LC-MS/MS法测定保健食品及原料中石斛碱

目的：建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定金钗石斛类保健食品及其原料中石斛碱含量。方法：样品通过70%甲醇热回流的方法进行处理后,采用Agilent EclipsePlus C18色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL/min,进样量5μL。利用电喷雾离子源(ESI),采用正离子模式,多反应监测模式(MRM)进行检测,根据保留时间定性,外标法定量。结果：石斛碱的出峰时间在2.949 min,浓度在1.15～115 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),检出限为0.0373 ng/mL。金钗石斛原料和金钗石斛软胶囊的平均加标回收率分别为97.85%和102.64%;精密度相对标准偏差(RSD)分别为1.37%和0.97%。结论：该方法具有分析速度快、灵敏度高、重现性好、准确度高的特点,可为金钗石斛类保健食品及其原料的质量控制提供参考。     

κ-酪蛋白酶解物对双歧杆菌的促生长效果研究

研究了κ-酪蛋白的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝乳酶酶解产物以及商业化酪蛋白糖巨肽(GMP)对双歧杆菌(BBMN68和Bb12)的体外促生长作用。结果表明,κ-酪蛋白的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、凝乳酶酶解产物以及GMP对两株双歧杆菌均有促生长作用,其中作用最强的是碱性蛋白酶酶解产物,显著高于木瓜蛋白酶酶解产物、凝乳酶酶解产物和GMP的作用效果(P<0.05),并且GMP与κ-酪蛋白凝乳酶酶解产物的促生长作用无显著性差异(P>0.05)。     

LC-MS/MS法测定保健食品中左卡尼汀的含量

目的 建立保健品中左卡尼汀的LC-MS/MS的测定方法。方法 待测样品经超声提取、稀释后, 分别采用CAPCELL PAK CR色谱柱和PC HILIC色谱柱进行分离, 最后用LC-MS/MS进行检测。 结果 使用CAPCELL PAK CR法检测左卡尼汀能够得到更高的灵敏度, 线性范围为0~200 ng/mL, 相关系数为r=0.9995。结论 该方法灵敏度高、准确、重现性好, 可以用于一些保健食品中左卡尼汀的含量检测。     

草果多酚物质提取及LC-MS/MS分析

对提油后的草果粉末进行了多酚提取工艺优化,多酚成分分析及抗氧化活性研究。在单因素实验的基础上,选取提取时间、料液比、乙醇浓度、提取温度进行了四因素三水平的Box-Behnken中心组合研究,运用Design Expert8.06软件对实验数据进行分析;利用LC-MS/MS对多酚物质进行定性;通过DPPH自由基清除法和ABTS自由基清除法检测了草果多酚的抗氧化活性。实验结果表明,草果多酚最佳提取工艺条件为:提取时间150 min、料液比1:30 g/mL、乙醇浓度60%、提取温度67℃、多酚提取得率为9.69%;同时,从草果中检测出6种（原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、芦丁、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,5-二-C-β-D-吡喃葡萄糖基根皮素）文献已报道的多酚类物质和4种（龙胆酸、原花青素B2、金丝桃苷、木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖苷）文献未报道的多酚类物质;该草果多酚具有一定的DPPH、ABTS自由基清除能力,IC50值分别为42.46μg/mL和85.47μg/mL,且多酚浓度与其抗氧化活性正相关。      

