~(125)I-SOD氯胺T法和Iodogen法标记条件的研究

选用正交设计L_(16)(4~5)表对影响~(125)I-SOD氯胺T标记法的5个影响因素(即标记温度、氯胺T加入量、标记反应时间、PB缓冲溶液的浓度和体积),每个因素分4个水平进行了研究。标记产物~(125)I-SOD用Sephadex G25色层柱进行分离,并测定了标记率和相对活性,仅做16组试验就得出了最佳标记条件。在此基础上又用正交设计L_9(3~4)表对~(125)I-SOD Iodogen因相标记法进行了研究。取Idosen加入量、标记温度和反应时间3个因素,每个因素3个水平,仅做9组试验,就确定了最佳标记条件:对20μg SOD而言,Iodogen为50μg,标记温度为15℃,反应时间为15min时,~(125)I的标记率可达79.0％,~(125)I-SOD的放化纯度达95.7％,相对活性达98.2％,比活度达2.92×10~5Bq/μg,明显优于氯胺T法。     

超氧化物歧化酶的氯甘脲和氯胺T放射性碘标记法的比较

本文介绍超氧化物歧化酶(SOD)的氯甘脲和氯胺T标记方法的比较,结果表明:SOD用氯甘脲标记法~(131)I标记率(55.34％)较同样条件下氯胺T标记法~(131)I标记率(42.37％)为高;而且用氯甘脲标记方法的SOD酶的活性(0.5 U/μg)较氯胺T标记方法的SOD酶活性(0.2U/μg)要高。且前者具有操作简单、经济、高效、快速的优点。     

消脂素的间接碘标记法与直接碘标记法的对比研究

间接碘标记法是先以氯胺T（ch-T）法标记对羟基苯丙酸琥珀酰亚胺脂（Bolton-hunter试剂,BH试剂）,制备125I-BH,然后于冰浴中与LEP联结,得到125I-LEP;直接碘标记法是以ch-T法按常规对LEP直接进行标记。结果显示,间接碘标记法标记的125I-LEP放射性比活度为1．43MBq／μg,125I的总标记率为37．8％,所建立的RIA的灵敏度为0．25μg/L,在45天内标准曲线（0．5-30μg／L）稳定,B：Bo位于92．7％-17．5％到94．6％-22．8％之间。直接法制备的125I-LEP,放射性比活度为1．79MBq／μg,125I的总标记率为41．4％,方法灵敏度为0．37μg/L。在44天内标准曲线（0．5～30μg／L）亦较稳定,B：B0位于87．7％～23．7％到91．4％-35．2％之间。表明两方法的标准曲线稳定性在45天内差异不大,均能满足临床工作的需求。     

N—琥珀酰亚胺3—[^125I]碘苯甲酸酯（S^125IB）的放射化学合成

利用Iodogen法成功地对N-琥珀酰亚胺3-（三正丁基锡）苯甲酸酯（ATE）进行了放射性碘-125标记，利用Sep-Pak硅胶柱实现了干扰蛋白标记的ATE及Iodogen与S^125IB的分离，得到了放射性碘间标蛋白质有用的中间体S^125IB，标记率93％以上。并研究了影响标记的因素，得出较佳标记条件为：ATE与Na^125I摩尔比6：1、氧化剂Iodogen用量7μg、室温反应5min。     

蛋白C系统的放射免疫分析

蛋白C系统是机体重要的凝血反应调节系统,该文组合生化和免疫化学技术分别从人尿中提纯了血栓调节素和从利凡诺去白蛋白人血浆中纯化了蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物。免疫家兔产生抗血清。用氯胺T法制备了~(125)Ⅰ-蛋白C和~(125)Ⅰ-蛋白S,Iodogen法制备了~(125)Ⅰ-蛋白C抑制物,Bolton-Hunter法制备了~(125)Ⅰ-血栓调节素。采用平衡法分别建立了上述四种化合物的放射免疫分析。蛋白C、蛋白S、蛋白C抑制物和血栓调节素的分析灵敏度分别为3.94μg/L、9.87μg/L、2.58μg/L和6.16μg/L;批内和批间CV为4.40％和9.68％、4.99％和13.14％、2.73％和8.62％、5.10％和10.94％;平均回收率为104.28％、94.30％、101.89％和105.22％;工作范围为6.25～1024μg/L、21～700μg/L、4.8～1024μg/L和8.1～560μg/L。四种方法与其检测的相似化合物均无交叉。初步应用效果满意,该方法可为血栓栓塞性疾病的诊疗提供有效手段。     

