花生蛋白水解产物ACE抑制活性的研究

采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶水解花生蛋白,研究了水解过程中水解度的变化,并对水解产物的ACE抑制活性进行了探讨。得出三种酶对花生蛋白的水解作用:碱性蛋白酶>胰蛋白酶>中性蛋白酶。碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性明显高于胰蛋白酶和中性蛋白酶,水解产物的ACE抑制活性高达89.73%,中性蛋白酶水解产物ACE抑制率仅为27.24%。     

高粱碱溶蛋白ACE抑制肽的制备及其稳定性研究

以高粱为原料,通过碱法提取制备高粱碱溶蛋白,利用不同蛋白酶对其进行酶解,结果表明Alcalase碱性蛋白酶水解高粱蛋白得到的水解产物水解度和血管紧张素转化酶(ACE)抑制率最高。在此基础上进一步考察了碱性蛋白酶酶量、pH值、温度、反应时间这4个因素对水解产物ACE抑制率的影响,并通过响应面实验优化酶解条件,得到Alcalase碱性蛋白酶水解高粱碱溶蛋白制备ACE抑制肽最优工艺为:酶解温度55.5℃,酶解时间1.68 h,pH值7.95,酶量2 360 U/g,此条件下实测ACE抑制率达到75.98%,该ACE抑制肽具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,并且在体外经胃肠道酶系消化酶解后,依然能保持良好的抑制活性。     

超声波协同双酶复合酶解米渣蛋白制备ACE抑制肽工艺研究

运用超声波协同双酶复合酶法水解米渣蛋白制备ACE抑制肽。超声波预处理后米渣蛋白水解物ACE抑制活性显著上升,碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性最强。通过单因素分析和响应面优化,得出最优水解条件为:超声功率1 000W,超声时间25min,酶解时间2.5h,料液比1∶8,加酶量3 000U/g。在此基础上复合中性蛋白酶水解,水解时间缩减至2.0h。水解产物通过超滤以及Sephadex G-25凝胶层析后,得到一分子量为338u,最强ACE抑制活性IC_(50)为116μg/ml组分P2。     

鹿茸血制备ACE抑制肽的分离及结构鉴定

以天山马鹿的鹿茸血为原料,酶解制备血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。用碱性蛋白酶水解,水解产物具有较高的ACE抑制活性,对该水解产物进行分离,鉴定其中活性最强的组分的结构为PPLY(Pro-Pro-Leu-Tyr)。本实验证明从天山马鹿鹿茸血碱性蛋白酶水解物中可分离得到的一种新的ACE抑制肽PPLY。     

鲢肉酶解工艺及其产物对大鼠ACE抑制活性的研究

研究了四种蛋白酶水解白鲢鱼肉的工艺条件,并采用离体培养的方法研究其水解产物对大鼠血管紧张素转化酶(AntiotensinI-ConcertingEnzyme,ACE)的抑制活性。研究结果表明1398中性蛋白酶、复合风味酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶的最适水解温度分别为40、55、55和50℃,最适起始pH分别为7.5、7.0、7.5和6.5。复合风味酶的水解产物具有较高的ACE抑制活性,其12h的水解产物水解度为28.05%,ACE活性抑制率为64.75%。在优化酶解条件下,采用复合风味酶水解白鲢不同部位的蛋白质,蛋白质提取率可达90%,水解度22%～40%,在酶解液浓度相同时(1mg/ml),白肉酶解产物对ACE的抑制率最高。     

