气相色谱法测定鱼油微胶囊中EPA和DHA的含量

鱼油富含ω-3不饱和脂肪酸,主要包括二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA).本文主要研究了用气相色谱内标法测定鱼油微胶囊产品中的EPA和DHA的含量.在充氮保护下,采用氢氧化钾-甲醇酯化法将鱼油微胶囊中的脂肪酸快速、有效地转化成脂肪酸甲酯,以二十一碳脂肪酸甲酯为内标,建立了EPA和DHA的定量分析法.使用HP-INNVOWAX毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm),载气为氦气,其流速为1.8mL/min,检测器温度为280℃.该方法对EPA和DHA定量分析的相对标准偏差分别为1.09%和1.05%,平均回收率分别为99.5%和99.3%.此检测方法简便快速、准确度高,适合于对大量样品的分析.     

气相色谱法测定鱼油软胶囊中二十碳五烯酸和 二十二碳六烯酸的柱前衍生化方法改进

目的建立柱前衍生-气相色谱法测定保健食品中二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量的分析方法。方法鱼油软胶囊经皂化后用1%的硫酸-甲醇甲酯化,用气相色谱法测定,FID检测器检测,色谱柱为DB-FFAP(30 m×0.25 mm,0.25μm),进样口温度250℃,检测器温度260℃,柱温215℃,直接进样,外标法定量。结果 EPA和DHA在0.05~5 mg/mL范围内线性良好(r_(EPA)=0.9999,r_(DHA)=0.9999),EPA和DHA的回收率分别为93.1%~102.3%和92.2%~103.9%,EPA和DHA的相对标准偏差均小于3%。结论该方法操作简便、快捷,避免了有毒试剂的使用,定量准确,重现性好,适合大批量样品的快速检测。     

气相色谱法同时测定保健食品中的5种 不饱和脂肪酸

目的建立气相色谱法同时测定保健食品中亚油酸、α-亚麻酸、二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid,DPA)的含量。方法样品先采用氢氧化钾甲醇溶液进行皂化处理,再用三氟化硼甲醇溶液甲酯化,经HP-FFAP色谱柱(30m×0.53 mm,1.0μm)分离测定。结果 EPA甲酯、DHA甲酯、DPA甲酯、亚油酸甲酯、α-亚麻酸甲酯分别在0.03927~1.178、0.04200~1.260、0.03449~1.035、0.08368~1.255、0.08482~4.241 mg/mL的浓度范围内线性关系良好,相关系数r均大于0.999;检出限分别为0.0039、0.0042、0.0034、0.0042、0.0042 mg/mL;加标回收率在91.1%~109.3%之间,相对标准偏差均小于5%。结论该方法操作简单快捷,适用于保健食品中亚油酸、α-亚麻酸、EPA、DPA和DHA的测定。     

气相色谱法测定鱼油中的二十碳五烯酸、 二十二碳六烯酸和二十二碳五烯酸

目的通过优化鱼油中二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid,DPA)的测定条件,建立鱼油中EPA、DHA和DPA气相色谱定量检测分析方法。方法采用正己烷处理样品,经色谱柱(Agilent,Elite-WAX,30 m×0.25 mm,0.25μm)分离鱼油中的EPA、DHA、DPA甲酯标准品,并进行定量检测。结果 EPA浓度在0.36~3.6 mg/m L、DHA浓度在0.37~3.7 mg/m L、DPA浓度在0.16~1.62 mg/m L的范围内与峰面积的线性良好,相关系数r0.999。在80%、100%、120%添加水平下,EPA、DHA和DPA的检出限分别为0.01%、0.03%、0.009%,EPA、DHA和DPA的回收率分别为96.2%、96.4%、95.7%。结论气相色谱法灵敏度高、准确、重现性好,适用于鱼油中EPA、DHA和DPA的含量测定。     