一些多肽激素放射性碘标记条件的探讨

本文探讨用Na~(125)I标记一些多肽激素时受氧化剂(氯胺T)用量、反应液pH、温度、体积和反应时间等因素的影响,标记化合物贮存时间长短对免疫活性反应的影响,以及贮存损伤等问题。     

Iodogen法~(125)I标记单克隆抗体10D9

采用Iodogen法,选择最佳标记条件进行12525I标记单克隆抗体10D9.标记产物用Sephadex G-50分离纯化,三氯醋酸(TCA)法测定标记率和放化纯,并对标记物的免疫活性及稳定性进行分析.结果显示,125I标记10D9的最佳条件为Iodogen用量10μg、10D9用量20μg、加入Na125I22.2MBq、室温反应8min,125I-10D9的标记率为(84.10±3.18)%,放化纯为(98.49±1.14)%,比活度为933.51 MBq/mg;125I-10D9与Daudi细胞的特异性结合率为(23.21±1.14)%;标记物加到含1%BSA的PBS中放置3W后放化纯度仍>90%.结果表明:Iodogen法125I标记10D9标记率和放化纯高,方法简便,标记物的稳定性好且能较好地保持其免疫活性.     

人心肌酸性铁蛋白与肝癌关系的研究

从人心肌组织中提纯了酸性铁蛋白,免疫家兔产生抗血清,氯胺-T法制备了~(125)I-酸性铁蛋白和~(125)I-抗酸性铁蛋白H亚基单抗。分别采用平衡法和顺序饱和法建立了酸性铁蛋白放射免疫分析和酸性铁蛋白H亚基免疫放射测量分析。它们的批内CV分别为1.65％和2.44％,批间CV为9.71％和10.16％,回收率为102％和92.29％,ED_(50)为27.50μg/L和23.05μg/L。前者的可测范围为7.0～369.6μg/L,后者的灵敏度为0.736μg/L。两方法     

~(211)At、~(131)I标记蛋白质的合成

~(211)At和~(131)I通过氯胺T和过氧化氢直接氧化标记牛血清白蛋白和胰蛋白酶,采用凝胶色谱Sephadex G-75柱洗脱分离蛋白质,γ计数测量和相对比较法计算标记产额。一般认为~(211)At标记蛋白质时使用H_2O_2较好,~(131)I标记蛋白质时则适合使用氯胺T,且蛋白质的结构强烈影响标记结果。在八个不同的实验中,过氧化氢氧化标记的~(211)At-牛血清白蛋白产率为96.9％,氯胺T氧化标记的~(131)I-牛血清白蛋白产率为66.1％。     

N-琥珀酰亚胺3 -[125I]碘苯甲酸酯(S125IB) 的放射化学合成

利用Iodogen法成功地对N-琥珀酰亚胺 3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)进行了放射性碘-125标记,利用Sep-Pak硅胶柱实现了干扰蛋白标记的ATE及Iodogen与S125IB的分离,得到了放射性碘间标蛋白质有用的中间体S125IB,标记率93%以上。并研究了影响标记的因素,得出较佳标记条件为:ATE与 Na125I摩尔比6:1、氧化剂 Iodogen用量7mg、室温反应5min。     

蛋白C系统的放射免疫分析

蛋白C系统是机体重要的凝血反应调节系统,该文组合生化和免疫化学技术分别从人尿中提纯了血栓调节素和从利凡诺去白蛋白人血浆中纯化了蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物。免疫家兔产生抗血清。用氯胺T法制备了~(125)I-蛋白C和~(125)I-蛋白S,Iodogen法制备了~(125)I-蛋白C抑制物,Bolton-Hunter法制备了~(125)I-血栓调节素。采用平衡法分别建立了上述四种化合物的放射免疫分析。蛋白C、蛋白S、蛋白C抑制物和血栓调节素的分析灵敏度分别     

