N-组氨酸壳聚糖多孔支架对牛血清白蛋白的吸附性能

通过改变组氨酸/壳聚糖的配比及壳聚糖的相对分子质量合成了6种N-组氨酸壳聚糖(NHCS)多孔支架,考察其在模拟体液中吸附牛血清白蛋白(BSA)的能力,用紫外-可见分光光度法测定NHCS不同温度的吸附等温线和不同起始浓度下的吸附动力学曲线等。结果表明,在37.0℃、BSA的初始浓度为2.5 mg/mL时,壳聚糖的相对分子质量为50×103、组氨酸/壳聚糖的摩尔比为3∶1制得的50kD-NHCS-3多孔支架吸附BSA效果最好,吸附容量(Qe)为820.90 mg/g;吸附遵循Langmuir吸附等温式和准一级动力学方程,且是一个自发、熵增、吸热的物理吸附过程。50kD-NHCS-3多孔支架可以重复使用,有望用于BSA或其他蛋白的分离纯化。     

胞内海藻糖对红细胞冷冻干燥保存效果的影响

冷冻干燥是长期保存人体红细胞最理想的方法之一。利用孵育的方法将非渗透性保护剂海藻糖载人人体红细胞中,以含海藻糖的保护剂对红细胞进行冻干保存实验,研究胞内海藻糖浓度对红细胞冻干保存的影响。在37℃下,以不同浓度海藻糖溶液（400mM,600mM,800mM,1000mM）对红细胞孵育7h。结果表明,随胞外海藻糖浓度的增加,胞内海藻糖的浓度相应升高,试验中海藻糖浓度最高达到35mmol／L。对新鲜与孵育后红细胞在相同条件下进行冻干实验,结果表明,孵育后的红细胞冻干回收率随胞内海藻糖浓度增加而增加,表明胞内海藻糖在冻干过程中对红细胞有保护作用。     

人肝癌细胞Hep-G2的低温保存研究

在细胞的低温保存中,低温保护剂的种类与浓度对复温后的存活率有着重要影响。本文以人肝癌细胞Hep-G2为研究对象,利用慢速冷冻法,筛选最佳的冻存液配方。通过配比不同浓度的甘油、Me2SO以及在Me2SO中添加一定浓度的蔗糖、海藻糖,一周后复温细胞,对台盼蓝染色存活率、MTT存活率以及24 h贴壁率三种检测结果进行比较分析,结果表明:以Me2SO作为低温保护剂时,冻存液浓度为10%(v/v)的Me2SO复温后细胞的三种检测指标最优;以甘油作为低温保护剂时,冻存液浓度为20%(v/v)的甘油复温后细胞的三种检测指标最优;再将以上分别得到的最佳浓度(即体积浓度20%甘油、10%Me2SO)与5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L蔗糖、5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖这四种低温保护剂进行冻存与比较,5%Me2SO(v/v)+0.3mol/L海藻糖检测指标高于其他实验组,并且差异显著(P0.05)。最终得到5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖为慢速冷冻保存Hep-G2细胞的最优保护剂配方。     

壳聚糖与牛血清白蛋白分子印迹聚合物的制备与表征

利用壳聚糖为功能单体,在模板分子牛血清白蛋白存在下,采用滴加成球法制备出对牛血清白蛋白(BSA)具有特异识别性能的分子印迹聚合物,并用原子力显微镜(AFM)及红外光谱进行了表征。实验结果表明,利用壳聚糖制备的牛血清白蛋白分子印迹聚合物对牛血清白蛋白具有特异识别功能,显示出明显的印迹效果。这种特异分子印迹介质的制备,为分离提纯特种结合蛋白提供了一种优良方法。     

色氨酸在自制牛血清白蛋白手性柱上的拆分

利用三氯聚氰活化的氨丙基硅胶与牛血清白蛋白反应,快速而经济地制得牛血清白蛋白手性固定相。在反相模式下,将该手性固定相用于色氨酸的拆分,系统探讨了流动相pH值、柱温、有机修饰剂的种类及含量等对手性拆分的影响。色氨酸在自制牛血清白蛋白手性柱上得到了理想的拆分,分离因子可达4.33。     