实时质谱新技术分析南极磷虾油的脂质组学轮廓

快速蒸发离子化质谱(REIMS)是近几年发展的一种无需任何样品前处理的新型原位电离质谱。基于REIMS建立南极磷虾油脂质组学轮廓的实时检测方法。将南极磷虾冷冻干燥后采用95%乙醇提取虾油,通过加热探头(500℃)离子化,形成气溶胶由文丘里泵氮气(2 bar)驱动并引入质谱,与端口处内设铬铝钴耐热钢A1灯丝(1.1Ω,3 V)碰撞发生二次电离。以丙二醇/亮氨酸脑啡肽混合物为辅助溶剂,经针泵注射进样器以0.1 mL/min的流量引入端口,用于清洗杂质,提高信号强度,锁定质量校正。结果显示,南极磷虾脂质分子离子峰主要出现在m/z 200～900区域范围内,并由脂肪酸和磷脂2个明显的峰簇组成。经结构鉴定和相对含量测定,共计20种脂肪酸和26种磷脂分子被检出,其中EPA(m/z 301,21.59%)和DHA(m/z 327,14.44%)为主要脂肪酸离子;[PG36:7-H]-(m/z 763,11.67%)和[PC O-38:3-choline]-/[PE O-38:3-NH3]-(m/z 737,11.46%)为主要磷脂离子。经方法学验证,该REIMS高通量实时检测方法灵敏度和精密度均能满足南极磷虾油中脂肪酸和磷脂的脂质组学轮廓分析测试要求。REIMS法实时检测南极磷虾油脂质组学轮廓具有快速、高效的优点,相关数据能为质谱工作者提供理论基础,为海洋功能食品企业和部门提供相关依据和参考。     

南极磷虾油磷脂富集工艺的优化

借鉴水化脱胶原理,对南极磷虾油磷脂富集工艺进行优化。通过单因素实验考察了反应溶液类型、质量分数、加入量,反应温度,反应时间及搅拌速度对南极磷虾油磷脂富集效果及富集后各功能成分的影响,得到南极磷虾油磷脂富集的最佳工艺条件为南极磷虾油中加入4倍南极磷虾油磷脂量的2%柠檬酸溶液、反应温度60 ℃、搅拌速度60 r/min、反应时间30 min。在最佳条件下磷脂富集效果明显,分离得到的磷脂溶液经冻干后磷脂含量可达70.78%,EPA和DHA含量分别为151.93 mg/g和113.70 mg/g;而分离得到的甘油三酯中虾青素含量最高可达780.49 mg/kg。     

利用乙醇进行南极磷虾油提取、精炼和富集的工艺一体化研究

选用乙醇为有机溶剂,对南极磷虾油进行了提取、精炼、富集的工艺一体化研究。研究了乙醇含水量、提取时间、料液比和搅拌速率对磷虾油提取率的影响。较优的提取条件为乙醇含水量5%、提取时间120 min、料液比1∶7(g/mL)、搅拌速率1 000 r/min、磷虾油提取率为14.4 g/100g。以粗虾油为原料,利用无水乙醇进行磷虾油精炼,去除粉末杂质10.81%。以乙醇-水混合溶剂进行虾油富集,最终得到磷脂含量706.1 mg/g,EPA23.9%,DHA 14.2%的高品质南极磷虾油。     

南极磷虾脂质的亚临界提取及磷脂分析

研究了南极磷虾脂质的亚临界丁烷提取工艺。测定了南极磷虾脂质的酸值、过氧化值、氟含量、生育酚含量、虾青素含量、磷脂含量及磷脂种类组成、脂肪酸组成。结果表明,通过单因素试验确定了亚临界丁烷提取南极磷虾脂质的较佳工艺条件为:动态提取时间120 min(单次提取时间30min、提取4次)、提取压力1.0 MPa、提取温度40℃;在较佳工艺条件下南极磷虾脂质提取率为21.39%;提取的南极磷虾脂质的酸值(KOH)10.6 mg/g,过氧化值3.01 meq/kg,虾青素含量248.4mg/kg,生育酚含量67.7 mg/kg,磷脂含量28.68%,其中磷脂中磷脂酰胆碱占71.20%;磷脂酰胆碱中脂肪酸组成与甘三酯的基本一致,但磷脂酰胆碱中EPA和DHA含量明显高于甘三酯的。     