EM>N-/EM>琥珀酰亚胺-3-碘［S

研究能有效降低抗体的体内脱碘的标记方法。碘标记N-琥珀酰亚胺-3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)前体,得到N-琥珀酰亚胺-3-碘[125I]苯甲酸酯(S125IB),分别与人IgG和抗人肝癌单抗(Hepama-1)进行偶联,探索最佳标记条件,并测定标记物的稳定性和生物活性,研究直接标记和间接标记的Hepama-1在正常小鼠体内的生物学分布。结果表明,用N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)法125I标记ATE前体,在ATE用量为25～100μg、NCS用量为10～20μg、磷酸盐缓冲溶液(PBS)用量为10～20μL、反应时间为5 min时,标记率大于95%;S125IB和人IgG的偶联率最高可达75%,偶联产物稳定性、生物活性良好;与Hepama-1偶联率可达75%以上。生物分布的对比实验证明,1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯甘脲(Iodogen)直接标记的Hepama-1在甲状腺的放射性摄取率(脱碘显示)最高是S125IB间接标记的Hepama-1的87.9倍。这说明以ATE为前体的放射性碘间接标记蛋白质方法与传统的碘直接标记方法相比较,在解决体内严重脱碘问题上具有明显的优越性。     

抗CEA单克隆抗体碘标记方法研究

本文报道用几种碘标记方法(Iodosen、ChT、NBS、Bolton-Hunter试剂等)制备了~(125)I(~(131)I)-抗CEA单克隆抗体。产品通过Sephacex G-50(或-75)柱凝胶过滤纯化后,经纸层析和高压液相层析法鉴定,其放化纯度达到使用要求;用免疫放射双抗体夹心法测定,标记抗体能保持良好的免疫活性。同时我们对上述几种碘标方法进行比较研究,结果NBS法标记率最高,达98％,Iodogen法免疫活性保持最好,与CEA的净结合数达9960cpm(3ng CEA/250μl)。     

125I标记紫杉醇的方法

摘要:采用改良的氯胺T法,先用稳定的NaI与紫杉醇作用,再以放射性Na125I标记紫杉醇(paclitaxel),建立了125I标记紫杉醇的方法。采用纸层析及HPLC测定标记产物的标记率、纯化后放射化学纯度,采用纸层析测定标记产物在不同温度、储存溶剂条件下的体外稳定性,红外光谱鉴定产物。改良Ch-T法所得标记产物的标记率与硝酸氧化法和传统氯胺T法相比较。结果显示,采用改良氯胺T法标记率约63.1%±5.7%,放射化学纯度约96.3%±1.3%;标记物储存于4℃生理盐水或乙醇储存体系中24h、120h,放化纯度分别＞95%和约90%;在血浆中稳定性也较好,在4℃ 、37℃放置24h,放化纯度分别为92.3%±0.4%、89.5%±0.6% 。以上结果表明,改良氯胺T法标记紫杉醇方法简便,标记率高,标记产物稳定性较好,能够满足放射性示踪实验的要求。     

~(125)I-DNA的制备

~(125)I-DNA是个重要的标记化合物,在生物学、免疫学、病理学和某些疾病的临床诊断、愈后观察等方面都具有十分重要的意义。因此,寻找简便的方法制备~(125)I-DNA是急需解决的问题。最初,人们用一氯化碘法制备~(125)I-DNA,需把DNA转化成溶于有机溶剂的盐,从而导至DNA降解,影响了产品质量;继后采用N-典丁二酰亚胺法制备~(125)I-DNA,但~(125)I-DNA的比放射性很低。近期,人们采用生物标记法即~(125)I-脱氧尿嘧啶核苷(~(125)I-UdR)由大肠杆菌转化生成~(125)I-DNA。用这种方法制得的~(125)I-DNA具有较好的生物活性和纯度,其缺点是操作十分繁杂,~(125)I的利用率低,~(125)I-DNA的比放射性也很低。另外,还用三氯化铊法制备~(125)IDNA,虽然方法简便,~(125)I-DNA的比放射性也较高,但是三氯化铊不稳定,必须新鲜配制,使用十分不便。本文采用三氧化二铊制备~(125)I-DNA,克服了上述缺陷。~(125)I利用率达30～60％,~(125)I-DNA的比放射性达10μCi/μg,放射性杂质小于1％。方法十分简便,利于推广使用。     

