臭味发酵食品中益生菌分离鉴定及功能性研究

目的分析臭味天然发酵食品中常见益生菌种类。方法本实验从臭味天然发酵食品中选取了4种常见益生菌株,并对耐酸耐胆盐能力、抗药性进行了研究。结果 4株益生菌株经16S rDNA分子鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和粪肠球菌(Enterococcus faecium)。嗜酸乳杆菌在pH 4的培养基培养16 h后,其相对OD_(600 nm)值为51.13%,具有较强的耐酸能力。植物乳杆菌在0.3 g/L和0.6 g/L胆盐质量浓度下培养16 h后,其相对OD_(600 nm)值分别为98.88%、66.22%,具有较强的耐胆盐能力。实验结果表明这2株菌的耐药性都低于鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌。结论植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌为耐酸耐胆盐低耐药性特点的益生菌株。     

黏豆包发酵液中乳酸菌分离鉴定及其益生性能

从农家自然发酵黏豆包谷物发酵液中分离乳酸菌,对菌株进行鉴定,并对益生性能进行研究。利用梯度稀释法从黏豆包中筛选获得6 株乳酸菌,经形态学分析并结合16S rRNA 序列分析分别为棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、短杆菌（Levilactobacillus brevis）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentans）、清酒乳杆菌（Latilactobacillus sakei）和曲氏乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。对菌株的益生性能评价结果表明：菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的抗逆性和耐酸性能较好,pH3.0 的环境中存活率为100%;耐盐测试中,菌株HSDF9（清酒乳杆菌）的耐盐效果最好,在盐含量10%的MRS 肉汤中仍可存活,活菌数可达8.93×106 CFU/mL;耐胆盐测试中,菌株HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,在0.3%胆盐浓度的MRS 肉汤培养基中培养3 h 之后的存活率为7.171%;耐人工胃液测试中,经过3 h 的模拟胃液培养之后,菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的存活率最高,达到82.91%;耐人工肠液测试中,经过6 h 的模拟肠液培养之后,HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,达到93.42%;抗生素敏感性试验中,菌株HSDF15（短杆菌）对四环素、羧苄西林、头孢氨苄、米诺环素、头孢唑啉、氨苄西林、头孢拉定等抗生素均敏感。     

发酵肉制品中益生性乳酸菌的快速筛选

利用一种快速的分离筛选法,即利用pH 2.5和1% 胆盐的MRS液体培养基,对自然发酵肉制品中耐高酸耐胆盐的乳杆菌进行富集,从中分离纯化得到77株乳杆菌.通过对分离菌株进行耐高酸(pH值2.5)、0.3%胆盐的生长的进一步测定,筛选出了21株耐酸及胆汁酸盐菌株,最后运用API 50CHL对筛选菌株进行了鉴定.这些菌株可活体摄入人体肠道,发挥其益生性,为益生性发酵剂开发奠定了基础.     

耐酸耐胆盐乳酸菌的鉴定及筛选

从自然发酵的酸奶中分离出2 株细菌,经16S rDNA分子鉴定为Lactobacillus plantarum SN1和Lactobacillusrhamnosus SN6,并对其生长曲线、产酸速率、耐酸耐胆盐能力进行了研究。L. plantarum SN1和L. rhamnosus SN6在2 h后进入对数期,16 h后达到稳定期,其OD600 nm值分别为8.47、7.43。L. plantarum SN1和L. rhamnosus SN6的产酸速率较快,pH值在8 h后就降到了4.2以下,48 h后降到3.3左右。L. plantarum SN1和L. rhamnosus SN6在pH 4的培养基培养16 h后,其相对OD600 nm值分别为49.29%、47.14%,具有较强的耐酸能力。L. plantarum SN1和L. rhamnosus SN6在0.3 g/L胆盐质量浓度下培养16 h后,相对OD600 nm值分别为57.7%、69.48%;在0.6 g/L胆盐质量浓度下的相对OD600 nm值分别为48.22%、29.56%,具有较强的耐胆盐能力。结果表明：L. plantarum SN1和L. rhamnosus SN6是生长性能好、产酸能力强、耐酸耐胆盐的益生菌株。     