LC-MS/MS分析测定紫薯花色苷方法研究

目的:通过对紫薯花色苷(anthocyanins from purplesweet potato,APSP)组分的分离、鉴定和相对含量的分析,为紫薯花色苷在食品工业中的应用提供方法借鉴和理论依据。方法:取实验室自制的APSP粉末25mg,置于5m L容量瓶中,用甲醇水混合液(甲醇∶水=2∶1)定容,所得溶液过0.45μm滤膜,利用LC-MS/MS对滤液中的成分进行分离、鉴定,并进行相对含量的计算。结果:根据LC-MS/MS结果可知,分离得到8种组分,并依据相关文献的报道,鉴定其中6种分别为矢车菊素3-咖啡酰槐糖苷-5-葡糖苷(Cyanidin 3-caffeoylsophoroside-5-glucoside)、芍药素3-咖啡酰槐糖苷-5-葡糖苷(Peonidin3-caffeoylsophoroside-5-glucoside)、矢车菊素3-(6"-咖啡酰-6"’-阿魏酰槐糖苷)-5-葡糖苷(Cyanidin3-(6"-caffeoyl-6"’-feruloylsophoroside-5-glucoside))、芍药素-双咖啡酰槐糖苷-5-葡糖苷(Peonidindicaffeoylsophoroside-5-glucoside)、芍药素3-咖啡酰-对-羟基苯甲酰槐糖苷-5-葡糖苷(Peonidin 3-caffeoylp-hydroxybenzoyl-sophoroside-5-glucoside)、芍药素3-咖啡酰-阿魏酰槐糖苷-5-葡糖苷(Peonidin-caffeoylferuloylsophoroside-5-glucoside),另外2种组分未知,同时对各组分的相对含量进行了比较。结论:利用所建立的LC-MS/MS方法可对APSP进行分离、鉴定和相对含量的分析。     

LC-MS/MS同时检测烟草中的6种杀菌剂

为测定烟草中的杀菌剂残留量,利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)建立了一种同时检测烟草中6种杀菌剂的方法:烟草样品提取液经处理后,在Atiantis dC18柱上以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相进行分离,用LC-MS/MS在多反应监测(MRM)模式下测定,内标法定量.采用该方法测定了145个国内外烟草样品中6种杀菌剂农药的残留量.结果表明:①6种杀菌剂线性范围是5～200 ng/mL,线性关系良好(R2＞0.999),平均回收率为85.3％～118.8％,相对标准偏差(RSD)小于7.7％,定量限在0.007～0.033 mg/kg之间.②所测样品中,有52个烟叶和30个卷烟样品中未检出任何杀菌剂农药,分别占所选烟叶和卷烟样品数的52％和66.7％;在6种杀菌剂农药中,除苯菌灵未检出外,其他5种农药均有检出.该方法适用于烟草及烟草制品中6种杀菌剂残留的快速检测.     

对不同温度酶解液制备酪蛋白磷酸肽的探讨

采用胰蛋白酶水解酪蛋白,可释放出促进钙吸收的酪蛋白磷酸肽。主要研究在40、50、60℃3个不同温度下,用胰蛋白酶水解酪蛋白,沉淀经干燥后,用Sephadex G-25柱层析进行分离纯化的效果。从洗脱图谱可以看出,3个温度下的CPPs洗脱体积与标准品相比基本一致,都在8 mL～40 mL处出峰,产品主要集中在峰1,说明蛋白质的肽键已基本被打断,得到了所需要的短肽。而60℃下所得CPPs产品的N/P(摩尔比)最小,纯化效果较好,是较理想的制备条件。     

人乳β-酪蛋白酶解产物体外对小鼠淋巴细胞的刺激作用

采用离子交换色谱法从人乳中分离、纯化得到人乳β-酪蛋白,利用胰蛋白酶对其进行酶解,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同孵育时间下,不同质量浓度的酶解产物对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾T淋巴细胞增殖情况的影响;ELISA法测定Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)分泌量。结果表明,人乳β-酪蛋白酶解产物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖具有显著的促进作用,且48 h效果最佳;对Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)的分泌具有显著的促进作用、对Th2型细胞因子(IL-6)分泌有显著下调作用;显著增加IFN-γ/IL-4的比值。     

酪蛋白酶解产物-锌络合物的结构鉴定及体外消化特性分析

探讨酪蛋白酶解产物与锌盐的络合特性及络合物的消化稳定性。采用红外光谱和紫外-可见光谱研究酪蛋白酶解产物-锌络合物的结构特性,利用体外模拟消化实验对比分析酪蛋白酶解产物-锌络合物和无机锌(ZnSO4·7H2O)的消化特性。结果表明,酪蛋白酶解产物可以与二价锌离子发生络合反应形成酪蛋白酶解产物-锌络合物,此络合物在模拟肠液中的溶解性优于ZnSO4·7H2O。结论:酪蛋白酶解产物具有络合Zn2+的特性,且络合物在模拟肠液中的消化稳定性优于ZnSO4·7H2O。     

QuEChERS/LC-MS/MS法测定人参中30种农药残留

建立人参中30种农药残留的快速样品处理,联合液相色谱-串联质谱(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe/liquid chromatography tandem mass spectrometry,QuEChERS/LC-MS/MS)检测方法.通过对快速样品处理法(QuEC...     

