丙酸菌生长细胞转化亚油酸生成共轭亚油酸

本文对费氏丙酸杆菌HZ—P-35转化亚油酸生成共轭亚油酸基本特性进行了研究。共轭亚油酸的测定以十七碳烯酸作内标物经甲酯化后采用气相色谱法测定。实验结果表明，费氏丙酸杆菌菌株HZ—P-35在改良MRS培养基中厌氧培养时生长较为缓慢，96h左右对数生长期结束；接种量10％有利于菌株的生长及共轭亚油酸转化；最适温度30℃既有利于菌体生长又有利于共轭亚油酸的生成；细胞边生长边转化底物亚油酸，培养4～5d时共轭亚油酸转化迭最大值，而至第6d菌体浓度具有较大值。     

丙酸菌HZ-P-35的分离鉴定及其生成共轭亚油酸的研究

从奶牛青贮饲料中分离筛选出1株丙酸菌菌株HZ-P-35,液相色谱检测证明该微生物能从葡萄糖生产丙酸、乙酸和虎珀酸。通过平板菌落形态、液体培养、透射电镜等形态学手段观察、生理生化实验鉴定以及16SrRNA序列分析,初步确定所得菌株HZ-P-35为1株费氏丙酸杆菌变种,命名为Propionibacterium frudenreichiivar LL。细胞发酵转化实验结果表明,菌株HZ-P-35在MRS培养基中具有转化亚油酸生成共轭亚油酸的能力,气相色谱测定表明共轭亚油酸的质量浓度达24.37μg/mL。     

丙酸菌转化生成共轭亚油酸的发酵优化

本文对费氏丙酸杆菌费氏亚种转化亚油酸生成CLA发酵条件进行了研究,通过单因素试验及Box-Behnken中心组合试验设计,确定了最佳发酵条件：培养基中葡萄糖浓度2.11%,尿素浓度0.95%,初始pH值6.52。在此条件下,CLA的产量为3.18μg/mL,是优化前的8.4倍,CLA产量有了较大的提高。     

费氏丙酸杆菌谢氏亚种转化芝麻油生成共轭亚油酸的研究

对费氏丙酸杆菌谢氏亚种CGMCC1.2231菌体细胞转化芝麻油生成共轭亚油酸进行了研究。首先通过单因素实验,研究了诱导产酶阶段亚油酸的添加量,以及转化反应温度、缓冲体系pH值、乳化剂种类对共轭亚油酸生成量的影响,进而通过正交实验得到最佳转化条件。在诱导产酶培养阶段加入0.15%(v/v)的亚油酸,转化温度30℃,反应体系pH值为7.4,使用牛血清白蛋白乳化底物的条件下,共轭亚油酸的最高生成量可达45.682mg/mL。     

费氏丙酸杆菌费氏亚种在不同基质中转化生成共轭亚油酸的研究

研究了在MRS、乳酸钠和脱脂乳三种培养基质下温度、时间、底物浓等因素对P.freudenreichiissp.freudenreichii生成CLA的影响,结果表明P.freudenreichiissp.freudenreichii在MRS、乳酸钠和脱脂乳中均具有生成CLA的能力,三种培养基质中一定浓度的葵花籽油对P.freudenreichiissp.freudenreichii的生长都有明显的抑制作用,在MRS培养基中葵花籽油浓度为12mg/ml,菌液量10%(V/V),30℃培养24hCLA生成量最大为24.813μg/ml。     

产共轭亚油酸丙酸菌的筛选及转化条件初探

通过富集培养、梯度密度稀释和液体培养发酵,采用紫外分光光度法测定共轭亚油酸(CLA),从市售奶酪中筛选获得1株转化生成CLA能力相对较高的菌株P9:考察了菌体接种量、亚油酸(LA)的添加量、反应温度、反应体系pH值以及乳化剂种类等因素对菌株P9 CLA生成量的影响.通过对菌株P9的菌落和形态特征、产丙酸特性及生理生化特性分析,初步鉴定该菌株为费氏丙酸杆菌(Propionibacterium frudenreichii).研究结果显示,菌株P9在菌体接种量10%(v/v),LA添加量0.75mg/mL,pH值为6.8,反应温度30℃,Tween-80作为乳化剂的条件下,CLA生成量为63.371μg/mL,亚油酸转化率为8.45%,表现出较好的产共轭亚油酸能力.     

玉米青贮中产共轭亚油酸菌的筛选与鉴定

从玉米青贮中分离到一株共轭亚油酸生产菌(ANCLA01),发酵液中共轭亚油酸生成量为33.442 μg/mL;菌株为革兰氏染色阳性杆菌且菌体短直、两端钝圆,不产芽孢;发酵时有乳酸生成,属于同型发酵B型并对底物要求特殊的乳酸杆菌;分子生物学鉴定结果表明,该菌株与Lactoba-cillus plantarum strain L5的16S rRNA碱基序列相似性达99.93%.兼顾该菌株传统鉴定方法,确定其为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).结果表明:ANCLA01菌株是青贮玉米中确产共轭亚油酸的植物乳杆菌.     