南极磷虾磷脂的组成及其抗氧化活性

为研究南极磷虾磷脂的组成及抗氧化活性,采用硅胶柱层析法分离制备南极磷虾磷脂,对其磷脂组成和磷脂脂肪酸组成进行分析,通过测定自由基清除能力和还原能力系统评价南极磷虾磷脂的抗氧化活性。结果表明,纯化获得的南极磷虾磷脂的磷脂含量为（93.78±3.18）g/100 g;南极磷虾磷脂主要为磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺,分别占比（90.60±1.03）%和（5.08±1.10）%;南极磷虾磷脂中多不饱和脂肪酸含量丰富,且主要为二十碳五烯酸（eicosapen?taenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）,分别占总脂肪酸含量的（31.75±0.24）%和（19.35±0.10）%。南极磷虾磷脂具有良好的自由基清除能力和还原能力,其清除ABTS+自由基和DPPH 自由基的IC50 值分别为15.78 mg/mL 和14.87 mg/mL,且其还原能力呈浓度依赖效应。南极磷虾磷脂的抗氧化能力明显优于大豆磷脂和卵黄磷脂。     

正己烷-乙醇-水三元双相溶剂浸提法富集南极磷虾磷脂

为研究利用正己烷-乙醇-水三元双相溶剂浸提法从南极磷虾中提取富集磷脂,采用乙醇提取南极磷虾的总脂质,以总脂质得率为评价指标,考察料液比、浸提时间、浸提温度、浸提次数对总脂质提取效果的影响;而后以脂质得率、磷脂含量、磷脂得率为评价指标,优化采用正己烷-乙醇-水三元双相溶剂从南极磷虾总脂质中萃取富集磷脂的最佳条件。结果表明,采用乙醇提取南极磷虾总脂质的最佳条件为料液比1∶3（g/mL）、浸提时间3 h、浸提温度40 ℃、浸提3 次,在该条件下,南极磷虾总脂质得率为（4.69±0.13）%。正己烷-乙醇-水三元双相溶剂从南极磷虾总脂质中萃取富集磷脂的最佳体积比为0.275∶0.600∶0.125,获得的南极磷虾磷脂中磷脂含量为（85.46±0.31）%。南极磷虾磷脂主要为磷脂酰胆碱,磷脂中二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）的总量达到总脂肪酸含量的（53.39±0.76）%。     

南极磷虾油提取工艺的研究进展

南极磷虾油是一种从南极磷虾中提取的功能性油脂,富含磷脂、虾青素、二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)和二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)等活性物质,对人体有多种生理功能,如预防心脑血管疾病,促进大脑发育、抗氧化、缓解痛风和类风湿关节炎等。南极磷虾油提取工艺目前主要有有机溶剂提取法、超临界-CO₂萃取法、亚临界萃取法、酶解结合有机溶剂提取法及压榨法等。本文综述了南极磷虾油的提取工艺,以期为企业生产南极磷虾油提供参考。     

固相萃取—C30—RPLC法测定南极磷虾油中的虾青素

建立用固相萃取预分离、测定南极磷虾油样品中虾青素3种同分异构体的高效液相色谱法。样品经固相萃取小柱预分离净化,加NaOH-甲醇溶液皂化反应后,经YMC-Carotenoid C30色谱柱分离得到虾青素3种同分异构体,采用外标法定量。南极磷虾油中虾青素的最佳净化条件为：以LC-NH2为固相萃取小柱,正己烷-丙酮-甲醇(1:2:2,V/V)为洗脱溶剂,洗脱体积为8mL,洗脱流速控制在2～4mL/min。样品经LC-NH2固相萃取小柱净化后平均添加回收率为86.1%～94.3%,相对标准偏差为0.79%～1.91%。结果表明,方法重现性好,回收率高,适用于南极磷虾油中虾青素含量分析。     

