大豆分离蛋白ACE活性抑制肽的研究

研究了预处理条件对大豆分离蛋白水解效果的影响,热处理与微波辅助处理相结合能显著提高蛋白酶的水解效率.比较了6种酶解大豆蛋白产物的ACE抑制活性,选择碱性蛋白酶为最佳水解用酶,并优化了酶解条件.研究了8种大孔树脂对水解产物精制效果,结果表明:经D3520型大孔吸附树脂精制后,水解产物脱盐率89.4%,肽回收率90.6%,ACE抑制活性达84.1%.经HPLC法测定,大豆分离蛋白ACE活性抑制肽混合物分子质量主要分布在200～800 ku之间.     

酶解米糠蛋白分离提取ACE抑制肽及其结构研究

研究酶解米糠蛋白中具有ACE抑制活性短肽组分及其序列,本实验采用等电点沉淀法提取米糠蛋白,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,并采用Sephadex G-15凝胶层析和SP-Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分。ACE抑制活性检测结果显示:酶解组分中含有较高抑制活性成分,其相对分子量在500单位以内。各组中活性最高的组分进行HPLC-MS分析,其中活性最高的胃蛋白酶联合胰蛋白酶酶解活性组分主要为Arg-Tyr、Met-Trp、Gly-Val-Tyr或Gly-Asp-Phe,其共同特征是C端具有苯环样结构,提示:这种环结构可能是ACE抑制剂的重要结构特征。     

猪血红蛋白酶解制备ACE抑制肽的研究

本实验选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶等六种商业蛋白酶在各自最适反应条件下分别水解猪血红蛋白12h,研究其水解产物对血管紧张素转换酶抑制率和蛋白水解度的影响。结果显示:采用胃蛋白酶酶解获得的产物ACE抑制率最高。胃蛋白酶的酶解条件为底物5%(质量分数),酶与底物浓度比E:S=3%,温度37℃,pH2.0,水解4h后其ACE抑制率为81.10%,水解度为6.64%。     

酶解核桃蛋白制备ACE抑制肽及其功能特性研究

对木瓜蛋白酶酶解核桃蛋白制备ACE抑制肽条件进行优化,测定不同条件下酶解液的抗ACE功能特性。用葡聚糖凝胶G-25分离活性肽段,测定其ACE抑制率。结果表明:酶解条件是:酶用量6 000 U/g底物、底物质量分数3%、p H 7.5、温度50℃,酶解240 min。此时酶解液的ACE抑制率较高,达88.86%。通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃蛋白产物高ACE抑制率的活性肽段集中在分子质量612~307u范围,其抑制率为93.56%。     

分子排阻色谱纯化核桃蛋白源ACE抑制肽条件优化

为了得到新的ACE抑制肽,采用分子排阻色谱对核桃蛋白碱性蛋白酶水解物进行分离、纯化。优化了分子排阻色谱分离、纯化核桃蛋白水解物的洗脱剂、洗脱流速、上样体积和样品浓度,比较了其纯化前后ACE抑制活性变化、分析了不同组分RP–HPLC图谱及其氨基酸组成。结果表明,以Sephadex G–15为分离介质的色谱优化条件为:超纯水为洗脱剂、洗脱流速0.4 m L/min、上样体积1.5 m L、样品浓度150 mg/m L。在此条件下,经过分子排阻色谱纯化后,得到4个主要组分,其中活性最高组分的ACE抑制率达90.35±0.25%,其IC50值为0.158 mg/m L。经过RP–HPLC进一步分离,分子排阻色谱纯化后高活性组分保留时间主要集中于10 min、13 min、17 min和21 min,并且其疏水性氨基酸的含量得到显著富集,其中芳香族氨基酸Tyr、Phe的含量分别达10.46%和20.15%。     

