酸马奶中乳杆菌Lb.casei.Zhang和ZL12-1的16S rDNA基因序列及聚类分析

利用遗传学方法对分离自内蒙古锡林郭勒盟牧区采集的酸马奶样品中的乳杆菌Lb．casei．Zhang和ZL12-1的16S rDNA扩增与测序．并将结果与同属的乳杆菌作同源性分析，建立系统发育树，以求更准确地确定其归属，为益生菌的筛选奠定基础。结果表明，菌株Lb.casei.Zhang标准菌株Lb．casei ATCC334^T同源性为100％，菌株zLl2—1与标准Lb.gallinanum ATCC 33199^T的同源性为98％。结合系统发育树及16S rDNA的部分序列分析结果，将Lb.casei.Zhang判定为Lb．caseissubsp.casei.ZL12-1鉴定为Lb.gallinanum，这与传统分类方法所得鉴定结果一致。     

利用16S rDNA部分序列聚类分析鉴定乳球菌

在表型鉴定的基础上，应用已发表的16SrDNA序列设计引物，扩增L．sp．F001菌株16S rDNA基因，并进行测序，将结果与同属及非同属的乳酸菌进行同源性比较。结果表明，L.sp．F001菌株与同属的乳酸乳球菌同源性为99％上，尤其与乳酸乳球菌叶蝉亚种NC-DO2181T同源性为100％，与不同属的肉明串珠菌、漫游球菌、嗜盐四联球菌同源性分别为77．0％，82．1％，78．2％。结论：菌株L.sp．F001为乳酸乳球菌。     

利用16S rDNA序列及tuf-RFLP鉴定蒙古国发酵乳中的乳酸菌

运用16S rDNA序列分析和tuf-RFLP技术对采于蒙古国扎布汗省的25份发酵乳样中分离出的110株乳酸菌进行鉴定。首先将分离的110株乳酸菌的16S rRNA基因进行扩增,测序并构建系统发育树,初步鉴定为41株嗜热链球菌,40株瑞士乳杆菌,11株德氏乳杆菌保加利亚亚种,2株发酵乳杆菌,1株乳明串珠菌,2株肠膜明串肠膜亚种,1株乳酸乳球乳酸亚种和12株属于干酪族的菌株。由于干酪乳杆菌族的16S rDNA序列差异很小,故采用tuf-RFLP技术对这12株进行了进一步的验证,通过分离菌株与模式菌株tuf-RFLP图谱的比较分析,结果表明这12株菌均为干酪乳杆菌。     

酸马奶中干酪乳杆菌发酵特性的研究

研究了从内蒙古锡林浩特传统发酵酸马奶中分离4株(Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1)具有潜在益生特性的干酪乳杆菌的发酵特性。结果表明,37℃发酵24h结束后,干酪乳杆菌发酵乳滴定酸度为79.75°T,pH值变化在4.52～4.26之间。Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1在发酵结束的活菌总数分别为8.11×108,8.53×108,9.61×108和5.30×108mL-1,其中Lb.caseiZhang活菌数为最高。24h发酵结束时,Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1的黏度分别为0.1830,0.2957,0.1167和0.2497Pa.s。发酵过程中质量分数为12%的TCA可溶性氮无明显增加,4株干酪乳杆菌的蛋白水解力无显著性差异(P>0.05)。     

利用16S rDNA序列分析鉴定一株产抗菌物质的微生物菌株

从桃子上分离纯化得到1株产抗菌物质的菌株,命名为fmb3菌,通过抑菌实验发现该菌对革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌、革兰氏阴性菌大肠埃希菌和真菌扩展青霉等3种常见食品病原菌具有显著的抑菌效果。利用16SrDNA分析对该菌作了系统进化鉴定,首先提取fmb3菌基因组DNA,根据不同种属的细菌的16SrDNA序列两端的保守性设计通用引物,对fmb3菌16SrDNA片断进行PCR扩增,对扩增得到的目标片段测序,并且利用NCBIBLAST对测序结果进行比对,构建系统进化树进行分析,初步确定该菌属于枯草芽孢杆菌。     

瑞士乳杆菌与干酪乳杆菌在不同原料中的发酵特性研究

研究了瑞士乳杆菌和干酪乳杆菌单独与组合,以及与嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组合在纯牛乳、纯豆乳和混合乳中发酵12h后pH值和酸度值变化,以此来说明它们在3种原料中的生长情况.结果表明,瑞士乳杆菌在纯牛乳和混合乳中产酸能力很强,在纯豆乳中产酸能力不够强,生长不够好;干酪乳杆菌在纯豆乳中生长产酸能力比瑞士乳杆菌强;研究还得出瑞士乳杆菌和干酪乳杆菌组合,以及他们分别与嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组合在纯豆乳生长产酸能力相当.     

