胃蛋白酶固定化条件的研究

采用壳聚糖吸附和戊二醛交联的方法,将胃蛋白酶固定于壳聚糖上.探讨了温度、交联剂用量、固定化时间以及pH值等条件对固定化效果的影响,并对固定化酶的理化性质进行了研究.确定了胃蛋白酶固定化的最佳条件:pH值3.5;戊二醛交联时间10 h;戊二醛含量5%;对酪蛋白的操作半衰期为50 d以上.     

戊二醛交联壳聚糖球固定化脲酶的制备

在微波辐射下以戊二醛为交联剂,将壳聚糖球交联引入醛基,然后将交联的壳聚糖球浸泡在脲酶溶液中24 h,制备了壳聚糖球固定化脲酶,其酶比活为10.83 U.g-1载体。最优固定化条件是戊二醛的体积分数φ(GA)1%,脲酶与湿壳聚糖球的质量比m(E)∶m(CB)为0.01,固定化时间为24 h,固定化所用溶液的pH值为6.5。研究表明,固定化脲酶具有良好的重复使用性和贮存稳定性。戊二醛交联壳聚糖球可作为酶固定化的优良载体。     

酶解大豆粉蛋白条件优化研究

从底物浓度、pH值、酶解温度、加酶量、酶解促进剂和酶解时间等方面研究了碱性蛋白酶Alcalase和木瓜蛋白酶复合对全脂大豆粉酶解的影响,并运用单因素和正交试验设计优化酶解条件.结果表明,底物体积分数4.5%、pH值8.5、温度60℃、复合酶加酶量（碱性蛋白酶Alcalase与木瓜蛋白酶活力之比为2∶1）2 640 U/g,添加5 mmol/L Mn2＋酶解180 min效果较好,水解度达到17.8%.     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶的研究

以纳米级磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂固定化脂肪酶,对固定化脂肪酶条件进行优化,同时对固定化脂肪酶的理化性质、活性回收率、热稳定性和储存稳定性进行研究.结果表明,固定化脂肪酶的最佳时间为7 h,最佳pH为8,最佳温度为50 ℃,最佳酶加量为每100 mg磁性微球加酶10 mg.和自由酶相比,脂肪酶被磁性壳聚糖固定...     

纸纤维固定木瓜蛋白酶的研究及应用

利用纸纤维为载体,制备高活性的固定化木瓜蛋白酶并应用于抗HCG抗体的水解.利用戊二醛交联法,制备固定化木瓜蛋白酶,并通过一系列优化,得到最佳固定化条件,包括pH﹑给酶量﹑温度﹑戊二醛体积分数,将制备的固定化木瓜蛋白酶应用于抗HCG抗体水解并制备F(ab′)2片段.研究表明:反应温度为40℃时,固定化酶在pH 5.0,0.01mol/L的醋酸缓冲液条件下,给酶量为46mg/g载体,戊二醛体积分数为0.01%时,固定化酶的酶活达到最高19 250U/g,相对于优化前1 940U/g提高了近10倍,成功应用于抗HCG抗体水解制备F(ab′)2片段:经SDS-PAGE电泳检测,F(ab′)2片段达到电泳纯.ELISA反应检测表明:片段仍保留较高的活性,效价为1∶12 000.     

交联壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

选择了具有生物活性的壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂来固定化α-淀粉酶,探索了固定化的最佳条件.结果表明:最佳固载量为每克壳聚糖.50mgα-淀粉酶,交联剂戊二醛浓度为15%,处理温度均为室温,处理时间以5h为宜,固定化pH值以7较好.交联壳聚糖用于固定α-淀粉酶行之有效,且效率较高,其酶活回收率可达82.2%.     

胃蛋白酶固定化条件的研究

采用壳聚糖吸附和戊二醛交联的方法，将胃蛋白酶固定于壳聚糖上．探讨了温度、交联剂用量、固定化时间以及pH值等条件对固定化效果的影响，并对固定化酶的理化性质进行了研究．确定了胃蛋白酶固定化的最佳条件：pH值3．5；戊二醛交联时间10h；戊二醛含量5％；对酪蛋白的操作半衰期为50d以上．     

壳聚糖凝胶的制备及应用研究

以壳聚糖为原料,将其溶于稀酸,确定了碱性介质固化,洗涤至中性,再在中性介质中交联的工艺路线.对壳聚糖的脱乙酰度和质量浓度、交联剂戊二醛的用量、交联时间,以及反应介质等工艺条件进行了优化,最适工艺条件为:壳聚糖的脱乙酰度为90.24%,质量分数为2.0%;交联剂戊二醛质量分数为0.6%;交联时间为6 h;以水为反应介质.在此工艺条件下制备的凝胶在pH=1.5的介质中稳定.应用试验表明,对蛋白质有良好的分离效果,中性蛋白酶经一次分离,可得到四个组分,总活力保持在90%以上.牛血清蛋白经凝胶可分离出两个组分,蛋白回收率达70%以上.     

吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

海藻酸钠固定化胰蛋白酶的研究

研究了以海藻酸钠为载体固定化胰蛋白酶的条件,并考察了固定化酶的最适pH、最适温度、储存时间及反复利用稳定性。结果表明:最适固定化条件为CaC12质量分数为3.0%,海藻酸钠质量分数为3.0%,酶液量与海藻酸钠体积比为1∶2,固定化时间为3.0 h;固定化胰蛋白酶最适pH为9.0,最适温度为60℃,较游离酶分别提高1.0和10℃;4℃下保存30 d,活性保留96%以上;连续反应6次,活性保留52%。