鱼胶原蛋白酶解工艺及其活性肽抑制ACE酶的研究

本研究通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶水解鱼胶原蛋白制备胶原多肽的工艺。采用高效液相色谱法测定海水鱼与淡水鱼胶原多肽血管紧张素转换酶（ACE）的抑制活性来表征其降血压功能。研究表明:胃蛋白酶制备鱼胶原多肽的最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,初始p H为2.5,酶与底物比例为1∶125（w/w）,底物质量分数为3%（w/v）,水解时间为12 h,此时鱼胶原蛋白溶液的水解度为19.17%。研究发现海洋鱼胶原蛋白和淡水鱼胶原蛋白的酶解上清液均具有较高的ACE抑制活性,半抑制浓度IC50分别为1.34 mg/m L和1.52 mg/m L。利用超滤离心管获得的不同分子量组分中,分子量小于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅰ和淡水胶原多肽CP-Ⅲ的ACE抑制活性的半抑制浓度IC50分别为0.43 mg/m L和0.60 mg/m L,而相应分子量大于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅱ和淡水胶原多肽CP-Ⅳ的半抑制浓度IC50分别为1.78 mg/m L和1.69 mg/m L。      

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。     

酶解玉米蛋白制备降血压肽的研究

以玉米蛋白粉为原料,选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白降血压肽,用Cushman紫外分光光度法测定水解液的ACE抑制活性。结果表明,碱性蛋白酶Alcalase2.4L水解液具有最大的ACE抑制率,水解条件优化实验确定最适pH为8.0,温度为55～60℃,底物浓度为2.5%,加酶量为48AU/kg。水解度15.96%时所得水解物对ACE抑制作用最强,IC50为0.125mg/mL。      

小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

为了探讨和研究小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离提纯方法、技术参数及分离效果,首先采用超滤、纳滤膜技术将谷朊蛋白水解液按照相对分子质量的不同进行分离纯化,采用高效液相色谱法和SHR大鼠实验检ACE抑制抑制效果,并对高抑制活性的组分采用凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)进一步分离纯化。结果显示膜过滤和凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)能够有效分离和纯化谷朊蛋白抑制肽,IC50由0.125mg/mL降低到0.106mg/mL。一次性灌胃SHR大鼠一星期后动脉血压降低(8.86±2.23)mmHg,证明谷朊蛋白抑制肽经过分离纯化后具有良好的降血压效果。     

不同食物来源的ACE抑制肽的研究现状

本文阐述来源于乳蛋白、鱼蛋白、植物蛋白、发酵食品和天然食物中ACE抑制肽的研究进展，并展望其应用前景。     

酶法生产大豆蛋白ACE抑制肽的研究

研究了Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Protames复合蛋白酶、Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白的水解效果和ACE(血管紧张素转化酶)的抑制活性。水解能力用pH-start法检测,水解度大小依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶;ACE抑制活性用高效液相法检测,ACE抑制率强弱依次为:Alcalase碱性蛋白酶>Flavourzyme风味蛋白酶>Protames复合蛋白酶>Neutrase中性蛋白酶。综合考虑,选定Alcalase碱性蛋白酶为生产大豆ACE抑制肽的最适酶,并对其酶解条件进行了优化,确定生产大豆ACE抑制肽的最佳条件为:温度60℃、pH8.0、[S]=4%、[E]/[S]=4%,这时的水解度为14.4%。     

2种蛋白酶的大豆蛋白水解物对血管紧张素转换酶的抑制作用

报道了 2种工业化酶ProteaseA和OrientaseB的大豆蛋白水解物的高活性ACEI肽的筛选工作 ,并且对所得到的活性较高的水解物进行了感官评价。这 2种酶的水解物的ACE抑制活性均随着水解时间的增加呈指数归律增加。其中OrientaseB水解大豆蛋白 1 0h ,其产物的ACE抑制活性最高达到 95 %,ProteaseA的最高也可达到 91 33%。ProteaseA水解 4～ 1 0h的产物以及Ori entaseB水解 6～ 1 0h的产物 ,是由 2～ 5个氨基酸组成的寡肽 ,ACE的抑制活性高 ,且苦味轻微或没有。这些肽因其天然、安全、作用温和而有望作为良好的降压成分进入人们的日常膳食。     

