鼓槌石斛毛兰素诱导人结肠癌Caco-2细胞凋亡

目的:研究毛兰素对人结肠癌Caco-2细胞增殖的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:采用SRB法检测毛兰素对Caco-2细胞增殖的抑制作用,用Hoechst33342染色法观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达水平。结果:与对照相比,毛兰素能抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,且抑制率随着药物浓度与时间增加,呈剂量时间效应,48 h半数抑制浓度IC50为0.845μg/m L;毛兰素能诱导Caco-2细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G₂期;Caspase-3活性裂解片段表达增高。结论:毛兰素对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过线粒体途径诱导Caco-2细胞凋亡。      

苦荞麸皮多酚抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖活性研究

研究了产自重庆酉阳的苦荞(Fagopyrum tartaricum L.Gaerth,FG1)麸皮和四川西昌的苦荞(Fagopyyrum tartaricum L.Gaerth,FG2)麸皮中酚类化合物的含量、抗氧化和抗增殖活性。结果表明:FG1和FG2 2种苦荞麸皮总酚含量分别为(26.40±0.41)和(27.00±0.72)mg GAE/g DW,且游离态是其酚类化合物的主要存在形式(约占其总酚含量的93%);2种苦荞麸皮酚提取物均表现出一定的抗氧化性,并且FG2的抗氧化能力强于FG1(P0.05),FG1和FG2的DPPH自由基清除能力总IC50值分别为(39.56±2.76)和(24.69±0.33)μg·mL~(-1);还原力总EC_(50)值分别为(97.92±1.4)和(73.18±4.32)μg·mL~(-1);在抗增殖试验中,与对照组相比,FG1和FG2游离酚提取物均能明显抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖(P0.05)。然而,在不产生细胞毒性的浓度范围内,其结合酚提取物却表现出极弱的抗增殖作用。     

银条水苏糖抑制人结肠癌Caco-2细胞增殖的作用及机制

研究中国传统蔬菜银条中所含天然活性成分——银条水苏糖对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用及其可能机制。采用无血清培养基培养Caco-2细胞,分析银条水苏糖对Caco-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术考察银条水苏糖对Caco-2细胞凋亡的影响,通过检测LDH释放率分析细胞损伤程度。结果表明:银条水苏糖对Caco-2细胞株具有生长抑制作用,且存在剂量和时间依赖关系,Annexin-V-PI双染的结果提示,Caco-2细胞凋亡率随着银条水苏糖浓度的升高而上升,同时比较各试验组Caco-2细胞LDH释放率,发现银条水苏糖抑制了Caco-2细胞还原丙酮酸为乳酸的能力,限制了Caco-2细胞能量通路,影响了细胞周期,进而导致细胞凋亡,说明抑制细胞能量通路,"饿死细胞"可能是银条水苏糖抗肿瘤作用的机理之一。     

山杏仁乙醇提取物抑制Caco-2细胞生长

用水和乙醇溶液制备山杏仁提取物,通过细胞增殖分析试验研究其对人结肠腺癌细胞（Caco-2）生长的影响,结果表明,山杏仁乙醇提取物具有显著抑制Caco-2细胞生长作用,水提取物则没有显示抑制作用。用不同方法制备山杏仁乙醇提取物E1、E2和E3研究其对Caco-2细胞生长作用,其中E3的抑制Caco-2作用最显著。研究乙二醇、异丙醇和叔丁醇的提取物对Caco-2细胞生长作用,结果表明,3种提取物均没有显示抑制作用。检测E3的蛋白与脂肪含量,结果分别为35.5%和64.4%（两者之和为99.9%）。山杏仁中含有抑制Caco-2细胞生长的活性成分,用乙醇可提取该活性成分,该活性成分可能是以特定形式存在的蛋白质或脂肪或两者复合物。     

中国主要水果抑制肝癌HepG2细胞和结肠腺癌Caco-2细胞增殖活性评价

分别采用Folin-Ciocalteu法测定了水果提取物的总酚含量,采用亚甲基蓝法测定了其抗人肝癌细胞Hep G2和人结肠腺癌细胞Caco-2增殖的活性,分析了总酚含量与抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性之间的相关性。结果显示,25种水果中李子的总酚含量最高(1686.08±96.94μmol GAE/100鲜果),西瓜(83.54±2.10μmol GAE/100 g鲜果)和哈密瓜(79.35±0.76μmol GAE/100 g鲜果)的总酚含量最低;在可测出抗增殖EC50值的水果中,李子(18.99±0.06 mg/m L)和番石榴(20.94±0.09 mg/m L)抗Hep G2细胞增殖的活性最强,梨的活性最弱(389.63±10.82 mg/m L)。李子抗Caco-2细胞增殖的活性最强(8.73±0.11 mg/m L),火龙果的活性最弱(388.07±7.04 mg/m L)。水果的抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性与其总酚含量相关性显著(R2=0.4147,p0.01;R2=0.4071,p0.05),该相关性表明水果中的多酚具有良好的抗肿瘤细胞增值的活性。     