高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量

建立一种同位素稀释-高效液相色谱-串联质谱法定量检测婴幼儿配方奶粉中酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides,CPPs）含量的方法。经Q Exactive Orbitrap扫描,Uniprot蛋白质数据库初步确定CPPs所含肽段,根据质谱响应以及加标回收率等方法学验证实验进一步筛选确定CPPs的特征肽段。样品经过前处理后,采用ACQUITY UPLC BEH 300 C18色谱柱分离,多反应离子监测模式定量测定其中的CPPs特征肽。根据CPPs原料与CPPs特征肽含量的折算系数,从而确定出样品中CPPs的含量。方法学验证结果表明,所建立的方法在10～150?mg/100?g范围内线性关系良好,相关系数大于0.999。在高、中、低3?水平加标实验中,回收率在96.2%～100.2%之间,日间重复性在5.3%～7.8%之间。方法定量限为1?mg/100?g,可以满足婴幼儿配方奶粉中不同CPPs含量水平的定量要求。     

酪蛋白酶解物的分离及其抗氧化活性

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶(P+T)先后连续水解酪蛋白,采用001阳离子交换树脂分离该酶解液得到多肽;以酪蛋白的单一胃蛋白酶(P)和单一胰蛋白酶(T)酶解液为对照,系统评价酪蛋白不同酶解液及分离所获得的酪蛋白多肽的抗氧化活性。结果表明,阳离子交换树脂对(P+T)酶解液具有较好的分离作用,洗脱曲线共有4个峰,分别为P1、P2、P3、P4,收集冻干制得4个多肽。抗氧化性评价显示,P1、P2、P3、P4的还原力和DPPH自由基清除能力远高于未经分离的P、T和(P+T)酶解液。多肽P4表现出极高的Fe²⁺螯合能力,螯合率高达94.95%;P、T和(P+T)酶解液的Fe²⁺螯合力相当,螯合率达31%~33%,而P1、P2、P3不具备Fe²⁺螯合能力。在脂质过氧化抑制方面,P酶解液表现出较好的抑制力,其次为T酶解液,多肽P1、P2、P3、P4及(P+T)不具有脂质过氧化抑制力。由此可见,(P+T)连续水解液经阳离子交换树脂分离可制备具有较高自由基清除力及Fe²⁺螯合力的肽段,研究结论可为酪蛋白抗氧化肽的制备及分离提供参考依据。     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３ 个组分的结构,它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．     

牦牛乳酪蛋白酶解产物清除DPPH自由基活性分析

以牦牛(Bos grunniens)乳酪蛋白为原料,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶制备酪蛋白酶解产物,分别测定其DPPH自由基清除活力,发现碱性蛋白酶酶解产物的清除活力显著高于其他酶解产物(P<0.05).测定不同水解时间点酪蛋白酶解产物的DPPH自由基清除活力,发现第7h酶解产物的清除活力显著高于其它水解时间点的样品(P<0.05).还分析了碱性蛋白酶7h酶解产物的理化指标,发现其水解度、三氯乙酸氮溶解指数和蛋白质回收率均较高,表明此时大部分酪蛋白已降解,且酶解产物中短肽段的含量较高,用碱性蛋白酶制备具有DPPH自由基清除能力的酪蛋白酶解产物时得率较高,而其氨基氮含量相对较低,适宜作为保健食品功能性基料.     

Effects of Iron Source on Iron Availability from Casein and Casein Phosphopeptides

ABSTRACT: :
Iron availability from FeSO₄ in samples containing sodium caseinate (SC), casein phosphopeptides (CPP) or whey protein concentrate (WPC), and from ferric citrate (Fe-CA) in samples containing SC or CPP was measured using an in vitro digestion/Caco-2 cell culture model. In FeSO₄ spiked samples, relative availability was CPP > SC, CPP = WPC, and CPP = FeSO₄ alone. In samples containing Fe-CA, a soluble iron chelate, relative availability was CPP = SC and CPP < Fe-CA alone. These results suggest that CPP enhances iron availability from foods with low availability but does not improve and may inhibit availability from soluble iron species.     