玉米ACE抑制肽的制备工艺及中试生产

以玉米黄粉为原料,利用Alcalase酶、Protamex酶和Flavourzyme酶酶解制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,研究酶解条件、酶解方式对玉米肽ACE抑制活性的影响。同时,在试验的基础上,对100 kg玉米黄粉酶解制备ACE抑制肽进行了中试生产。实验结果表明:单酶水解制备ACE抑制肽的最适酶为Protamex酶,在酶解150 min时水解产物的ACE抑制率为(90.98±0.54)%,水解产物的分子质量集中在10 405.22~300 Da。Flavourzyme酶和Protamex酶的分步水解可进一步提高玉米蛋白的酶解效率和玉米肽对ACE的抑制活性,在先用Flavourzyme酶水解2 h再加入Protamex酶继续水解3 h后,水解产物的ACE抑制率达到(99.35±3.55)%(IC50=0.764 mg/m L),水解产物的分子质量集中在8 439.49~185.2 Da。采用双酶分步水解方式水解100 kg玉米黄粉时,肽粉得率为27%,ACE抑制率为(56.70±0.86)%(1 mg/m L)。     

酶法生产大豆蛋白ACE抑制肽的研究

研究了Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Protames复合蛋白酶、Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白的水解效果和ACE(血管紧张素转化酶)的抑制活性。水解能力用pH-start法检测,水解度大小依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶;ACE抑制活性用高效液相法检测,ACE抑制率强弱依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶。综合考虑,选定Alcalase碱性蛋白酶为生产大豆ACE抑制肽的最适酶,并对其酶解条件进行了优化,确定生产大豆ACE抑制肽的最佳条件为:温度60℃、pH8.0、[S]=4%、[E]/[S]=4%,这时的水解度为14.4%。     

大豆分离蛋白ACE活性抑制肽的研究

研究了预处理条件对大豆分离蛋白水解效果的影响,热处理与微波辅助处理相结合能显著提高蛋白酶的水解效率.比较了6种酶解大豆蛋白产物的ACE抑制活性,选择碱性蛋白酶为最佳水解用酶,并优化了酶解条件.研究了8种大孔树脂对水解产物精制效果,结果表明:经D3520型大孔吸附树脂精制后,水解产物脱盐率89.4%,肽回收率90.6%,ACE抑制活性达84.1%.经HPLC法测定,大豆分离蛋白ACE活性抑制肽混合物分子质量主要分布在200～800 ku之间.     

玉米蛋白环(组氨酸-脯氨酸)二肽前体的制备及其鉴定（英文）

以玉米蛋白为原料,制备活性环(组氨酸-脯氨酸)二肽(cyclo(His-Pro))前体——His-Pro和Pro-His二肽。分别采用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对提取的玉米γ-醇溶蛋白进行单酶和双酶分步水解,筛选出最佳酶解工艺。采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的水解产物中cyclo(His-Pro)前体的含量比其他水解产物要高。采用响应面和L_(16)(4~5)正交试验对碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解γ-醇溶蛋白的工艺进行了优化,最佳水解条件为:底物质量浓度32 mg/m L,先加入12 100 U/g的碱性蛋白酶水解6.5 h,再加入17 000 U/g的风味蛋白酶于p H7.5、55℃条件下水解6 h。采用超高效液相色谱法和电喷雾质谱法对cyclo(His-Pro)前体进行定量和定性分析,结果表明水解产物中含有较高含量的脯氨酸-组氨酸二肽(6.88 mg/g)。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。     

油菜蜂花粉ACE抑制活性酶解物的制备及分离

采用4 种蛋白酶水解油菜蜂花粉蛋白制备ACE 抑制活性物质,高效液相色谱法测定油菜蜂花粉蛋白水解物对ACE 的抑制率。结果表明：油菜蜂花粉蛋白酶水解物具有ACE 抑制活性,水解物对ACE 的抑制活性差异显著(P ＜ 0.05),其中碱性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶＞酸性蛋白酶,碱性蛋白酶水解物的IC50 为0.35mg/mL。4 种蛋白酶水解物经Bio P-2 凝胶分离后,ACE 抑制活性较强的组分主要集中在保留时间70～120min,在此区间碱性蛋白酶水解物分离组分对ACE 的抑制率达到90% 以上,分子质量在376.4～1355D 之间。     