乳酸菌的抗氧化活性和耐酸耐胆盐性能的研究

以清除DPPH自由基和还原能力为指标,对实验室保藏的25株乳酸菌的菌体和无细胞提取物进行体外抗氧化性研究;将抗氧化性强的10株乳酸菌,进行对模拟胃液酸度和肠道胆盐的耐受性研究,比较不同乳酸菌株的抗氧化和耐酸耐胆盐能力,为开发功能性乳酸菌食品提供理论依据。研究表明:不同属和同属的不同菌株的乳酸菌抗氧化能力和耐酸耐胆盐存在差异,且其抗氧化活性物质存在部位不同。比较发现干酪乳杆菌GL-2抗氧化性高且耐酸耐胆盐。干酪乳杆菌GL-2菌体浓度为109cfu/mL时,菌体和无细胞提取物DPPH自由基清除率分别为37.22%、42.78%,还原活性分别相当于104.84、107.10μmol/L L-半胱氨酸;pH=3.0的酸性缓冲溶液处理2h后存活率均达100%,在改良MRS培养基(胆盐为0.5%(W/V))处理4h存活率为0.35%。     

具有潜在降血糖作用乳酸菌的筛选

以商业菌株鼠李糖乳杆菌LGG为对照,从实验室保藏的乳酸菌中筛选出具有良好α-葡萄糖苷酶抑制率和胃肠道耐受能力的菌株。结果表明,36株乳酸菌中存在4株具有较高α-葡萄糖苷酶抑制率的植物乳杆菌YDA11、OD1、OD2和YDB24,其抑制率分别为28.37%、30.26%、30.26%和33.18%,且抑制率均与对照菌株LGG无显著性差异(p0.05),同时,菌株OD1和OD2对α-淀粉酶的抑制率分别为30.84%和35.17%,显著高于对照菌株LGG(p 0.05)。在耐酸实验中,在pH2.5的环境中胁迫8 h后,菌株YDB24与菌株OD2耐酸能力较好,存活率分别为96.01%与96.83%;在耐胆盐实验中,菌株OD2的耐受能力最强,在0.3%胆盐环境中胁迫后存活率为94.81%,且菌株OD2在胃液和小肠液中存活率分别为94.22%和79.99%。植物乳杆菌OD2为具有良好胃肠道耐受能力的潜在降血糖菌株。     

酸菜中降胆固醇功能植物乳杆菌的体外筛选

以分离自东北家庭自制酸菜中的9株植物乳杆菌为研究对象,采用邻苯二甲醛法筛选具有降胆固醇功能的乳杆菌,并通过耐酸、耐胆盐及抗生素敏感性实验,分析菌株的益生特性。结果表明,多株植物乳杆菌具有良好的降胆固醇功能,其中菌株S56的脱除胆固醇的量最高,达到22.40μg/mL。实验菌株均能耐受pH 3.0的酸度和10 g/L的牛胆盐。其中菌株S2-6、S2-5、S4-1和S56在pH 2.0的环境中能保持生长1 h,具有较强的耐酸性。     

酸汤中乳酸菌的鉴定及其耐酸、耐胆盐和抗氧化活性

采用16S rDNA基因序列对从酸汤中分离出的6株乳酸菌进行鉴定,并研究6株菌的耐酸和耐胆盐能力;同时以清除1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基为指标,探究其体外抗氧化活性。结果表明,6株菌均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),可耐受pH2.5和0.3%质量分数的胆盐,且活菌数保持在107 CFU/mL以上,存活率大于87%;菌体浓度为108 CFU/mL时,6株菌对DPPH自由基的清除率在23%~35%之间,对羟基自由基的清除率在6%~16%之间。6株植物乳杆菌中,JMST-1兼具良好的耐酸、耐胆盐和一定的抗氧化能力,在耐酸、耐胆盐试验中存活率达到91%,对DPPH自由基和羟基自由基的清除率分别达到28.60%和15.44%。     

