方法纯化过敏原;采用SDS-PAGE和Western-blot鉴定该过敏原;通过p H稳定性试验、消化稳定性试验进一步分析其性质。结果显示菲律宾蛤仔中主要过敏原的分子量为35k Da,耐酸碱性良好,且具有较高的消化稳定性,其降解产物仍具有抗原性。研究验证了菲律宾蛤仔中的主要过敏原是原肌球蛋白(tropomyosin,TM),并对其性质进行了分析,为过敏原的安全控制提供了基础数据。     

菲律宾蛤仔不同组分中重金属存在形态研究

为研究菲律宾蛤仔不同组分中重金属存在形态,将菲律宾蛤仔通过差速离心制备成细胞质、细胞核、线粒体三种组分,用逐级化学提取技术将不同存在形态的金属提取出来,采用原子发射光谱法测定了三种组分中铅、锌、镉三种重金属总含量以及不同存在形态的含量,并计算逐级化学提取技术对重金属的回收率。结果表明:铅和镉元素在细胞质中含量最高,锌元素主要存在于细胞核和线粒体中。铅元素主要以硫化物结合态存在于细胞核、细胞质、线粒体中,硫化合物结合态含量分别占各组分铅元素总含量的75.24%、71.29%和50.71%;锌以残渣态在细胞核中的含量最高,残渣态含量占细胞核中锌总量的34.51%,细胞质中锌主要以可交换态存在,可交换态含量占细胞质中锌总量的35.21%;镉在各组分中主要以有机物结合态、硫化物结合态、可交换态三种状态存在。采用逐级化学提取技术测定菲律宾蛤仔不同组分中重金属铅、锌、镉存在形态的回收率为50.71%~99.08%,其中镉元素回收率最高,在三种组分中均达到93%以上。综上,菲律宾蛤仔细胞质中铅、锌、镉三种金属多以硫化物结合态和可交换态存在,这两种形态的金属易于释放到环境中;细胞核、线粒体中锌、镉两种元素主要以残渣态和有机物结合态存在,这两种形态的金属相对稳定。     

菲律宾蛤仔原肌球蛋白线性表位初步预测

目的通过生物信息学,预测菲律宾蛤仔原肌球蛋白的线性表位。方法对菲律宾蛤仔原肌球蛋白同源性、抗原性指数进行分析,利用在线工具预测及综合分析预测表位,进一步与人和猪原肌球蛋白序列对比初步筛选过敏原线性表位。结果 4种软体类的原肌球蛋白同源性较高,且原肌球蛋白的整体性抗原指数较高。菲律宾蛤仔原肌球蛋白中抗原表位区域较多,在与人、猪的序列比较后,最终预测出4个抗原表位。结论预测出了4个线性表位分别为Peptide 2 TLLQKKYTNLENEFDQVNEK,Peptide 6 EKQVKDAKYVAEEADRKYDE,Peptide 9 KDAENRAAEAERVVNKLQ和Peptide 10 ELLAEKEK YKAISDELDQ。     

菲律宾蛤仔糖蛋白的分离纯化与理化性质的研究

对菲律宾蛤仔全脏器中的糖蛋白进行分离纯化,并分析其理化性质.菲律宾蛤仔全脏器经热水煮提、DEAE-52 纤维素柱层析及Sephadex G-100柱层析分离纯化,所得纯化组分用SDS-PAGE鉴定纯度并测定其相对分子质量;用HPLC检测糖链的单糖组成,再用IR分析其基团结构.结果表明:菲律宾蛤仔经柱层析纯化得到1种中性糖蛋白(NGP)和3种酸性糖蛋白(AGP,主要组分为AGP-Ⅲ).NGP的相对分子质量为35000, 总糖及总蛋白质量分数分别为60.5%和18.2%,糖链部分主要是由木糖、葡萄糖、半乳糖组成.AGP-Ⅲ的相对分子质量为43 000,总糖与蛋白的质量分数分别为57.4%和22.0%,糖链部分主要含有木糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等.IR分析表明,NGP和AGP-Ⅲ均含有多糖的-OH、-COO-、-NH、-C-O-C等特征基团.     