酪蛋白酶解产物及其分离组分对小鼠脾淋巴细胞功能的影响

为探讨酪蛋白的胃蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶-胰蛋白酶双酶酶解产物分离组分对小鼠脾淋巴细胞功能的调节作用,采用凝胶过滤层析法对酶解产物进行初步分离,测定了分离组分对小鼠脾淋巴细胞增殖活性及IL-2生成量的影响。结果显示,胃蛋白酶-胰蛋白酶酶解产物作用效果优于单酶酶解产物,且其分离组分间具有一定协同作用。因此,将胃蛋白酶-胰蛋白酶酶解混合物用于保健食品的生产效果更优。     

不同因素对酪蛋白酶解产物与锌盐螯合效果的影响

本研究采用酶解法制得酪蛋白酶解产物,分析了不同锌源、酶解产物浓度、酶解产物与Zn2+质量比、反应体系pH值、反应温度、螯合时间等因素对酶解产物与锌盐螯合效果的影响,确定了酪蛋白酶解产物与Zn2+螯合的适宜反应条件。研究表明,ZnSO4·7H2O与酪蛋白酶解产物的螯合能力显著高于醋酸锌或氯化锌与酪蛋白酶解产物的螯合能力(p<0.05)。当酶解产物浓度为0.04g/ml、酶解产物与Zn2+质量比为4:1、反应pH值为6.0、反应温度为40℃、螯合时间为20min时螯合效果较好。     

不同因素对酪蛋白酶解产物螯合亚铁盐能力的影响

本研究以干酪素酪蛋白为原料,对影响酪蛋白酶解产物螯合Fe 2 反应的因素进行了初步研究,为获得高效生物补铁剂以预防缺铁性贫血提供理论依据.研究表明,FeSO 4与酪蛋白酶解产物的螯合能力显著高于(NH4)2Fe(SO4)2或FeCl 2与酪蛋白酶解产物的螯合能力(p＜0.05);不同酶解时间获得的酪蛋白酶解产物与FeSO 4的螯合能力不同,7h时获得的酶解产物螯合FeSO4的能力最强;当酪蛋白酶解产物与FeSO 4共同作用10min、硫酸亚铁与酪蛋白酶解产物的质量比为1:2、反应体系pH为6.0,反应温度为40℃时螯合效果较好.     

MALDI-TOF质谱法分析与鉴定羊乳中的磷酸肽

基于基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立一种羊乳中磷酸化肽段的检测方法。以商品化二氧化钛(Ti O2)为富集材料用于羊乳中低丰度磷酸肽的富集,并优化了商品化Ti O2富集羊乳中磷酸肽的最佳吸附洗脱条件,得到的结果为,孵育缓冲液为乙腈∶水(50∶50,体积比)+1%三氟乙酸,洗脱液为氨水15%。接着探讨了脱脂对检测结果的影响,结果表明,通过MALDI-TOF MS分析实际乳磷酸肽时,需要对乳类样品进行脱脂才能更完整的鉴定磷酸肽,从羊乳中鉴定出八个磷酸化肽段通过Mascot数据库检索。本研究为乳类磷酸肽指纹图谱的建立提供了理论基础,指纹图谱的建立能够应用于掺假乳的快速鉴定。     

邻二氮菲-Fe~(2+)法测定牦牛乳酪蛋白酶解产物的抗氧化性

采用邻二氮菲-Fe2+法测定牦牛乳酪蛋白酶解产物的抗氧化性。通过单因素分析,确定了试剂的用量及反应条件对样品吸光度及羟自由基清除率的影响。优化得到的反应条件为:1 mL 1.5 mmol/L邻二氮菲,2 mLpH7.4磷酸盐缓冲液,1 mL抗氧化剂,充分摇匀后,加入1 mL 0.5 mmol/L FeSO4溶液,混匀,加1 mL 0.1%H2O2,具塞于38℃反应50 min,于波长536 nm处测定其吸光度。结果表明,改良的邻二氮菲-Fe2+法测定结果重现性好,适于酪蛋白酶解产物抗氧化性的测定。