交联玉米醇溶蛋白纳米纤维膜对牛血清白蛋白的吸附性能研究

将Fe3+固载在交联玉米醇溶蛋白(Zein)纳米纤维膜上,制备了亲和吸附材料(Zein-Fe3+),并研究了其对牛血清白蛋白(BSA)的吸附特性。利用扫描电子显微镜(SEM)观察了交联Zein纳米纤维膜的结构形貌,采用傅里叶变换衰减全反射红外光谱仪(ATR-FTIR)和X射线能谱仪(EDAX)分析纳米纤维与金属离子的配合机理,利用考马斯亮蓝染色法检测膜对蛋白质的吸附量。结果发现Fe3+螯合交联Zein纳米纤维膜对牛血清白蛋白具有较高的吸附量,表明其在蛋白质分离纯化领域的潜在应用价值。     

钛表面自组装牛血清白蛋白以控制血小板粘附行为的研究

将牛血清白蛋白通过自组装方法组装到钛表面,以改善其血液相容性.首先,用氢氧化钠活化钛,得到有活性羟基且带负电荷的多孔表面,然后浸入带正电荷的聚赖氨酸溶液,最后浸入带负电荷的牛血清白蛋白溶液.通过扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)观察自组装前后表面形貌变化,通过傅立叶红外漫反射(FTIR)检测各步处理层表面基团变化,通过视频接触角观察各步处理后钛表面接触角变化,通过体外血小板粘附实验评价自组装前后表面血液相容性变化.实验结果表明,牛血清白蛋白组装到钛表面后,血小板的粘附行为得到有效控制,钛表面的血液相容性显著改善.     

荧光光谱法研究头孢孟多脂与牛血清白蛋白的相互作用

模拟生理条件下,用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究头孢孟多酯和牛血清白蛋白(BSA)结合反应的特征。研究表明:头孢孟多酯与BSA形成复合物,从而猝灭BSA的内源性荧光,该过程为静态猝灭过程。根据SternVolmer方程得出不同温度下结合位点数n和结合常数Ka;结合位点位于BSA的亚结构IIA中。通过计算相应的热力学参数,确定头孢孟多酯与BSA之间的作用力主要为静电作用力。利用同步荧光光谱探讨了头孢孟多酯与BSA作用前后白蛋白的构型变化。Hill系数nH1,表明头孢孟多酯有弱的负协同作用。此研究不仅对于揭示体内药物动力学问题和指导临床合理用药具有一定意义,而且对药物分子设计及新药开发等也具有重要指导意义。     

钠基与钙基蒙脱石插层牛血清白蛋白的比较研究

蒙脱石负载蛋白质的研究为纳米复合材料开发、药物的负载与缓释等方面研究奠定基础.为了进一步分析蒙脱石不同结构对蛋白质插层蒙脱石的影响,作者根据离子交换的原理,研究了在不同pH值条件下,牛血清白蛋白(BSA)插层钠、钙基蒙脱石的插层效果.研究发现,在pH值低于等电点时,钙基蒙脱石(Ca-MMT)与钠基蒙脱石(Na-MMT)插层效果差异明显;相同pH值下,Na-MMT插入的蛋白质比例高.FT-IR和UV-vis分析都显示蒙脱石颗粒的存在改变了蛋白质的结构;UV-vis分析显示,由于蒙脱石表面助色基作用,共轭效应加强,上清液中的蛋白质214nm吸收峰,产生了明显的红移;氢键等的破坏则导致蛋白质部分螺旋结构消失而使蒙脱石层间缓释出来的蛋白质吸收峰发生明显的蓝移.Ca-MMT与Na-MMT对牛血清白蛋白结构变化的作用程度存在差别.     

分子量为3000的壳聚糖与牛血清白蛋白相互作用的研究

在模拟人体生理条件下,利用荧光光谱、圆二色谱、紫外-可见吸收光谱法和三维荧光法研究了3 000分子量的壳聚糖(CS)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,CS对BSA的紫外吸收光谱具有增强作用,而对荧光光谱具有较强的荧光猝灭作用且峰位明显蓝移8~10 nm。用Stern-Volmer方程分别对实验数据进行分析,得出结论,CS对BSA的荧光猝灭作用是属于静态荧光猝灭;与其反应生成了新的复合物,发生了分子内的非辐射能量转移;并求得相互作用过程的结合常数KA(Kb)和热力学参数(ΔG、ΔH、ΔS),确定了它们之间的主要作用力是静电作用力,但疏水作用也不可忽略。圆二色谱、同步荧光光谱和三维荧光光谱法表明了CS对牛血清白蛋白的构象和所处的微环境发生了一定程度的变化。     