创伤弧菌16S-23S rDNA间区变形梯度凝胶电泳多态性分析

目的 建立创伤弧菌基因分型的新方法,了解创伤弧菌的分子特征.方法 应用PCR-变形梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术对创伤弧菌的16S-23S rDNA间区(16S-23S rDNA intergenic spacer regions,ISR)多态性进行分析比较,结合药敏试验,以进一步验证分离菌株之间的亲缘关系.结果 ISR-PCR将创伤弧菌菌株扩增出4条约900、750、650、550 bp大小不同的条带;同时,创伤弧菌的ISR-DGGE序列表现出明显的株间差异,18株共产生了16种不同的指纹图谱;聚类分析将所有的细菌分为两大类,相似性分别为0.65和0.71;亲缘关系较近的菌株具有不同于关系较远的菌株的耐药谱,与ISR-DGGE指纹图谱分析相一致.结论 这种分子操作技术完全能够用于创伤弧菌株型的调查与鉴定,为创伤弧菌的基因分型提供了一种新的方法.     

植物乳杆菌及其近缘种部分看家基因的系统发育分析

本文研究了16S rRNA基因、pheS和pyr G部分基因序列对Lactobacillus plantarum(L.plantarum)及其近缘种的区分能力,采用分离自酸面团、酸牛奶和泡菜中的10株L.plantarum为研究对象,以其看家基因pheS和pyr G部分基因序列作为分子标记,结合已上传至Gene Bank的近缘种的相应序列构建系统发育树并与以16S rRNA基因构建的系统发育树进行比较。结果表明:基于16S rRNA基因序列不能区分L.plantarum及其近缘种,而看家基因pheS和pyr G部分基因序列能够很好的区分植物乳杆菌种及其近缘种,其中,pheS在植物乳杆菌种内分型时相较于pyr G基因效果更好,以及将pheS和pyr G部分基因序列串联使用后,试验菌株与参考菌株的分类关系更加明晰,因此,联合基因(pheS-pyr G)可作为16S rRNA基因的辅助工具用于L.plantarum及近缘种和植物乳杆菌种内分型的快速分类鉴定。     

哈萨克族酸奶疙瘩中两种乳杆菌的分离与鉴定

从新疆伊犁、阿勒泰和乌鲁木齐南山地区哈萨克族制作的酸奶疙瘩中,分离发酵菌种并进行了种属鉴定。共获得6株菌株A1,A2,T1,T2,H1,H2。镜检和生理生化等分析,初步确定为乳酸菌。利用16S rDNA进行的分子鉴定结果表明:A1,T1,T2,H1,H2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),A2为香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)。这两种乳杆菌的分离与种类确定,对于深入研究新疆哈萨克民族传统干酪的风味、提高干酪的品质和促进干奶酪的生产奠定了理论基础。     

川西高原牧区牦牛酸乳中的几株乳杆菌发酵特性及系统发育研究

通过感官评定和酸度测定,从川西高原自然发酵牦牛奶酸乳中分离的109 株乳酸菌中筛选出6 株发酵酸乳感官品质良好的乳杆菌,进一步研究这6 株乳杆菌的生长曲线、产酸特性、产黏特性、产乙醛特性,并采用16SrDNA 基因序列分析,初步研究其系统发育关系。结果表明：在42℃条件下,6 株乳杆菌在MRS 培养基中培养14h、在10% 的脱脂乳中培养8h 时,达到最高生长量;6 株乳杆菌发酵10% 脱脂乳凝乳时酸度都达到GB2746 -1999 的要求,凝乳黏度为1050～4900mPa·s,乙醛产量为15.11～26.64μg/mL。冷藏中菌株E1、E-5 产酸量小,后酸化能力弱。6 株乳杆菌单株凝乳冷藏中黏度在第5 天达最高,其中菌株E-1、E-5 的凝乳黏度变化小;菌株J-2、E-5 发酵乳冷藏乙醛含量在第3 天达到最高,其余菌株在第2 天达到最高。16S rDNA 基因序列的相似性分析表明,菌株4-7、E-1、E-5 之间的相似度达到99% 以上,这些菌株在系统发育树上与植物乳杆菌(L. plantarum)处于发育树的同一分支;菌株J-2 与副干酪乳杆菌(L.paracasei)处于发育树的同一分支,与代表菌株L.paracasei SM63 的相似度为97.6%;菌株4-1 和B-2 的相似度达到99%,与发酵乳杆菌(L.fermentum)处于发育树的同一分支。综合研究结果表明菌株E-1 和E-5 可用于开发酸乳发酵剂菌种。     

0癌症进展Oncology Progress5R-5E0546E

ieved in the study of gynecological cancers,early diagnosis,early treatment and valid recognition of precancerous stage are still the priority of therapy.The standardization of treatment on gynecological cancers remains to be generalized and the surgeries are prone to be humanize and individuate.The technique of clinical treatment should be based on evidence-based medicine and cooperation of multi-ceneri和L.hilgardii无法加以区分,但是仍有助于将未知杆菌归入这一群。     

16S rDNA-RFLP技术鉴定西藏地区乳制品中的乳杆菌

将16S rDNA PCR技术和RFLP技术相结合,对分离自乳制品中的乳杆菌进行分类和鉴定.从我国西藏地区传统发酵乳中分离出51株乳杆菌,采用通用引物扩增16S rDNA,利用限制性内切酶AluI,HaeIII和HinfI将16S rDNA扩增产物进行酶切后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱将菌种鉴定到种的水平.根据16S rDNA-RFLP的结果从中选出8株有代表性的菌株进行生理生化实验和16S rDNA序列的测定,实验结果与RFLP鉴定结果相吻合,表明此方法是一种快速、准确的可用于大量乳杆菌分类和鉴定的方法.     