基于PC型EPA含量评价南极磷虾油产品

南极磷虾油中卵磷脂（lecithin,PC）型二十碳五烯酸（ecosapentaenoic acid,EPA）相比于非PC型EPA具有更高的生物活性和生物利用度。为鉴定南极磷虾油中PC型EPA的分布比例,通过薄层色谱法分离南极磷虾油中的PC,利用气相色谱方法对其中的EPA进行定量。测定6种不同来源南极磷虾油中PC型EPA的含量,利用南极磷虾油PC型EPA含量占总EPA含量的比例这一参数评价南极磷虾油的品质。研究结果表明,二十碳五烯酸甲酯（methyl ecosapentaenoic acid,EPA-ME）相比于内标十七烷酸甲酯（methyl heptadecanoate,C17:0-ME）的相对质量校正因子为1.52;所筛选出的优质南极磷虾油的PC型EPA含量占总EPA含量的比例在60%以上,最高可达70%。     

高效液相色谱法测定甲鱼油中EPA、DHA的含量

建立分离检测广西黄沙鳖甲鱼油中的EPA和DHA的高效液相色谱法。试验采用岛津VP-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇和水(体积比70∶30),紫外检测波长为254 nm,流速为0.7 mL/min,柱温为30℃。甲鱼油经0.5 mol/L KOH-乙醇溶液进行皂化,三乙胺-溴苯乙酮酯化后直接上机分析。结果表明:EPA、DHA在0.025 mg/mL~0.15 mg/mL范围内线性关系良好,R2EPA为0.999 1、R2DHA为0.999 5;该法用于甲鱼油的检测,回收率EPA为96.00%～98.67%,DHA为92.00%～98.00%,该法简便、快速、重现性好。     

高效液相色谱/质谱联用直接测定鱼油中EPA/DHA含量

建立快速、简单、准确测定鱼油样品中EPA和DHA两种ω-3 PUFA含量的高效液相色谱/电喷雾质谱联用(HPLC ESI/MS)分析方法.鱼油经2 mol/L NaOH乙醇溶液皂化、3 mol/L HCL酸化后,使用Waters液相色谱仪、SymmetryC8柱(2.1×150mm),以甲醇一水为流动相、十七酸为内标,利用质谱定性定量测定EPA/DHA含量.质谱在电喷雾负离子模式下,对m/z 301、m/z 327和m/z269进行选择离子监测.该方法下EPA、DHA分别在5.55～55.50μg/mL和0.90～9.00μg/mL范围内峰面积和浓度呈良好的线性关系,相关系数REPA=0.999 5、RDHA=0.999 3;EPA、DHA的回收率分别为98.63%～99.23%、97.12%～99.17%.EPA、DHA的相对标准偏差分别为1.57%、1.20%(n=5).此方法流动相简单,分析时间短且无需衍生处理,不受色谱分离度的限制并可实现对样品的重复分析,能准确快速测定鱼油中EPA和DHA含量.     

南极磷虾油制备技术及其生理功能的研究进展

南极磷虾油是一种从南极磷虾中提取出来的功能性油脂,富含磷脂、Omega-3多不饱和脂肪酸,特别是二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）以及虾青素等活性物质,对人体有多种生理功能,包括预防心脑血管疾病、抗癌、提升脑部机能以及促进运动健康等。目前南极磷虾油的提取工艺主要包括有机溶剂提取法、超临界CO2萃取法、亚临界萃取法、酶解结合有机溶剂提取法及压榨法等。该文综述南极磷虾油的提取工艺及南极磷虾油的生理功能,为南极磷虾油的开发利用提供参考。     

气相色谱法多重检验海豹油中二十碳五烯酸、 二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸方法研究

目的建立多重检验海豹油中二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳五烯酸(docosapentenoic acid,DPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的气相色谱法。方法用氢氧化钾甲醇溶液将样品中EPA、DPA和DHA甲酯化,气相色谱程序升温同时分析3个ω-3多不饱和脂肪酸,分别用外标法和内标法进行定量。结果 3个ω-3多不饱和脂肪酸的外标法定量线性范围为50~5000μg/m L,相关系数均0.999,精密度相对标准偏差均10%,回收率均90%;内标法定量的精密度相对标准偏差均10%,回收率均85%;外标法和内标法对3个ω-3多不饱和脂肪酸的结果比较,CV%均小于10%。结论该方法操作简单快捷,适用于进口海豹油中EPA、DPA和DHA的含量简便和准确的测定。     