中草药提取物抑制H_2O_2诱导人皮肤细胞凋亡的初步研究

建立了过氧化氢(H2O2)诱导人皮肤成纤维细胞损伤及凋亡模型,并研究几种具有抗氧化作用的复方中草药提取物对细胞损伤及凋亡的影响。采用MTT、Hoechst染色及TUNEL等方法检测过氧化氢诱导细胞后以及加入中草药提取物后细胞的存活率、细胞形态以及细胞凋亡的状况。实验结果显示:在浓度为0.8 mmol/L,作用时间6 h,过氧化氢能诱导人皮肤成纤维细胞损伤和凋亡(p<0.05);而抗氧化类中草药复方提取物等物质能够显著提高过氧化氢诱导的细胞存活率的降低,并能明显减少凋亡细胞的数量(p<0.05),表明其对过氧化氢导致的细胞损伤和凋亡作用具有一定的抑制和防护作用。     

紫甘薯汁抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究

目的:研究紫甘薯汁的抗肿瘤活性及其诱导肝癌细胞HepG2凋亡机制。方法:采用Alamar Blue、倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR和Western blotting法检测不同体积分数的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究。结果:与对照组相比,体积分数5%和10%的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞具有抑制作用,呈体积分数依赖性;作用HepG2细胞48h后,能观察到细胞皱缩和凋亡小体以及凋亡细胞典型的梯状DNA条带。RT-PCR和Western blotting法检测结果显示,紫甘薯汁可以诱导HepG2细胞中Fas、FADD、Caspase-3、Caspase-8和p53 mRNA表达水平上调和蛋白表达量增加,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性裂解片段明显增高且Caspase-3酶活性显著提高。结论:紫甘薯汁体外对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过细胞表面死亡受体途径诱导HepG2细胞凋亡,同时p53在此凋亡过程中也起着重要的作用。     

共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞(Caco-2)的抑制作用

研究不同浓度、不同作用时间的共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响。采用体外细胞培养方法，通过MTT试验，观察不同浓度、不同作用时间的共轭亚油酸混合物对Caco-2细胞的增殖抑制作用。结果表明：共轭亚油酸混合物抑制了Caco-2细胞的增殖。且对Caco-2细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间密切相关。共轭亚油酸混合物对人结肠癌细胞Caco-2的增殖有抑制作用。     

西兰花芽提取物体外抗肿瘤活性及作用机制研究

西兰花芽是多种生物活性成分的良好来源,营养价值极高,近年来被广泛研究。该文对西兰花芽提取物的抗肿瘤活性及其潜在机制进行探讨。通过观察细胞形态学变化,发现西兰花芽提取物可使结肠癌Caco-2细胞和肝癌HepG2细胞密度下降,且细胞出现凋亡状态。细胞增殖抑制率结果表明西兰花芽提取物能够抑制两种肿瘤细胞增殖,且呈剂量依赖性,CaCl2组对 Caco-2和 HepG2细胞半数抑制浓度分别为（0.030±0.002）、（0.043±0.004）mg/mL。通过流式细胞术检测凋亡率,发现西兰花芽提取物可使细胞凋亡比例达到82.95%。活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和线粒体膜电位检测结果表明,西兰花芽提取物可能通过诱导细胞产生ROS,降低线粒体膜电势,促进细胞凋亡,从而抑制Caco-2细胞增殖。     