高粱碱溶蛋白ACE抑制肽的制备及其稳定性研究

以高粱为原料,通过碱法提取制备高粱碱溶蛋白,利用不同蛋白酶对其进行酶解,结果表明Alcalase碱性蛋白酶水解高粱蛋白得到的水解产物水解度和血管紧张素转化酶(ACE)抑制率最高。在此基础上进一步考察了碱性蛋白酶酶量、pH值、温度、反应时间这4个因素对水解产物ACE抑制率的影响,并通过响应面实验优化酶解条件,得到Alcalase碱性蛋白酶水解高粱碱溶蛋白制备ACE抑制肽最优工艺为:酶解温度55.5℃,酶解时间1.68 h,pH值7.95,酶量2 360 U/g,此条件下实测ACE抑制率达到75.98%,该ACE抑制肽具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,并且在体外经胃肠道酶系消化酶解后,依然能保持良好的抑制活性。     

瑞士乳杆菌发酵法制备乳清蛋白源性ACE抑制肽的研究

利用益生菌发酵法制备ACE抑制肽（AngiotensinI-Converting Enzyme（ACE）inhibitory peptides）已成为近年来研究的新热点,对于功能性食品的开发具有十分重要的意义.本文以瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）为发酵菌种,研究了其水解乳清蛋白的能力及发酵产物的ACE抑制活性.研究发现发酵产品在瑞士乳杆菌对数生长期收获时为最佳,16h收获时ACE抑制率达到44.17%,活菌数为10^7CFU/ml.发酵产品超滤结果显示,用10000D分子量膜超滤后,其ACE抑制活性比未超滤前提高2.5倍,IC50达到19.63 g/ml.最后对发酵产品进行喷雾干燥和冷冻干燥,发现这两种干燥方法对产品ACE抑制活性没有影响,冷冻干燥的方法产率比较高,可达到106.08g/L,且IC50为50.28μg/ml.     

鱿鱼肝脏蛋白水解液及ACE 抑制肽的制备

为高效利用鱿鱼及其下脚料肝脏蛋白水解物,采用酶解技术和凝胶过滤分离等技术对鱿鱼肝脏蛋白水解液中抑制肽进行研究。结果表明：胃蛋白酶为鱿鱼肝脏蛋白水解的最佳酶类,同时以水解度和ACE 抑制活性为指标,得出胃蛋白酶水解的最佳条件：在36℃条件下酶解22h,酶与底物的质量比2%,底物质量分数2.5%。经过上述条件处理的水解液再经超滤处理(截留分子质量为20kD)后,用Sephadex G-50 进行分离,洗脱得到5 个峰,其中组分B 的ACE 抑制活性最高,其半抑制浓度(IC50)达到1.80mg/mL。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

贻贝盐溶蛋白特性分析及其ACE抑制肽的酶法制备

以贻贝为原料提取盐溶性蛋白,首先研究盐溶性蛋白的分子质量分布、粒度分布和变性温度等性质,然后比较其3?种蛋白酶（胰蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶）酶解产物的血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性,筛选出ACE抑制活性较高的胰蛋白酶酶解物,其IC50值为215.96?μg/mL。利用质谱对胰蛋白酶酶解物中的多肽氨基酸序列进行鉴定,利用多肽序列与ACE的对接分数初步筛选出11?个分值大于180?分的多肽序列,通过氨基酸组成结合情况和两者间氢键等相互作用,进一步筛选活性肽并阐述抑制活性机理,最终推测出LYDIDVAK和WIAEEADK是活性较高的抑制肽。     

酶解条浒苔蛋白制备ACE 抑制肽

为了开发利用绿潮藻类条浒苔中含量丰富的蛋白质,采用可见分光光度法测定酶解物对ACE的抑制作用,考察碱性蛋白酶、Alcalase和胰蛋白酶对条浒苔蛋白的水解作用及其水解产物的ACE抑制活性,筛选出Alcalase作为酶解条浒苔蛋白制备具有降血压活性酶解物的适宜水解酶。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对该酶的酶解条件进行优化。结果表明,最佳酶解条件为：料液比1:50、加酶量2982U/g pro、温度47.9℃、pH7.53、酶解时间90min,在该条件下,酶解物的ACE抑制率IC50值为0.66mg/mL。不同截留分子质量的组分中,分子质量范围在1～5kD,平均肽链长度为16的组分ACE抑制活性最强,模拟体外消化实验结果表明,分子质量小于10kD的组分具有一定的对消化酶的抗性。