抗氧化乳酸菌的筛选及其益生特性评价

为筛选出具有高抗氧化能力和优良益生特性的乳酸菌，该研究应用乳酸菌选择性培养基从传统发酵浆水中分离纯化得到120株乳酸菌，利用DPPH自由基清除率对120株乳酸菌进行初选，获得10株DPPH自由基清除率>30%的乳酸菌，通过羟自由基、超氧阴离子自由基清除率复选，获得5株羟自由基清除率>50%,超氧阴离子自由基清除率>40%的乳酸菌。经16S rDNA序列鉴定，5株乳酸菌中有2株为植物乳杆菌(Z12、Z13)、2株为副干酪乳杆菌(Z33、Z45)、1株为鼠李糖乳杆菌(Z41)。对5株乳酸菌的益生特性研究表明，Z12、Z45、Z33菌株在pH 2～3的酸性环境中存活率>50%,在胆盐质量分数为0.1%～0.5%环境下存活率>10%,自凝聚率>29%,表明这3株乳酸菌具有较强的耐酸、耐胆盐能力及较高的黏附特性，可用于抗氧化功能食品的开发。     

长双歧杆菌多因素连续驯化的研究

双歧杆菌因对外界环境的耐受性较差,限制了其规模化生产和实际应用。通过对长双歧杆菌进行连续的耐氧、耐酸以及耐胆盐的驯化,使长双歧杆菌对氧、酸以及胆盐的耐受性有了一定的提高,活菌数和产酸性能都有所提高。耐氧驯化时,通过逐渐增加培养基中的氧分压的方法进行;耐酸驯化时,通过逐渐降低培养基的初始pH的方法进行;耐胆盐驯化时,通过逐渐增加培养基初始胆盐含量的方法进行。实验结果表明,耐氧耐酸驯化后的菌株活菌数能达到9.4×108 cfu/mL,为初始菌的1.92倍;耐胆盐驯化后的菌株在胆盐浓度为0.3%时培养也能保持一定的活菌数,而初始菌株不能存活。     

母乳来源益生菌的筛选及潜在益生特性研究

益生菌能够维护肠道健康,为宿主提供多种健康益处。为了筛选出具有益生特性的优良菌株,该研究从母乳中分离筛选出22株乳杆菌和3株双歧杆菌。通过耐酸耐胆盐能力测试,筛选出7株菌株,并对其进行抗生素耐药性和致病菌抑制能力的测定。结果显示,除菌株M33外其余菌株都有较好的耐酸能力;鼠李糖乳杆菌M53和M60,副干酪乳杆菌M71,植物乳杆菌M113和3株双歧杆菌耐胆盐能力较好,其中M53和短双歧杆菌grx05耐胆盐能力较高,达到45.72%和75.54%;菌株M71和grx05对8种抗生素敏感,菌株M53,M118和S18对6种抗生素敏感,具有较高的安全性;菌株M53对3株革兰氏阳性菌和2株革兰氏阴性菌有明显的抑制效果,菌株grx05对3株革兰氏阳性菌和1株革兰氏阴性菌有明显的抑制效果。综合分析,鼠李糖乳杆菌M53和短双歧杆菌grx05有希望作为具有益生特性的菌株应用到发酵食品或益生菌制剂开发。     

两歧双歧杆菌耐氧耐酸耐胆盐优良菌株的选育

本实验通过反复驯化的培养方法将两歧双歧杆菌驯化成耐氧耐酸耐胆盐的优良菌株。在耐氧驯化时,通过增加培养基中的氧气分压的方法进行驯化;在耐酸驯化的过程中,通过降低培养基的初始pH值的方法进行。实验结果表明,在牛乳培养基中耐氧驯化后的双歧杆菌的增殖比例为42000%,而原始菌的增殖比例仅为8333%,且前者的凝乳时间较后者短,为后者的2/3;再经过耐酸驯化的菌株在低pH值条件下的产酸性能也大为提高,且耐酸性明显优于未经驯化的菌株;最后再经过胆盐驯化的菌株在胆盐浓度为0.5%时培养后也有较高的活菌数,说明其对胆盐的忍耐力明显增强。     