生物转化法生产共轭亚油酸及其研究进展

共轭亚油酸（CLA）是一种具有多种重要生理功能的天然脂肪酸，具有抗癌、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病、调节免疫等多种功能。论述了利用生物转化法合成共轭亚油酸的生产菌株、培养条件和培养模式以及利用基因工程等菌株改良手段以提高生产效率的国内外研究进展；并简述了生物法工业化生产共轭亚油酸的前景。     

瑞士乳杆菌L7生物转化共轭亚油酸的研究

建立了瑞士乳杆菌L7(Lactobacillus helveticusL7)分批发酵生物转化c9,t11-CLA的优化条件:MRS培养基、30℃发酵、静置培养、LA浓度为1.000 mg/mL、发酵时间36h。5L发酵罐分批发酵时,c9,t11-CLA的产量高达0.572 mg/mL。     

植物乳杆菌ZS2058生物转化产物共轭亚油酸的分析方法的研究

研究了紫外分光光度法、GC、Ag~+-HPLC和GC-MS四种分析方法对植物乳杆菌ZS2058生物转化亚油酸(LA)产生的共轭亚油酸(CLA)检测时的异同点。结果表明,这4种分析方法在对CLA进行检测时各有特色,应用范围也有不同。紫外分光光度法检测成本最低,操作最快速,但检测结果为转化产物中各种CLA异构体的总和,而GC、Ag~+-HPLC和GC-MS能将产物中的各类CLA异构体分开,可对复杂的生物转化产物进行分析。其中,GC的最大优点在于可以检测到转化底物LA,Ag~+-HPLC可将转化产物中c9,t11-CLA和t8,c10- CLA很好的分离,而GC-MS可以将各种异构体与其它副产物明确区分开来。总之,在检测生物转化法产生的CLA时,根据不同的实验需求来选择不同的检测方法,并需将这几种方法灵活的结合起来应用。     

植物乳杆菌p-8转化亚油酸为共轭亚油酸的分析

研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)p-8的菌体、菌体破碎液和重组亚油酸异构酶系转化亚油酸(linoleic acid,LA)为共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的能力和机制.结果表明:L.plantarum p-8在含有LA的MRS上清液和菌体破碎液体外...     

定向进化植物乳杆菌和痤疮丙酸杆菌高产共轭亚油酸

为获得高产共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA）的菌株,对亚油酸异构酶系植物乳杆菌的肌球蛋白交叉反应抗原（myosin-cross-reactive antigen,MCRA）基因mcra和痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因lai-p进行克隆,克隆成功后连接到骨架质粒pCold-SUMO上构建两种含mcra基因和lai-p基因的大肠杆菌重组菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导阳性重组菌蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证得到目的蛋白表达条带,说明两种基因表达成功。采用易错聚合酶链式反应定向进化mcra基因和lai-p基因,构建重组菌突变体库,利用流式细胞术分选获得吸光度提高和CLA产量提高的重组菌株,其中pCold-ycmcra-gfp重组菌243 株,吸光度最高的为155号菌1.050 6±0.000 4,提高了5.02 倍;pCold-yclai-p-gfp重组菌156 株,产量最高的为39号菌（11.62±0.003 6）μg/mL,提高了2.99 倍。本研究为后期深入了解突变菌株CLA产量提高的原因,并获得两种亚油酸异构酶的产酶机制奠定了一定基础。     

高纯度共轭亚油酸的制备

以红花籽油为原料,比较了2种高纯度共轭亚油酸(CLA)的制备方法:(1)碱法异构化-尿素包合、(2)皂化-尿素包合-碱法异构化。针对每种方法确定了尿素包合和碱法异构化的最佳工艺条件,并对所得的CLA异构体组成进行了分析。研究表明:按照方法(2)先获得高纯度亚油酸(LA),再对其碱法异构化制备CLA可以得到纯度更高的产品。该方法在最佳反应条件下,制备得到的CLA的纯度为97.22%,收率为32.08%,其中c9t11-CLA含量为45.14%,t10c12-CLA含量为49.12%。     

气相色谱法定量分析共轭亚油酸异构体

共轭亚油酸(CLA)是亚油酸的位置和几何异构体。其中9c,11t-CLA和10t,12c-CLA是目前发现生理活性比较强的两种共轭结构。作者使用氢氧化钾甲醇溶液对油脂中的共轭亚油酸甘三酯进行水解和甲酯化,利用毛细管气相色谱进行分离后外标法定量。作者得到共轭亚油酸9c,11t-CLA回收率在97.66%～103.51%之间,10t,12c-CLA回收率在96.12%～102.48%之间,检出限2.4 mg/kg,定量限8 mg/kg。     

气相色谱法分析共轭亚油酸异构体

有许多种测定共轭亚油酸各异构体相对含量的方法 ,如气相色谱法、银离子高效液相色谱法、气质联用和核磁共振法等 ,其中气相色谱法最为简便快速。本研究选择气相色谱法用于共轭亚油酸各异构体的分析。结果表明 ,气相色谱法可用于共轭亚油酸中主要异构体的相对含量的测定