菲律宾蛤仔多糖提取物抑制蚕豆根尖细胞微核形成的研究

以菲律宾蛤仔全脏器为原料,经酶解、离心去蛋白、乙醇沉淀、分离、洗涤、干燥得多糖粗制品.通过添加不同浓度的菲律宾蛤仔多糖提取物,研究其对丝裂霉素诱发的蚕豆根尖细胞微核形成的抑制作用.结果表明,浓度为50、100、150μg/ml的多糖对丝裂霉素诱发的微核均有显著抑制作用,并且随多糖浓度的升高,微核率降低,即抑制效果增强.     

菲律宾蛤仔对扑草净的生物富集与消除规律

采用半静态水质接触染毒法,研究菲律宾蛤仔对养殖海水中扑草净的生物富集和消除规律。生物富集实验结果表明：在水温（20±1） ℃条件下,在扑草净质量浓度分别为1.0、10.0、200.0 μg/L的养殖海水中,菲律宾蛤仔中扑草净残留量随所暴露海水中扑草净质量浓度的升高而逐渐增加,二者之间呈正相关。3 个实验组分别在第24、24、6小时达到最大富集值,最大富集系数分别为40.3、9.54、5.35。随着时间的延长,菲律宾蛤仔的扑草净残留量均表现为先迅速上升,升至最高值后迅速降低,低至一定质量浓度后再次上升至一个高点然后下降,之后维持在某一质量浓度水平呈小幅波动的变化趋势。消除实验结果表明：在消除实验初期,3 个实验组菲律宾蛤仔中扑草净的残留量均迅速下降,24 h时降至原质量浓度的10%左右,此后下降缓慢,1.0、10.0、200.0 μg/L暴露实验组菲律宾蛤仔的扑草净残留量降至10.0 μg/kg以下的时间分别为2、24、768 h,其中1.0 μg/L组在消除实验持续96 h时检测结果低于检出限,其余2 组在为期45 d的消除实验结束时仍可检出扑草净残留量。研究表明,菲律宾蛤仔对扑草净具有快速富集能力,但完全消除需要较长时间。     

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离纯化及化学性质

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料，经酶解，脱色，离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG)，再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、分级分离(乙醇分级、CTAB分级)等方法进行化学纯化，得到菲律宾蛤仔纯化产物(GAG—2—3—2)。GAG—2—3—2主要有氨基己糖与己糖醛酸组成，两者分子比例接近1：2，硫酸基含量达到13.3％；琼脂糖凝胶电泳显示单一区带，Rf为0．89，介于肝素与硫酸软骨素之间。     

菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆

目的了解菲律宾蛤仔中过敏原的情况,对其主要过敏原进行鉴定和分子克隆。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹验证原肌球蛋白,双向电泳对蛋白等电点进一步确定。利用差示扫描量热法对蛋白的热性能测定以及蛋白克隆和测序来分析原肌球蛋白。结果菲律宾蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 k Da左右,等电点为5.1,热稳定性较强。原肌球蛋白的基因序列全长为855 bp,编码284个氨基酸,对序列进行同源对比,相似性较高。结论本实验证实了原肌球蛋白为菲律宾蛤仔的过敏原,为认识菲律宾蛤仔过敏原提供基础数据。     

菲律宾蛤仔及其制品的Taqman荧光PCR鉴定方法

目的建立菲律宾蛤仔成分Taqman荧光PCR定性检测方法。方法根据菲律宾蛤仔线粒体细胞色素氧化酶CoxⅠ基因中的保守基因序列设计一对菲律宾蛤仔特异性引物,通过Taqman荧光PCR法进行PCR扩增反应,对菲律宾蛤仔成分进行特异性检测。结果该方法的引物对于菲律宾蛤仔成分的特异性良好;菲律宾蛤仔DNA检出限为0.04 ng/μL,可达菲律宾蛤仔肉粉质量分数的0.001%。通过对市售菲律宾蛤仔制品的检测,该方法可检测出制品中的菲律宾蛤仔成分。结论该检测方法特异性强,灵敏度高,能够用于食品中菲律宾蛤仔成分的真实性鉴别。     

