雅致放射毛霉3.2778羧肽酶性质及其活性中心结构的研究

固态发酵雅致放射毛霉菌株(Actinomucor elegans)3.2778得到羧肽酶粗酶液,以N-苄氧羰酰基-L-苯丙胺酰-L-亮氨酸(N-CBZ-Phe-Leu)为底物,采用镉-茚三酮法测定羧肽酶水解产物。结果表明:雅致放射毛霉3.2778羧肽酶最适作用pH值范围为6.5～7.2,最适作用温度范围在40℃～45℃,最适作用温度为40℃,在30℃～40℃具有良好的温度稳定性。0.99mmol/L金属离子中,Mg2+对羧肽酶活力表现出显著的促进作用,酶活提高37%;而Cu2+、Fe2+、Fe3+、Hg2+可以抑制绝大部分酶活,残留的相对酶活力约10%。9.1mmol/L金属蛋白酶抑制剂1,10-邻菲啰啉(OP)和丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)和二异丙基磷酰氟(DFP)均可以完全抑制该酶活性,同时,对巯基有修饰作用的蛋白酶抑制剂PCMB、DTT、碘乙酸和β-巯基乙醇对羧肽酶有强烈的抑制作用。因此,推断该酶可能是一种丝氨酸羧肽酶,其活性中心有丝氨酸残基和二硫键结构,酶活受Mg2+激活。     

纤维素酶水解壳聚糖的特性研究

利用粘度法、还原端基法及TLC法,探讨了温度、pH、反应时间、底物的脱乙酰度和金属离子等对纤维素酶水解壳聚糖的影响。结果表明,纤维素酶能有效降解壳聚糖,其作用的最适温度为60℃,最适pH为5.2,酶水解反应米氏常数为Km=10mg/mL;Mn2+、Mg2+、Ca2+对该酶有较强的激活作用,Ag+、Cu2+、Hg+、葡萄糖等是该酶的抑制剂。该酶稳定性较强,在pH3～7的范围内均很稳定,60℃作用1h相对残余酶活为60.8%。其最适作用的底物为脱乙酰度（DD）90%的壳聚糖,根据水解产物分析判断其以内切酶为主,既能水解GlcN-GlcN键,又能水解GlcNAc-GlcN键。      

牦牛肉组织蛋白酶L酶学特性的研究

以牦牛背最长肌为原料,从中提取组织蛋白酶L并对其酶学性质进行研究。结果表明,该酶水解专一性荧光底物Z-Phe-Arg-AMC的最适反应pH和温度分别为5.5和40℃,在pH5.0～6.0、40～50℃条件下酶活稳定性最高。最适酶促反应时间和底物浓度分别为30min和25μmol/L。金属离子Ca2+、Cu2+、Mn2+、K+、Fe3+、Fe2+、Zn2+均能抑制酶活。EDTA和EGTA对酶有一定的抑制作用,L-Cys和β-ME对酶起激活作用。      

一株Kluyveromyces lactis酵母胞内乳糖酶性质的研究

源自乳酸克鲁维酵母的β-半乳糖苷酶为胞内酶,其具有乳糖水解能力和半乳糖苷的转移作用。本实验运用单因素试验方法研究乳酸克鲁维酵母乳糖酶的性质。结果表明该酶在pH值为6.0~7.0和37℃~48℃间比较稳定,酶作用最适pH值在6.5,最适反应温度为43℃,Mn2+、Mg2+等对酶有明显的激活作用,而Zn2+、Cu2+等对酶活有抑制作用。该酶以ONPG底物的米氏常数为4.186mmol/L。     

皱胃酶酶学性质的研究

研究了皱胃酶的酶学性质。皱胃酶的最适作用温度和最适pH值分别为42℃和6.0。在45℃以下和pH4.5～7.0范围内,酶活保持稳定。Ca2+、Na+、Fe3+对皱胃酶的凝乳有明显的促进作用,Mg2+、Cu2+、Ba2+对凝乳有抑制作用。并研究了底物浓度对酶反应的影响。     

猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化和性质研究

通过离心、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Superdex-200层析等步骤,从猪脑中获得电泳纯乙酰胆碱酯酶,该酶比活力和纯化倍数分别为2.05 U/mg和26.97,酶活回收率为11.95%;该酶分子质量为257.30 kD,亚基为66.94 kD;以碘化硫代乙酰胆碱为底物时,酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH值为7.4,且在40 ℃以下,pH 6.0～8.0有较好的稳定性;最适底物浓度为4.0 mmol/L,Km为0.94 mmol/L。Ba2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,而低浓度Mg2+对该酶有激活作用。     