36种蔬菜抑制肝癌HepG2和结肠腺癌Caco-2细胞增殖活性评价

为明确36种中国主要消费蔬菜多酚提取物的总酚含量和抑制人肝癌细胞Hep G2和人结肠腺癌细胞Caco-2增殖活性,分别采用Folin-Ciocalteu法确定了蔬菜提取物的总酚含量,采用亚甲基蓝法确定了其抗Hep G2和Caco-2细胞增殖的活性,分析了总酚含量与抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性之间的相关性。结果表明,36种蔬菜每百克中没食子酸当量:芥蓝(973.09±31.29)μmol/hg,莲藕(920.55±29.00)μmol/hg,它们的总酚含量最高;丝瓜(44.94±4.16)μmol/hg,其总酚含量最低。在可测出抗增殖EC50值的蔬菜中,韭菜(15.96±0.88)mg/m L和蒜苔(17.54±0.03)mg/m L,它们的抗Hep G2细胞增殖的活性最强;上海青(390.52±17.63)mg/m L和空心菜(394.25±11.89)mg/m L,它们的活性最弱。韭菜抗Caco-2细胞增殖的活性最强,为(21.08±1.67)mg/m L;青尖椒的活性最弱,为(390.17±4.78)mg/m L。这些蔬菜的抗Hep G2和Caco-2细胞增殖活性与其总酚含量相关性均不显著(R2=0.027 1,p0.05;R2=0.151 3,p0.05),表明蔬菜的抗肿瘤活性不能单从其多酚含量的高低来推测。     

Investigation of the cytotoxicity of food-grade nanoemulsions in Caco-2 cell monolayers and HepG2 cells

Nanoemulsions represent one of the emerging formulations for nutraceutical delivery. However, the possible toxicity associated with the small droplet size (diameter <200 nm) is still unknown. In this study, three nanoemulsions emulsified by modified starch, Tween 20 and whey protein isolate, respectively, were prepared and their cytotoxicity was examined by comparing with the corresponding micron-sized emulsions. Caco-2 cell monolayers were used to mimic the small intestine epithelium. Integrity of the cell membrane and tight junctions was tested by measuring the lactate dehydrogenase leakage and transepithelial electrical resistance, respectively. All three nanoemulsions did not reveal significant difference from their micron-sized counterparts, suggesting no apparent toxicity of the nanoemulsions on the small intestine. Meanwhile, the possible hepatic toxicity was investigated using MTT assay on HepG2 cells. It was found that nanoemulsions made with modified starch and whey protein isolate, but not Tween 20, affected the cell viability/proliferation more than did the micron-sized emulsions. Further in vivo investigation is required to examine the possible hepatic toxicity of nanoemulsions.     

乳清蛋白Maillard反应产物对Caco-2细胞抗增殖抑制的影响

利用Caco-2细胞培养技术,结合MTT检测法,研究乳清分离蛋白(WPI)和还原糖(核糖、半乳糖以及乳糖)的美拉德(Maillard)反应产物对Caco-2细胞生长抑制的影响,以判断乳清蛋白Maillard反应产物的毒理学特性.结果表明,加热处理时间为0,2和4h的乳清蛋白Maillard反应产物,在作用Caco-2细胞质量浓度在0.01～2 g/L范围内,随着Maillard反应产物浓度的增加,Caco-2细胞存活率降低.在相同的作用质量浓度条件下,不同加热处理时间的乳清蛋白Maillard反应产物对Caco-2细胞存活率影响差异显著,即加热处理时间越长的乳清蛋白Maillard反应产物,对Caco-2细胞抑制作用越大.加热处理时间为4h的WPI、WPI-核糖、WPI-半乳糖和WPI-乳糖的Maillard反应产物对Caco-2细胞存活率分别为68.7％,87.5％,86.8％和70.9％,这说明乳清蛋白Maillard反应产物对Caco-2细胞生长具有微弱抑制作用,可作为功能性基料,在食品工业中广泛应用.     

亚硒酸钠和硒代蛋氨酸对人结肠腺癌细胞的毒性作用

探讨两种硒化物对人结肠腺癌Caco-2细胞的毒性作用。将Caco-2细胞暴露在不同浓度的亚硒酸钠(SeIV)和硒代蛋氨酸(SeMet)中培养24 h,用Annexin V-FITC/PI双染色法检测在同样浓度的SeIV和SeMet培养下细胞的凋亡率,并设置不做硒处理的空白对照。用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞内的超氧化物歧化酶SOD活力和谷胱甘肽GSH的含量。相同浓度时(0.8μg Se/mL),与对照相比,SeIV诱导细胞凋亡显著率上升(p0.05),SeMet变化不显著。一定浓度的SeIV(≥0.4μg Se/mL)和SeMet(≥40μg Se/mL)与对照组相比均显著降低细胞的存活率(p0.05);随着Se含量的升高细胞的存活率呈下降趋势,SeIV、SeMet的IC_(50)分别为2.56、215.55μg Se/mL。当SeIV浓度为≥0.8μg Se/mL,SeMet浓度为≥40μg Se/mL时,细胞的LDH释放率均显著高于对照组(14.80%)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet≥4μg Se/mL时,细胞的SOD活性均显著低于对照组(56.76 U/mg prot)(p0.05)。当SeIV浓度≥4μg Se/mL,SeMet浓度为160μg Se/mL时,细胞的GSH含量均显著低于对照组(61.67μg/mg prot)(p0.05)。一定浓度的SeIV和SeMet会使Caco-2细胞产生氧化应激而导致细胞毒性,诱导细胞凋亡。     