菲律宾蛤仔糖胺聚糖RG-1的结构特征及免疫活性研究

目的:对菲律宾蛤仔糖胺聚糖RG-1的一级结构特征及细胞免疫调节活性进行研究。方法:采用高效液相色谱法测定相对分子质量和单糖组成,通过红外光谱、高碘酸氧化和Smith降解等研究其糖链主要结构特征;用MTT法分析对小鼠脾淋巴细胞的影响。结果:RG-1主要由葡萄糖、氨基半乳糖和半乳糖通过1→6、1→4或1→4,6键连接构成主链,在主链中还含有大量的半乳糖醛酸,重均相对分子质量为9.94×105。RG-1具有显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用和脾淋巴细胞的增殖作用(p<0.01)。结论:菲律宾蛤仔糖胺聚糖可通过增强细胞免疫活性而起到抗肿瘤作用。     

菲律宾蛤仔糖胺聚糖的免疫活性研究

目的:研究菲律宾蛤仔糖胺聚糖CRG对小鼠免疫功能的调节作用.方法:采用正常小鼠与免疫抑制小鼠检测CRG对小鼠非特异免疫、细胞免疫及体液免疫的影响.结果:CRG可显著提高小鼠碳粒廓清指数、小鼠血清溶血素含量及抗全生成细胞数,增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力、脾淋巴细胞增殖作用及迟发型变态反应能力(p<0.05),对免疫抑制小鼠免疫功能有一定恢复作用.结论:菲律宾蛤仔糖胺聚糖CRG可增强正常小鼠的免疫功能.     

Isolation and characterization of antitumor polysaccharides from the marine mollusk Ruditapes philippinarum

Aqueous purified extract (PE) was isolated from the crude extract (CE) of the marine mollusk, Ruditapes philippinarum. Two water-soluble polysaccharides, PEF1 and PEF2, were purified from PE. The chemical structures were determined using FTIR, GC, HPLC and ¹³C NMR. The results indicated that PEF1 and PEF2 were homoglucan–protein complexes with a protein content of 26.0 and 8.2%, and their average molecular weights were about 2.0 × 10⁶ and 5.0 × 10³, respectively. The glucan moiety of PEF1 was mainly a (1 → 6)-branched (1 → 4)-α-d-glucan, while that of PEF2 contained (1 → 4)-α-d-glucan and (1 → 6)-β-d-glucan. PE fractions contained large quantities of glutamic acid and aspartic acid, but no cysteine. The antitumor activities were tested both in vitro and in vivo. PE showed significantly the highest tumoricidal activity against human hepatoma SMMC-7721 cells, and PEF1 had better cytotoxicity than PEF2. There was no observed cytotoxicity in human hepatocyte HL-7702 cells within the experimental concentration range for all PE fractions. PE showed antitumor activity against solid tumor Sarcoma 180 in a dose-dependent manner. It also demonstrated stimulating effect on murine lymphocyte proliferation induced by concanavalin A. The results demonstrated that the presence of bound protein, compositional glucan and moderate molecular mass would be helpful to the enhancement of antitumor activities. This study suggested that the polysaccharides isolated from the marine mollusk had a potential application as natural antitumor and immunomodulator agents.     