中国对虾蛋白酶性质的研究

采用酶学分析方法研究了中国对虾蛋白酶的性质。结果表明,该酶最适温度为60℃,最适pH为9.0,是一种碱性蛋白酶。此酶在50℃以下及pH 7.0~10.0稳定性较好。以酪蛋白为底物,蛋白酶的最适底物浓度为2%。60℃时,该酶的半衰期为22 min,70℃时则为7 min。低浓度的EDTA对酶活有抑制作用,Mn2+、Ca2+、Mg2+对蛋白酶有一定的激活作用,而Cu2+、Zn2+、Fe2+、Pb2+对酶活有不同程度的抑制作用,可推断该酶是一种金属蛋白酶。     

酒曲中高蛋白酶产生菌筛选及酶学性质研究

利用脱脂牛奶平板法从宋河酒曲中分离得到6株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,其中水解圈直径与菌落直径之比最大为8.84,经鉴定为芽孢杆菌。以此菌种通过发酵培养提取出粗酶液,然后对该蛋白酶的酶学性质进行研究。试验表明,该蛋白酶的最适酶活力温度为40℃,在40℃～50℃热稳定性较好;该蛋白酶最适pH值为11.0,在pH值为9.0～11.0稳定性较好,在pH6.0条件下酶活力很快丧失;金属离子Fe2+对该蛋白酶有激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb+有抑制作用,Mg2+、Ca2+和Li+对该蛋白酶酶活性影响不大。     

节杆菌10137产β-呋喃果糖苷酶条件及酶学性质

研究表明,节杆菌10137产β 呋喃果糖苷酶的最佳条件为:温度为30℃,pH值7 5,接种体积分数为2%,装液体积为40mL.该条件下β 呋喃果糖苷酶的转移酶活为177.78U/mL,酶作用最适pH值为6.5,最适温度为30℃,在pH值为6.0～8.0和45℃以下稳定.Ag+和Cu2+对该酶有较强烈的抑制作用,EDTA和Mg2+对酶活也有一定影响.     

重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性研究

目的 研究重组猪羧肽酶B的酶学性质及稳定性.方法 测定其酶学动力学参数Km和Vmax,最适pH和最适温度:研究不同pH和不同温度条件下酶的稳定性,以及金属离子和EDTA对酶的活性与稳定性的影响.结果 重组猪羧肽酶B的Km为0.27 mmol/L,Vmax为222.22 μmol/min,最适pH为7.65,最适催化温度为25℃;pH在5.0～9.0范围内,温度在4～30℃稳定性良好,Cu2+和EDTA抑制酶活性,Co2+促进酶活性.结论 重组猪羧肽酶B的酶学性质与报道的提取猪羧肽酶B的性质基本相同,pH5.0～9.0范围内稳定,在4～30℃时稳定性好.     

紫甘薯多酚氧化酶酶促反应最适条件的研究

酶学特性研究表明紫甘薯PPO对pH的变化十分敏感,最适pH为4.1,pH6.0处还有一肩峰.pH值小于3.0或大于7.5时,酶活力迅速降低.紫甘薯PPO最适反应温度为16℃,30℃处有一肩峰.出现双峰现象可能是由于PP0同工酶所致.最适的酶液浓度和底物浓度分别为14.5%和0.5%.酶活随酶浓度、底物浓度升高呈上升趋势,并逐渐变缓直到达到最高反应酶活.     

根霉胞内α-半乳糖苷酶的分离及其酶学性质

根霉Rhizopus sp.A01的菌丝体破碎液依次经过三相分离、Sephadex G-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了54.8倍,总酶活回收率达到27.3%,在SDS-PAGE上显示相对分子质量为85.6 ku的单一条带,凝胶过滤表明该酶表观相对分子质量为302 ku。该酶水解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4.5,最适温度为55℃,表观Km值为(0.242±0.027)mmol/L,表观kcat/Km值为4.089×105L/(mol.s);对蜜二糖和棉子糖有弱的水解作用,水解速度依次为138.3μmol/(h.mg)、19.7μmol/(h.mg)。水解活性受Fe2+和Fe3+的显著激活,但受Mn2+、Cu2+、Hg+和Mg2+等离子的强烈抑制。该酶活性在pH4.0～8.2保持稳定,在50℃时保温90 min,残余酶活达到了48%。     

热稳定酸性β - 葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

耐酸性黑曲霉菌株Aspergillus niger L.的菌丝体破碎液依次经过乙醇沉淀、离子交换层析和凝胶过滤等步骤处理,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE显示其分子质量为125.7kD。β-葡萄糖苷酶水解对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷的最适pH值为3.0～4.0,最适温度为70℃,表观米氏常数(Km)值为2.35mmol/L,表观kcat/Km值为2.99×104L/(mol ·s);水解京尼平苷、水杨苷的表观kcat/Km值分别是1.26×104、1.37×104L/(mol ·s);水解活性受Mn2+的显著激活和Fe2+、Zn2+、Cu2+等离子的微弱抑制。该酶活性在pH2.0～8.3保持稳定;酶在65℃时保温60min,残余酶活达到了85%,是一种热稳定酸性β-葡萄糖苷酶。     