杜仲叶乙醇提取物的降糖作用机理

为了阐明杜仲叶的降血糖功效及其机制,采用酶-抑制剂模型,筛选高抑制率的杜仲叶乙醇提取物并判断其对α-葡萄糖苷酶的抑制类型;借助Caco-2人结肠腺癌细胞模型,研究杜仲叶20%乙醇解吸物对α-葡萄糖苷酶活性及葡萄糖转运蛋白的影响;气相色谱-质谱联用分析杜仲叶20%乙醇解吸物主要成分。杜仲叶20%乙醇解吸物可竞争性地抑制α-葡萄糖苷酶,其抑制常数Ki值为32.90 mg/mL。它对Caco-2细胞中的α-葡萄糖苷酶有较强抑制作用,其IC50为0.57 mg/mL,且对Caco-2细胞摄取葡萄糖也有一定抑制作用,1 mg/mL时抑制率可达26.25%。气相色谱-质谱分析表明杜仲叶20%乙醇解吸物主要有DL-异柠檬酸内酯、百里酚、儿茶素、2,6-二羟基-苯甲酸和3,4-二羟基-苯丙烯酸等。这些结果表明,杜仲叶乙醇提取物可以通过抑制α-葡萄糖苷酶活性,降低葡萄糖吸收来实现降血糖的效果。     

Caseinophosphopeptides exert partial and site-specific cytoprotection against H2O2-induced oxidative stress in Caco-2 cells

Caseinophosphopeptides can sequester prooxidant metals and scavenge free radicals, and may thus be used as functional food ingredients. The total antioxidant capacity (TEAC and ORAC) of two pools of caseinophosphopeptides (1–3 mg/ml), obtained from casein subjected to simulated gastrointestinal digestion (at two different pH values) and selective precipitation, was evaluated to determine dose–response activity. Pool B (which showed the highest antioxidant capacity due to the presence of more antioxidant amino acids) was used to test its cytoprotective effect against H₂O₂-induced oxidative stress in Caco-2 cells. Caseinophosphopeptides protected the cells against oxidative damage by preserving cell viability, increasing GSH content, inducing catalase enzyme activity, diminishing lipid peroxidation and maintaining a correct cell cycle progression. However, they failed to exert protection at a mitochondrial level (ROS and mitochondrial membrane potential), implying a partial and site-specific effect. Thus, their mechanism of action is not only related to free radical scavenging activity, but also to metal chelation and the modulation of intracellular signaling cascades.     

基于Caco-2细胞的外源核酸吸收模型的建立及其吸收机制

基于人结肠癌细胞系Caco-2细胞建立外源核酸的吸收模型,并在此模型的基础上探究质粒DNA的肠道吸收机制。在Transwell孔膜上培养Caco-2细胞21 d后,通过透射电子显微镜观察细胞形态、监测培养期间跨膜电阻（transepithelial electrical resistance,TEER）值、测定荧光黄透过率评价细胞模型是否成功建成;通过细胞毒性实验探究质粒对细胞生长的影响;将质粒DNA加入细胞模型中进行双向转运实验,探究质粒的肠道吸收规律;在低温和添加特异性抑制剂条件下进行质粒转运实验,进一步推测质粒的肠道吸收机制。结果表明,细胞分化形态良好、TEER值及荧光黄表观透过系数（apparent permeability coefficient,Papp）均符合要求,细胞模型可用于转运实验;质粒对细胞生长无显著抑制作用,可用于转运实验;随着时间的延长,质粒在模型两方向上的转运均呈逐渐饱和趋势,Papp（肠腔侧（apical,AP）→基底侧（basolateral,BL））远大于Papp（BL→AP）,提示质粒的转运受到某种载体蛋白的介导,膜介导的跨细胞运输方式可能参与其中;在低温和添加特异性抑制剂条件下,质粒的转运均受到显著抑制,进一步表明该过程是一个跨细胞方式的主动运输过程。