低温保存对Hep-G2细胞凋亡的影响

样本质量是体现生物样本库价值的关键,但是低温保存可能导致细胞凋亡及基因表达量的变化,影响样本质量。本文采用流式细胞术与实时荧光定量PCR(qPCR)的方法,研究了Hep-G2细胞在不同条件下冻存后凋亡及相关基因表达量。结果表明:低温保存影响Hep-G2细胞的成活率、凋亡情况及某些凋亡基因表达量。无论冻存过程中是否添加低温保护剂,低温保存都会对细胞的凋亡相关基因表达带来不同程度的影响。不添加保护剂冻存会导致细胞死亡,添加10%DMSO冻存会导致细胞凋亡,复苏培养24 h后细胞的成活率、凋亡情况与相关基因表达量基本与对照组水平一致。     

改性柑橘皮渣对牛血清白蛋白吸附行为的研究

目的 采用柑橘皮渣制备改性吸附剂,使作为农业废弃物的柑橘皮渣成为环境友好型材料.方法 以柑橘皮渣、壳聚糖为材料,魔芋胶作为絮凝剂,span 80作为乳化剂,液体石蜡为分散剂制备柑橘皮渣改性吸附剂,将牛血清白蛋白作为模拟废水中的蛋白,研究柑橘皮渣改性吸附剂对牛血清白蛋白的吸附效果,探究吸附时间、温度、pH值对吸附效果的影响,通过建立吸附模型,对吸附过程进行分析.结果 最佳吸附温度为40℃,最佳吸附时间为2 h,在牛血清白蛋白初始质量浓度为1 mg/mL时,最大吸附量为293.15 mg/g.结论 将作为农业废弃物的柑橘皮渣制备成改性吸附剂,可以提高农产品加工贮藏过程中废弃物的利用率.     

离子液体双水相中PB与BSA的作用研究

运用荧光光谱,研究了在离子液体双水相体系中吡罗红B(PB)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,在离子液相中PB对BSA产生了荧光猝灭作用,且属于静态猝灭过程。计算得到在298K和308K下的结合常数分别为5.80×105Lomol-1和4.42×105Lomol-1,结合位点数分别为1.18和1.17。热力学参数表明PB与BSA之间的相互作用为静电作用力。用同步荧光法探讨了PB对BSA构象的影响。     

Quantification of Uptake and Localization of Bovine Serum Albumin‐Stabilized Single‐Wall Carbon Nanotubes in Different Human Cell Types

Single‐wall carbon nanotubes (SWCNTs) possess many unique, inherent properties that make them attractive materials for application in medical and biological technologies. Development of concentrated SWCNT dispersions of isolated nanotubes that retain SWCNTs' inherent properties with minimal negative cellular effects is essential to fully realize the potential of SWCNTs in biotechnology. It is shown that bovine serum albumin (BSA), a common and well‐characterized model blood serum protein, can individually disperse SWCNTs at concentrations of up to 0.3 mg mL^?1 while retaining SWCNTs' optical properties. Uptake into human mesenchymal stem cells (hMSC) and HeLa cells is quantified, revealing strikingly high concentrations of 86 ± 33 × 10⁶ and 21 ± 13 × 10⁶ SWCNTs per cell, respectively, without any apparent acute deleterious cellular effects. Through high‐resolution confocal Raman spectroscopy and imaging, it is established that SWCNT–BSAs are preferentially localized intracellularly, especially in the cytoplasm of both hMSCs and HeLa cells. The uptake and localization results demonstrate the efficacy of BSA as a biocompatible dispersant and a mediator of bioactivity. BSA is widely available and inexpensive, which make these concentrated, highly‐dispersed, noncovalently modified SWCNT–BSAs suitable for the development of SWCNT‐based biotechnologies.     

基于牛血清白蛋白LB膜模板仿生合成碱式硝酸锌薄膜

结合仿生矿化的方法,通过牛血清白蛋白Langmuir膜板矢量控制和氨水动态控制相结合,合成了大面积连续致密具有(200)晶面取向的多孔Zn_5(OH)_8(NO_3)_2薄膜。经扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、X射线衍射仪(XRD)及X射线光电子能谱分析仪(XPS)等测量手段,分析了Zn_5(OH)_8(NO_3)_2薄膜样品的表面形貌和结晶性能,并结合生物矿化原理推测了双重模板的控制机制。本文提供了一种全新的在室温下制备具有良好结晶度且适于大面积生产薄膜的方法。     