16S rDNA PCR-RFLP法快速鉴定分离自浓缩苹果汁生产线的脂环酸芽孢杆菌

首次用16SrDNAPCR-RFLP法对脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)属的菌进行快速分类、鉴定。以分离自浓缩苹果汁的29株脂环酸芽孢杆菌及5株已知的参比菌株作为试验菌株。研究结果表明,在87%的种的相似水平上,所有菌株分为7个种群和16个分支,即23个种。其中,仅4种未知菌株与已知参比菌属于同一个种,其它25株未知菌均是与参比菌株DSM3922、DSM4006、枯草芽孢杆菌B.subtilis1.943以及凝结芽孢杆菌Bacilluscoagulans1.2009不同种的菌,且都有可能是新的种群,需作进一步鉴定。     

西藏干酪乳酸菌降胆固醇特性研究

从西藏传统发酵乳(西藏灵菇)中分离筛选到1株高效降胆固醇乳酸菌KM-16。应用VITEK-32全自动微生物分析系统鉴定该菌为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。在液体培养基中KM-16乳酸菌对降胆固醇达51.8%。用KM-166灌胃高脂血症模型小鼠研究其对血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)的影响。结果表明灌胃14d后,实验组小鼠血清中TC、TG浓度较对照组显著降低(p<0.01),同时HDL-C浓度有所增加,动脉硬化指数(AI)低于对照的水平。     

产凝集素乳杆菌的筛选及PCR—16S rDNA鉴定

目的 从泡菜汁中分离产凝集素乳杆菌并鉴定.方法 通过凝集实验筛选产凝集素的乳杆菌,用聚合酶链式反应(PCR)扩增16S rDNA可变区基因鉴定产凝集素乳杆菌.结果 此菌株呈革兰阳性,短杆状,产乳酸.通过同源性比较,此菌株与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性为99%.结论 分离得到了产凝集素的菌株,鉴定表明此菌株为植物乳杆菌.     

发酵肠中一株细菌的16S rDNA鉴定及抗菌肽Surfactin对其芽孢灭活的效果

经过杀菌的发酵肠,仍有部分会变质,为探究其原因并进行控制而进行了以下试验。从商业发酵肠中分离获得1株耐热芽孢菌株B1,为构建控制技术,提高发酵肠安全水平,对该芽孢菌进行鉴定,并研究抗菌肽surfactin对其芽孢生长曲线的影响及盐类对surfactin灭活芽孢效果的影响。采用16S rDNA序列分析对该菌进行鉴定,并研究了不同浓度的NaCl和Na2HPO4?12H2O对surfactin灭活芽孢效果的影响。结果表明,该菌属蜡样芽孢杆菌属,同源性相似度达99%,仅有surfactin对芽孢作用时,不同浓度（20、25、30、35 μg/mL）的surfactin对其芽孢没有显著的杀灭作用,与NaCl和Na2HPO4?12H2O协同作用时,3%、5%、9%的NaCl可配合50 μg/mL和100 μg/mL的surfactin可有效杀灭芽孢,Na2HPO4?12H2O无此效果。该菌属于蜡样芽孢杆菌属,NaCl与surfactin共同作用可有效杀灭蜡样芽孢杆菌的芽孢,Na2HPO4?12H2O无显著作用。     

不同来源泡菜中乳酸菌的16S-23S rDNA间隔序列扩增及种群多样性分析

对不同来源的三种泡菜进行乳酸菌分离,并应用16S-23SrDNA间隔序列扩增指纹图谱结合16SrDNA测序对分离株进行种群多样性分析。结果显示在368株革兰氏阳性、接触酶阴性的产酸细菌中存在7个不同的分子指纹图谱(A～G型),其中杆菌指纹图谱为A、B和D型,球菌的指纹图谱为C、E、F和G型,不同来源的泡菜样品中乳酸菌谱型构成具有明显差异,其中52.3%(193/368)菌株扩增指纹图谱属于E型,显示了E型菌株是泡菜中的优势菌。从不同指纹图谱的菌株中随机挑取25株分离株进行16SrDNA扩增和测序分析,比对结果表明A型指纹图谱菌株属于Lactobacillus acidophilus;B和D型指纹图谱菌株属于Lactobacillus casei;E和G型指纹图谱菌株属于Lactococcus lactis;C和F型指纹图谱菌株属于Enterococcus sp.。在三种泡菜样品(a、b、c)中存在不同的乳酸菌种群构成,其中样品a和b菌群构成较为接近,而样品c中的菌群与a和b在构成上具有显著差异。本研究结果为泡菜发酵剂研究提供了基础数据及分析方法。