果蔬发酵乳酸菌的筛选、鉴定及发酵性能分析

采用MRS初筛培养基(pH 2.0)和复筛培养基(10%氯化钠、30%葡萄糖)从沂源山地苹果产区自然发酵苹果原浆样品中分离筛选出2株耐酸、耐盐、耐高糖乳酸菌,经生理生化及分子生物学鉴定分别为植物乳杆菌S3-10和干酪乳杆菌R10。通过测定菌体干质量、活菌数、pH值和酸度等指标对2株乳酸菌在MRS培养基和果蔬原浆中的发酵性能进行分析,发现2株菌具有生长繁殖旺盛、产酸速率快的特性,其中植物乳杆菌S3-10生长量和产酸量显著高于干酪乳杆菌R10。菌株S3-10和R10的果蔬发酵性能优异,在发酵果蔬汁、开发功能益生产品方面有广阔应用前景。     

人源降血脂乳酸菌的筛选及其功能性研究

从巴马长寿人群肠道中分离得到51株乳酸菌,通过体外试验筛选出16株降胆固醇及甘油三酯能力较强的菌株,降解率均分别大于30.00%和5.00%,其中Lr10的胆固醇及甘油三酯降解率显著高于其他菌株(P0.05),分别为61.90%和37.22%;通过模拟人工胃液及胆盐耐受试验发现,16株菌株中Lr10的耐酸耐胆盐能力较强,其在pH为3.0的人工胃液及胆盐浓度(w/v)为0.0%、0.1%、0.3%及0.5%的MRS培养基中存活率分别为71.43%、66.37%、64.55%及19.12%;经API试剂条及16S rDNA测序将Lr10鉴定为鼠李糖乳杆菌;将Lr10制成脱脂乳悬浮液及脱脂发酵乳进行体内降血脂试验,结果表明,鼠李糖乳杆菌Lr10及其脱脂发酵乳在体内具有明显的降血脂效果。     

浓香型白酒地域性及窖泥微生物研究进展

为了筛选优良果蔬发酵用益生菌,从益生菌剂及土法发酵的酵素液体中分离并鉴定了9株益生菌,并对其耐酸、耐胆盐能力进行分析。经初筛选出4株性能优良的益生菌株,并对它们进行了产酶、产酸、自由基清除等益生特性的研究。结果表明：9株益生菌均具有一定的耐酸耐胆盐能力,其中菌株B1的耐酸能力最强,在pH为1.0条件下的存活率为（93.69±2.25）%;菌株B8的耐胆盐能力最强,在胆盐浓度1.5%的条件下的存活率为（81.74±1.52）%。综合耐酸耐胆盐能力及益生性能,最终获得了具有产淀粉酶、DPPH自由基清除（91.46%）及产酸（13.14 g/L）能力的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）B6,可作为优良菌株进行研究与开发。     

乳杆菌在胆盐MRS培养基中的传代稳定性

该实验探究提高乳杆菌传代稳定性的方法以提高乳杆菌在胃肠道的定植能力,为工业生产提供依据。该研究以植物乳杆菌M547、M621、M748、戊型乳杆菌M750为研究对象,研究胆盐环境对菌株生长的影响,利用生长曲线仪确定合适胆盐培养菌株的浓度,对比胆盐培养和MRS培养的菌株在耐胆盐能力、产酸能力、耐酸能力的表现。0.04%的胆盐培养后,菌株在传代过程中对于0.075%胆盐的耐受存活率提升11%~18%左右,0.1%胆盐的耐受存活率提升20%~34%。胆盐培养对于产酸能力,耐酸能力及稳定性的提高没有明显作用,但对菌株的耐胆盐能力及传代稳定性有提高作用,可为研究改善益生菌的益生特性的方法提供理论支持。     