鲐鲅鱼水解产物抗疲劳作用效果研究

目的:观察鲐鲅鱼水解产物(HETF)对小鼠的抗疲劳作用。方法:将80只ICR小鼠分成8组,设置对照组。每天给小鼠饲喂低、中、高剂量的鲐鲅鱼水解液6周,观察鲐鲅鱼水解粗产物对小鼠负重游泳时间、血乳酸、血清尿素、肝糖原的影响。结果:摄入鲐鲅鱼酶解液能明显延长受试小鼠的负重游泳时间,明显降低受试小鼠的血乳酸含量,显著降低受试小鼠运动后的血清尿素含量,提高小鼠体内肝糖原含量。结论:鲐鲅鱼水解粗产物具有显著的抗疲劳效果。     

Purification and characterization of lysozyme from filipino venus, Ruditapes philippinarum

Lysozyme from Filipino venus (Ruditapes philippinarum) was purified by ion-exchange and gel filtration chromatography. The purification fold and yield were 3,402 and 32.4%, respectively. The molecular weight was determined to be 13.4 kDa by SDS-PAGE. The specific activity of lysozyme was 3.76×10⁵ units/mg protein with Micrococcus lysodeikticus as a substrate. The optimum temperature and pH of lysozyme were 75°C and 5.5, respectively. Lysozyme activity was decreased with about 45% after heat treatment for 30 min at 80°C, and completely inactivated at 100°C. It was activated by NaCl (10–70 mM), MgCl₂, and CaCl₂ (2–5 mM) whereas it was inhibited by ZnCl₂ (2–30 mM).     

菲律宾蛤仔净化技术初步研宄

采用紫外线制备无菌海水对菲律宾蛤仔进行净化处理,以细菌总数和大肠菌群为指标,探讨影响菲律宾蛤仔净化效果的几个关键因素.结果表明,在20℃条件下,菲律宾蛤仔净化的最佳工艺条件为:贝水比1:15、海水流量1.5 X10-5m3/s、净化处理时间为16h,细菌总数和大肠菌群指标符合海水贝类卫生标准(GB2744-1996).     

菲律宾蛤仔蒸煮液多糖回收工艺及微胶囊化

目的 回收菲律宾蛤仔蒸煮液中的多糖并采用微胶囊包埋技术对多糖进行脱腥和保护。方法 采用超滤醇沉工艺回收菲律宾蛤仔蒸煮液多糖, 以该多糖为芯材, 大豆蛋白和麦芽糊精为壁材, 采用喷雾干燥法制备微胶囊, 通过单因素和正交试验优化制备工艺。结果 菲律宾蛤仔蒸煮液多糖回收工艺为: 蒸煮液固形物含量调整为10%, 3万分子量超滤膜除杂, 透过液加入3倍体积乙醇, 室温醇沉24 h, 沉淀冻干得菲律宾蛤仔蒸煮液多糖粗品, 总糖含量大于80%, 回收率高于70%; 喷雾干燥法制备菲律宾蛤仔蒸煮液多糖微胶囊工艺参数为: 乳化剂用量0.1%、多糖浓度10 mg/mL、壁材比例3:1、均质时间3 min, 得到的微胶囊的包埋率达到68.63%。结论 超滤醇沉工艺适用于菲律宾蛤仔蒸煮液中多糖的回收, 该多糖采用喷雾干燥法微胶囊化包埋处理, 能够很好地掩盖其腥味, 并起到保护作用。该研究为菲律宾蛤仔蒸煮液的综合开发利用提供思路。     

菲律宾蛤仔调味软罐头的工艺研究

目的以菲律宾蛤仔为原料,开发制备调味软罐头。方法以风味、质地和色泽感官评分项目为评价指标,通过预实验确定最佳熟制方式和熟制时间,在盐用量、糖用量、味精用量和酱油用量4个单因素实验的基础上采用响应面法优化菲律宾蛤仔软罐头的调味配方。结果在盐用量为2.5%、糖用量为2.7%、味精用量为1.2%和酱油用量为0.3%条件时,其余以五香料液补至100%,感官评分预测值高达8.28,通过实验验证的感官评分结果为8.68,与预测值接近。结论菲律宾蛤仔调味软罐头制备工艺可行,可为后期其他贝类的生产加工研究提供借鉴。