Bioactivities of peptide fractions derived from proteolytic enzyme-injected Hanwoo longissimus muscle in a model system

In this study, crude peptide fractions from Hanwoo loins were released by injecting with proteolytic enzymes [no enzymes (control); protease type XIII (E1); thermolysin (E2); and combination of E1 and E2 (E3)] and their bioactivities were determined. The peptides derived from E2-injected Hanwoo loin exhibited the highest angiotensin I–converting enzyme (ACE) inhibitory activity and vitamin C equivalents antioxidant capacity among the treatments. The released peptide by treatment of E2 and E3 had similar (P > 0.05) inhibitory activity in HT29 cancer cell viability compared with luteolin as a positive control and non-cytotoxic effect on normal cell (3T3-L1). Therefore, the released peptide fraction from thermolysin (E2)-injected Hanwoo beef might contain potent bioactive peptides with ACE inhibitory and antioxidative activity and inhibition effect on certain cancer cell viability.     

从小麦胚芽蛋白中分离和鉴定血管紧张素转化酶抑制肽的研究

用碱性蛋白酶水解小麦胚芽蛋白得到的水解物对血管紧张素转化酶有强的抑制活性(IC50=0.014mg/ml),小麦胚芽蛋白水解物经SephadexG-15纯化、制备RP-HPLC分离,得一对ACE有强烈抑制作用的组分X(IC50=5.46μmol/L),X氨基酸分析、电喷雾质谱确定了X的序列为Ala-Met-Tyr。     

酶解魔芋飞粉蛋白制备ACE抑制肽

目的：用魔芋飞粉制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,以开发魔芋飞粉资源。方法：以体外ACE抑制率为指标筛选最佳用酶并确定酶解条件。结果：碱性蛋白酶为酶解魔芋飞粉用酶,其最佳酶解条件为：底物浓度2.25%(净蛋白),酶用量3500U/g 底物蛋白,温度50℃,pH8.0,酶解时间270min,此时酶解液的ACE 抑制率为95.69%,多肽得率为12.70%;制得的魔芋多肽为淡黄色粉末,蛋白质含量为62.30%,多肽含量为52.67%,其抑制ACE 活性的IC50 为0.80mg/mL。结论：魔芋飞粉经蛋白酶酶解可制备高活性的ACE 抑制肽。     

一种新型绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽结构鉴定及分子结合机制分析

本研究旨在利用蛋白酶水解绵羊乳酪蛋白,制备新型血管紧张素转化酶（Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE）抑制肽并对其分子抑制机制进行分析,为功能性绵羊乳多肽乳制品开发提供技术支持。试验以绵羊乳酪蛋白为原料,以水解度、ACE抑制率和分子量分布为评价指标,从四种蛋白酶中筛选最适蛋白酶,选择<3 kDa的组分通过LTQ Orbitrap Velos质谱仪进行肽鉴定,筛选潜在的ACE抑制肽进行人工合成并测定其半抑制浓度（IC₅₀）,采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接进一步解释肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶为最佳水解蛋白酶;从κ-酪蛋白中筛选出一种新的ACE抑制肽KYIPIQY,半抑制浓度（IC₅₀）为5.73 μmol/L;Linewaver-Burk图表明该肽对ACE为混合型抑制模式;分子对接显示,KYIPIQY通过与ACE的S1和S2活性口袋形成氢键和疏水作用力发生紧密结合并且可以扭曲ACE的Zn2+四面体,抑制ACE催化活性的失活而发挥高效的ACE抑制活性。     

Comparison of ACE inhibitory and DPPH radical scavenging activities of fish muscle hydrolysates