菌株F21来源α-淀粉酶的酶学性质研究

该研究对菌株F21所产的α-淀粉酶进行纯化和酶学性质研究。 通过硫酸铵盐析、疏水层析等方法纯化后,α-淀粉酶酶活达到 4 616.3 U/mL。 酶学性质研究表明,该酶最适pH值为4.8,最适温度为55 ℃,且酶在pH 4.0～9.0及低于45 ℃的条件下稳定性较高;Ca2+ 对酶活有较强激活作用,Fe2+及Fe3+对酶活有较强的抑制作用。     

白黄侧耳溶栓酶的分离纯化及特性分析

采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从白黄侧耳菌丝体中纯化一种溶栓酶,并进行酶学性质研究。实验结果表明,其分子质量约为18 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 7.0,40℃,并对糜蛋白酶底物S-2586最敏感。Co2+和Mg2+激活该酶活性,而Cu2+、EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅可直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。     

小麦与小麦芽阿魏酸酯酶酶活力的测定及其酶学性质研究

以阿魏酸乙酯作为底物,确定了阿魏酸酯酶的酶解工艺条件:酶解时间100 min;酶液与底物的体积比为0.75;提取液pH值6.2。针对阿魏酸酯酶酶学性质的研究表明:最适温度60℃,30～35℃范围内热稳定性较强,保温60 min后其活力可保持在80%以上;最适反应pH值5.0,在pH值5.0～5.6范围内对阿魏酸酯酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可保持在80%以上;Cu2+和Zn2+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,而ED-TA则对其有明显的促进作用。对5种小麦及其麦芽的阿魏酸酯酶酶活力进行测定:麦芽中的阿魏酸酯酶酶活均高于小麦,其中以烟2415、鲁麦21、郑麦004变化较大。     

Enterococcus faecalis RQ15产低温中性蛋白酶的纯化及酶学性质

采用DEAE Sepharose Fast Flow和SuperdexTM 75对Enterococcus faecalis RQ15产蛋白酶进行纯化和酶学性质研究。SDS-PAGE测定该蛋白酶分子质量为32.4kD,最适作用温度35～40℃,最适pH7.5。20～40℃之间酶活较高,pH值耐受范围广泛,具有低温蛋白酶的特征。Zn2+对蛋白酶有激活作用,Ag+、Hg2+和EDTA-Na2对酶有显著抑制作用。纯酶最适作用条件下对酪蛋白底物的Km和Vmax分别为1.31×10-4mol/L和6.92×10-6mol/(L ·s)。     

Bacillus subtilis UN13产α-淀粉酶酶学性质研究

对Bacillus subtilis UN13所产生的α-淀粉酶酶学性质进行初步研究.结果表明:该酶是一种中温酸性α-淀粉酶;其最适温度为50 ℃,在40～60 ℃范围内稳定性较好;最适pH为5.5,在pH值为5.0～7.5范围内较稳定;Ca2+和Mn2+对该酶有激活作用, Cu2+,Zn2+,K+和EDTA 则抑制该酶的活性;动力学研究表明该酶的Km值为1.7039 mg/mL,Vmax值为3.1615 mg/min·mL.     

谷氨酸棒杆菌表达大肠杆菌来源海藻糖酶

对谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum,C.glutamicum）表达大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）来源海藻糖酶进行研究。构建重组C.glutamicum菌株Cgtrl表达E.coli BL21来源海藻糖酶。菌株Cgtrl海藻糖酶最适表达条件：诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）添加量为0.5 mmol/L,诱导温度为22℃,诱导时间为12 h。在最适表达条件下重组海藻糖酶酶活为9.1 U/mL。重组海藻糖酶酶学性质研究表明,未经纯化的重组海藻糖酶具有较好的底物特异性能,专一性水解海藻糖,海藻糖水解率在96%以上,低温条件下稳定性较好,能够长时间低温保存,最适作用温度为45℃,最适作用pH值为6.6。     

高活性大豆异黄酮糖苷酶的分离原料筛选、纯化及性质研究

通过对32种植物β-葡萄糖苷酶水解染料木苷的活性比较,发现鹰嘴豆β-葡萄糖苷酶具有4.19U/mg的大豆异黄酮糖苷水解酶活性.该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellulose-52离子交换、Sephadex G-100凝胶层析纯化,纯化了10.1倍,收率为7.2%;SDS-PAGE和Sephadex G-100凝胶层析结果表明,该酶的分子量为73.2kD,含两个亚基;该酶的最适反应温度为45℃;最适pH6.0;当以染料木苷和大豆苷为底物时该酶的米氏常数分别为11.0和19.0μg/ml.温度在30～45℃、pH值在4.5～6.5范围内该酶较稳定;Ag+、Hg2+和D-葡萄糖酸内酯对该酶有强烈抑制作用.该酶能水解染料木苷和大豆苷,但不能水解纤维二糖和α-乳糖.