PDMS-玻璃微流控芯片上附着态HepG2细胞低温保存条件研究

微流控芯片上细胞样本的低温保存能够显著缩短芯片上细胞实验周期、降低实验成本,有助于芯片上细胞实验的广泛应用。本文对PDMS-玻璃微流控芯片上附着态HepG2细胞的低温保存条件进行了研究,包括降温速率、低温保护剂、低温存储时间及存储温度,确定了芯片上附着态HepG2细胞的低温保存方案。结果表明:采用不同的冷却环境、冷却介质,芯片微通道内能够实现0.36～35.12℃/min的降温速率;芯片上附着态HepG2细胞低温保存存在最优降温速率0.5～1.5℃/min;-20℃或液氮表面上方40 cm处冷却环境与-80℃冷却环境组合冻存能够显著提高芯片上冻存7 d的HepG2细胞存活率;体积浓度为20%的DMSO与0.1 mol/L海藻糖联合能够显著提高芯片上冻存HepG2细胞活性。经过上述冻存条件优化后,芯片上附着态HepG2细胞冻存7 d活性超过90%。     

LEA蛋白特征片段及海藻糖对热敏性蛋白药物胰岛素冻干的协同保护研究

热敏性蛋白药物胰岛素的热稳定性较差,极易受制备方式和保存条件等影响而失活。故本研究分别利用高效液相色谱（HPLC）测定冻干样品中胰岛素的效价和差示扫描量热仪（DSC）测定冻干样品的玻璃化转变温度等重要参数,来研究胚胎发育晚期富集蛋白特征片段（LEA-motif, LEAM）和海藻糖冻干保护剂对胰岛素冻干保护效果的影响。冻干实验表明,两种保护剂均对胰岛素的活性具有保护效果,且LEAM的活性保护效果优于海藻糖。在效价和热稳定性方面,LEAM保护的胰岛素冻干品均高于海藻糖保护的胰岛素冻干样品。更为重要的是,两种保护剂协同保护时,少量海藻糖对于LEAM的保护特性具有增效作用。在冻干过程中,可有效提升药物玻璃态的稳定性,防止热致变性失活。由此可见,这种LEAM和海藻糖保护剂复合保护方法有望也可以应用在热敏性蛋白药物冻干粉针制备过程以保护药物活性。     

A Study on the Preparation and Anti-Tumor Efficacy of Bovine Serum Albumin Nanospheres Containing 5-Fluorouracil

ABSTRACT

The therapeutic profile of many anti-cancer drugs has been improved by their modified distribution through a colloidal carrier system. Hence, bovine serum albumin nanospheres containing 5-fluorouracil were prepared by pH-coacervation methods. To select the most suitable cryoprotector for the formulated nanosphere system, a study on the effect of cryoprotectors in the prevention of particle agglomeration was done. Using glucose and mannitol at various concentrations during freeze drying, glucose at a concentration of 5% was observed to be relatively more effective in the prevention of particle agglomeration than the other cryoprotectors. The carrier capacity was determined through the drug-to-albumin ratio. The particle size of all the drug-loaded batches was analyzed before and after freeze drying. The batch of nanospheres with uniform size distribution, and highest drug loading, was used for other subsequent studies. The effect of surfactant in drug loading was estimated through various concentrations of sodium lauryl sulfate, and it was observed that the surfactant has no influence on drug loading at the selected concentrations. The batch of nanospheres with highest drug loading was evaluated for its in-vitro release, and the drug release was found to be in a bi-phasic pattern. To evaluate the efficacy of 5-fluorouracil-loaded nanospheres against cancer cells, an in vitro cytotoxicity study was carried out using HEp-2 cell lines. The nanosphere-bound drug was observed to produce a better cytotoxic effect than the free drug. The anti-tumor efficacy of drug-loaded nanosphere was investigated in DLA tumor-induced mice models, and the percentage tumor inhibition was relatively higher in animals treated with nanosphere-bound drug than with free drug.     

[Bmim]BF叔水相中苋菜红与牛血清白蛋白作用研究

在离子液体四氟硼酸1-丁基-3-甲基咪唑（[Bmim]BF4）和NaH2PO4形成的双水相体系中,研究了离子液相中食用色素苋菜红（AT）与牛血清白蛋白（BSA）复合物的光谱行为。实验了离子液体用量、盐的浓度、溶液酸度、反应时间及共存物质对体系测定的影响。结果表明,在pH6．0的条件下,苋菜红牛血清白蛋白（BSA）复合物的最大吸收波长在540nm处,比单纯AT红移15nm,复合物表观摩尔吸光系数为2．81x10^4L·mol^-1·cm^-1,用摩尔比法求得最大结合数为150。应用加入无机离子及不同类型表面活性剂方法,初步探讨了食用色素苋菜红与牛血清白蛋白之间的作用机理。