脑功能显像剂HIPDM的氯胺T标记法

放射性碘标记的脑功能显像剂HIPDM对神经疾病的诊断和研究具有重要价值。 近年来,HIPDM的标记先后采用液相交换法和固相法,它们各自存在一些问题,促使我们研究用氯胺T法进行标记。本文分别研究了介质的pH值、HIPDM的浓度,氧化剂(氯胺T)、还原剂(Na_2S_2O_5)的投加量,反应液的总体积等对标记率的影响;确定了适宜的反应条     

聚乙二醇化重组人白细胞介素-6的放射性碘标记条件探讨

采用双相氯胺-T法对聚乙二醇化重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)进行碘化标记,比较了双相氯胺-T法碘化标记PEG-rhIL-6在不同反应条件下的标记效果.用三氯乙酸沉淀法和γ计数探测仪测定标记物的标记率、超滤离心法对标记物进行分离纯化、三氯乙酸沉淀法鉴定标记物的放化纯度、SDS-PAGE电泳分析标记蛋白断链损伤情况.结果表明,采用该方法标记PEG-rhIL-6,在100μL、pH值7.4的反应体系中,控制反应蛋白量为25μg、浓度20g/L的氧化剂15μL、室温反应时间40-50 min,可获得较高的标记率和放化纯度,比放射性适中,标记效果比较理想.     

^125I标记重组人血小板生成素大鼠静脉注射后药动学参数

本文目的是建立125I标记重组人血小板生成素(125I-rhTPO)的分析方法并研究大鼠单剂量静脉注射125I-rhTPO后的药动学特性。以Iodogen法制备I-rhTPO,HPLC法及SDS-PAGE法鉴定并测定放化纯度。125大鼠按2μg·kg-1剂量经尾静脉给药,于不同时相取血测放射性计数,并计算相应的血药浓度及药动学参数。制备的I-rhTPO符合药动学研究要求,标记前后化合物所在电泳位置一致,放化纯度>98%,4℃100h后125放化纯度仍大于95%。尾静脉注射2μg·kg-1,在大鼠体内可以二室模型拟合血药浓度的动态变化,T1/2(α)为(1.32±0.35)h,T1/2(为(24.55±1.07)h,AUC0β)→t为(134.26±22.99)ng·h·mL-1。Iodogen法制备125I-rhTPO,经SDS-PAGE检验,标记后的I-rhTPO与rhTPO的纯度、分子量相当,且I-rhTPO在体外稳定性较好。尾125125静脉注射2μg·kg-1,在大鼠体内可以二室模型拟合,半衰期约为25h。     

~(125)I-6-酮-前列腺素F_(1α)放射免疫分析试剂盒的研制

研制了~(125)I标记的PGI_2稳定的代谢产物6-酮-PGF_(1α)RIA试剂盒。以碳化二亚胺法将6-酮-PGF_(1α)与BSA联接免疫家兔制备抗血清,其效价为1:32000,平衡常数为6.26×10~9L/mol,与其它前列腺素的相对百分交叉反应<1%。用氯胺T法制备~(125)I-组织胺-6-酮-PGF_(1α)标记物,比放射性活度>14.8MBq/μg(400μCi/μg),最高结合率>80%,二月内无脱碘现象。放免测定按常规法,最低检出值为2,2pg/管,检出率为97.2～102.3%,精密 度为6.62%,批内和批间C.V.分别为7.17、8.41%,Cerceo“效点系统”评分为31分,属优良。直接测定健康成人血浆6-酮-PGF_(1α)浓度为22.9±6.3pg/mL。     

^125I标记氧化低密度脂蛋白抗体

采用Iodogen法对氧化低密度脂蛋白抗体（OxLDL—Ab）进行了^125I标记,并对标记条件进行了优化;采用PD-10柱对标记抗体进行分离纯化,并对^125I-OxLDL—Ab的体外稳定性和活性进行评价。结果表明,^125I-OxLDL-Ab标记率〉80％,放化纯度〉95％,比活度达73．3TBq／g;^125I-OxLDL-Ab分别在生理盐水、含2％BSA的生理盐水和人血清中4℃放置96h,放化纯度降低均小于5％;^125I-OxLDL—Ab在体外与OxLDL结合的Ka为10．6±1．3GL／mol。以上结果提示^125I-OxLDL-Ab体外稳定性好,与OxLDL结合活性高,^125I标记对其活性影响小,可以用于体外放免诊断试剂盒的研究。