酶辅助提取南极磷虾磷脂及脂质组学研究

南极磷虾中含有丰富的磷脂资源,是磷脂的生物富集库。采用蛋白酶辅助Bligh & Dyer法提取南极磷虾磷脂技术,研究温度、pH值、时间以及酶的种类对南极磷虾磷脂提取率的影响;采用气相色谱法研究磷脂脂肪酸链结构组成,建立亲水色谱串联质谱法（HILIC-QTOF/MS）法对磷脂进行定量和鉴定。研究发现胰蛋白酶为最优提取酶,通过Box-Benhnken方法优化提取南极磷虾磷脂的最佳条件为：提取温度41 ℃,pH 9,提取时间3 h。该条件下得到的磷脂提取量为（3.66 ± 0.03）%。经测定,本试验中提取的南极磷虾磷脂的脂肪酸链结构主要为C16:0（31.58%）、EPA（31.94%）、DHA（20.64%）等。采用酶辅助Bligh & Dyer法提取得到的脂肪酸中不饱和脂肪酸所占比例比较高,EPA和DHA达到52.58%。通过HILIC-QTOF/MS 脂质组学研究成功分离磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）三大类磷脂。对磷脂类中各磷脂分子实现离子源内分离后成功测定59种磷脂分子,经数据库比对和二级质谱佐证得到磷脂脂肪酸链结构信息：南极磷虾中存在大量含有EPA和DHA链的磷脂分子。本研究结果为南极磷虾磷脂的开发和综合利用提供了试验依据。     

高效液相色谱-质谱联用法检测鱼油和南极磷虾油中氧化三甲胺

目的建立高效液相色谱-质谱联用法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定鱼油和南极磷虾油中氧化三甲胺(trimethylamine-N-oxide,TMAO)含量的定量分析方法,并对5种不同类型的鱼油和6种南极磷虾油中TMAO的含量进行测定。方法用乙醚作为鱼油和南极磷虾油的溶剂,以生理盐水和氢氧化钠溶液分别萃取鱼油和南极磷虾油中的TMAO,超滤离心后通过HPLC-MS/MS的多反应监测模式(MRM)检测TMAO;利用所建立的方法测定不同类型的鱼油和不同加工工艺的南极磷虾油中TMAO的含量。结果 TMAO在5~250μg/m L范围内线性关系良好,鱼油及南极磷虾油中TMAO回收率在83.5%~111.8%之间。市售鱼油中未检测到TMAO的存在。不同加工工艺制备的南极磷虾油中TMAO含量存在差异。结论所建立的HPLC-MS/MS测定TMAO的方法快速准确,灵敏度高,可用于鱼油及南极磷虾油中TMAO含量的分析测定。     

HPLC法测定海鲈鱼鱼油中EPA和DHA的含量

设计建立测定海洋鲈鱼鱼油中EPA (二十碳五烯酸)和DHA (二十二碳六烯酸)含量的方法,并测定尿素包合前后鱼油中EPA和DHA含量变化。采用Agilent色谱柱型号XDB (C_(18)),设置柱温38℃、检测波长220 nm、恒定流速1 mL/min,流动相乙腈-水梯度洗脱。结果表明, EPA甲酯和DHA甲酯的检测线性范围分别为0.059～5.9和0.094～9.4μg (R~2_(EPA)=0.999 6, R~2_(DHA)=0.999 9),检出限分别为0.5和0.9μg/mL。在精密度试验中, EPA甲酯和DHA甲酯的RSD分别为0.29%和0.34%。在加样回收率试验中,分别设计了6个加标浓度做检测, EPA甲酯和DHA甲酯的平均回收率分别为99.29%～99.87%(平均99.52%)和99.59%～101.48%(平均100.22%),平均RSD分别为0.24%和0.83%。尿素包合前,原料鱼油中EPA和DHA的含量分别为1.23%和2.52%;尿素包合后,含量分别为5.66%和12.34%。建立的HPLC法稳定、快捷、重复性好,适用于海鲈鱼下脚料鱼油中EPA和DHA含量测定。尿素包合后EPA和DHA的含量显著增长,达到包合前的4.8倍。