To utilise Atlantic salmon, Coho salmon, Alaska pollack, and southern blue whiting as components of neutraceutical food and to clarify the potential physiological function of those fishes, their muscles were hydrolysed with pepsin, pancreatin or thermolysin. Methanolic extracts of fish muscle and their hydrolysates were prepared for analysis of angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory and 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activities. Pepsin hydrolysates of all the fish samples did not increase degree of hydrolysis, extractive nitrogen content and bioactivities. Pancreatin and thermolysin improved the ACE inhibitory activity, and the activity was expressed following the peak of size exclusion chromatography (SEC). The DPPH radical scavenging activity was increased following pancreatin and thermolysin hydrolysis, but this activity was not related to the SEC result. Except for the lower DPPH radical scavenging activity of Alaska pollack pancreatin hydrolysate than those of the others, there was no significant difference in the ACE inhibitory and DPPH radical scavenging activities by fish species.     

Evaluation of angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activities of smooth hound (Mustelus mustelus) muscle protein hydrolysates generated by gastrointestinal proteases: identification of the most potent active peptide

In this study, smooth hound protein hydrolysates (SHPHs), obtained by treatment with various gastrointestinal proteases, were analyzed for their angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activities. Protein hydrolysates were obtained by treatment with crude alkaline enzyme extract, low molecular weight (LMW) alkaline protease, trypsin-like protease and pepsin from Mustelus mustelus, and bovine trypsin. All hydrolysates exhibited inhibitory activity toward ACE. Hydrolysate generated with alkaline protease extract displayed the highest ACE inhibitory activity, and the higher inhibition activity (82.6% at 2 mg/mL) was obtained with a hydrolysis degree of 18.8%. This hydrolysate was then fractionated by size exclusion chromatography on a Sephadex G-25 into five major fractions (P₁–P₅). ACE inhibitory activities of all fractions were assayed, and P₃ was found to display a high ACE inhibitory activity (62.24% at 1 mg/mL). P₃ was then fractionated by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and ten fractions of ACE inhibitors were found (F₁–F₁₀). Sub-fraction F₃ showed the strongest ACE inhibitory activity, being able to suppress more than 60% of initial enzyme activity at a concentration of 100 μg/mL. The amino acid sequence of peptide F₃ was determined by ESI/MS and ESI–MS/MS as Ala-Gly-Ser, and the IC₅₀ value for ACE inhibitory activity was 0.13 ± 0.03 mg/mL. Further, purified peptide F₃ maintained inhibitory activity even after in vitro digestion with gastrointestinal proteases in order to demonstrate gastrointestinal stability digestion to enable oral application. These results indicate that smooth hound protein hydrolysate possesses potent antihypertensive activity.     

牡蛎功能短肽的制备及ACE抑制活性

以新鲜无壳牡蛎为原料,采用酶水解的方法制备牡蛎短肽,经SephadexG 15分离,并用HPLC测定其相对分子质量分布,通过HPLC法定量马尿酸测定各组分的ACE(血管紧张素转化酶)抑制活性。结果表明,牡蛎水解液中相对分子质量较大和较小部分的ACE抑制活性偏低,只有相对分子质量在一定范围内的短肽,对ACE具有较好的抑制作用,质量浓度为0.4mg/mL的牡蛎功能短肽的ACE抑制率为51.4%.     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

谷朊粉酶解物的制备及其ACE抑制肽的分离鉴定

以谷朊粉为原料,以血管紧张素转换酶（ACE）抑制率为指标,比较4种蛋白酶的酶解效果。采用超滤、葡聚糖凝胶色谱、反相高效液相色谱（RP-HPLC）的方法分离纯化ACE抑制肽并用电喷雾飞行时间质谱联用(ESI-TOF-MS)鉴定其结构。结果表明：碱性蛋白酶酶解3 h的谷朊粉酶解物具有较高的ACE抑制活性;超滤后,分子质量Mr<1 ku的组分具有较高的ACE抑制率;分离纯化后得到小肽的ACE抑制率高达（81.03±1.20）%;由ESI-TOF-MS质谱图得出该小肽的m/z为630.89,氨基酸序列为Trp-Phe-Gln-Pro（WFQP）。