副干酪乳杆菌NCU622耐酸耐胆盐及其黏附性能

通过体外实验研究副干酪乳杆菌NCU622的耐酸、耐胆盐性能;采用体外细胞模型（人体结肠腺癌细胞系Caco-2细胞）测定副干酪乳杆菌NCU622的黏附性能,考察了菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能的影响,并对该菌株进行细胞毒性检测。结果表明：副干酪乳杆菌NCU622在pH 2.5的MRS液体培养基中作用3 h,存活率为98.21%;在胆盐质量浓度为0.3、0.5 g/100 mL的MRS液体培养基中作用4 h,存活率分别为95.14%和85.07%。副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附能力较强,为（21.19±0.94）CFU/Caco-2细胞,且菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能均有影响。副干酪乳杆菌NCU622与Caco-2单层细胞共培养24 h后,对其无裂解作用。这表明副干酪乳杆菌NCU622具有良好的耐酸耐胆盐能力及较强的黏附性能,且对Caco-2细胞无裂解作用,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品的菌种要求。     

耐低温高产氨肽酶乳酸菌株的筛选及氨肽酶提取方法的优化

以吉林长白山区特色发酵酱菜为原材料，筛选获得160株乳酸菌，通过检测菌株的耐低温能力、产酸能力、耐酸耐胆盐能力、菌株自溶度等指标筛选出4株具有优良性能的耐低温乳酸菌，其中3株具有较强的蛋白水解能力。利用溶菌酶和高速离心破碎菌体，提取粗酶液，以Glu-ρ-NA为底物筛选出菌株106为高产氨肽酶菌株，酶活为14.56 U/mL。经形态学鉴定和16S rDNA分析，确定菌株106为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌106。本实验筛选到的植物乳杆菌106不但具有产酸、耐酸耐胆盐等特性，还具有耐低温、高产氨肽酶的特性，本研究结果为缩短切达干酪快速成熟时间和降低切达干酪成熟过程中的苦味提供了优良菌株来源，具有非常重要的应用价值。     

鼠李糖乳杆菌耐酸及胆盐能力研究

本实验对来源于婴儿粪便鼠李糖乳杆菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验。结果获得鼠李糖乳杆菌菌株B在pH1.8条件下,维持2h,活菌数达到107CFU/ml以上;在pH值为2.2以上的培养基中生长良好,而且随着时间的延长菌株的数量增加。在胆盐浓度在0.5%以下的MRS-broth培养基中鼠李糖乳杆菌B菌株维持4h,活菌数均达到108CFU/ml以上,而且随着时间的延长活菌数均有所增加。模拟胃液和模拟肠液实验结果表明该菌株能够有效通过胃环境,并能在肠道中繁殖。结果可见,鼠李糖乳杆菌B具有较强的酸的胆盐的耐受能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求。     

双歧杆菌优良菌株的筛选及耐消化道逆环境性能

以改良MRS培养基作为选择性培养基,初筛得75 株严格厌氧且菌落呈蓝色的双歧杆菌疑似菌株。在pH3.0和含3.0 mg/mL胆盐的改良MRS培养基中培养20 h,得到吸光度较高的11 株,并选出耐酸耐胆盐较好的NCU712、NCU701、NCU708进行生理生化鉴定,NCU712基本符合长双歧杆菌的特征。经16S rDNA分子生物学鉴定菌株NCU712为长双歧杆菌。并在模拟人体消化道逆环境下对菌株NCU712的耐受力进行初步研究。结果表明：在pH 3.5以上的人工胃液中,NCU712活菌数随着作用时间的延长而略有上升;pH 2.5时菌株NCU712的D值为30.42 min;pH 3.0时D值为92.97 min,作用2.5 h活菌数保持在107 CFU/mL以上;人工肠液作用4.0 h后,活菌数保持在108 CFU/mL以上;3.0 mg/mL胆盐中培养24 h后,活菌数下降1（lg（CFU/mL））。说明NCU712对人体胃肠道耐受性良好。