十二指肠上皮细胞的亚显微结构

本文以健康家兔十二指肠为实验材料,在超薄切片透射电镜观察的基础上,采用冷冻蚀刻技术对十二指肠上皮细胞的亚显微结构及其膜表面特化结构,进行观察分析。实验方法取新鲜材料,经4％戊二醛和1％锇酸双固定后,为了提高样品的反差和较好地显示细胞的膜结构,将样品放入1％单宁酸浸泡60分钟,尔后再用丙酮逐级脱水,EPON812包埋,超薄切片后送H—500电镜观察。冷冻蚀刻样品,系用HFZ—1型冷冻蚀刻装置,按常规操作步骤制备复型膜。     

肺巨噬细胞在某些实验病理情况下超微结构变化的电镜观察

本文以健康家兔为实验对象,分别采用夹闭肠系膜上动脉所造成的动脉闭塞性(SMAO)休克、自耳静脉注入油酸所复制的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)为实验模型,应用“洗肺”技术采取肺巨噬细胞,进行超薄切片和冷冻蚀刻电镜观察;分析比较了肺巨噬细胞在上述实验性疾病时的超微结构变化,探讨了肺巨噬细胞与某些病理过程的关系。一、材料与方法:将健康成年家兔,分为正常对照组,SMAO休克组和ARDS组。各组动物均以适量温生理盐水缓冲液(约50毫升),经气管插管反复灌洗肺组织(六次),再将洗出液三次离心沉淀(500克,8分钟/次),制得5×10~6/毫升肺巨噬细胞混悬液。此后,样品分别经2.5～4.0％戊二醛固定,以618树脂包埋制备超薄切片;经30％甘油生理盐水防冻处理,用日立FHZ—1型冷冻蚀刻装置制得冷冻复型膜。样品送H—500电镜观察,加速电压75KV。     

家兔肺巨噬细胞的“洗肺”取材及其超微结构观察

许多实验研究证明,肺巨噬细胞不仅有很强的吞噬功能,而且参与某些免疫反应,因此被视为肺脏防御体系的重要组成部分,并引起人们的广泛重视。本文以家兔为实验材料,应用“洗肺”技术采取肺巨噬细胞,进行了超薄切片与冷冻蚀刻电镜观察,,以探讨巨噬细胞亚显微构造及其细胞膜结构与该细胞功能之间的关系。 (一)材料与方法:本实验用成年健康家兔,经放血处死后,立即切开气管并插入特制气管插管,注入适量(约50毫升)温生理盐水缓冲液,且随即吸出,如此反复灌洗6次。再将全部洗出液经三次离心沉淀(500克,8分钟/次),制得约5×10~6/毫升的肺巨噬细胞混悬液。接着,将离心后的细胞经4％戊二醛予固定,618树脂包埋,按常规方法制备超薄切片;同时,选用FHZ—1型冷冻蚀刻装置,制取冷冻蚀刻复型膜。最后送H—500透射     

支原体感染的不育症精子扫描、冷冻复型观察

男性不育症患者精液及从精液中分离培养的解脲支原体,加磷酸缓冲液多次离心纯化后用2.5％戊二醛固定,再离心备用,作扫描电镜观察的样品:取沉淀物滴于铜片上、脱水、临介点干燥、镀金,用H—3010及Amray 1000B扫描电镜观察;作冷冻复型的样品经3％甘油处理后在BAF400D冷冻复型仪中制成复型膜,用H—300及JEM1200EX电镜观察。结果:1.解脲支原体(图3):解脲支原体是能独立生长的最小微生物,缺乏细胞壁,只有一层细胞膜(由暗-明-暗3层组成),最适生活环境为pH7.5,厌氧环境生长更好;形态为多形性的,有球形、杆形、哑铃形,有的部分膨大、分枝成星形或螺旋形,偶见链状或丝状,大小差别很大,从80-800nm不等,分裂繁殖或分枝断裂繁殖。     

支原体感染的不育症精子超微结构研究

生殖器官支原体感染可能是男性不育症的病因之一,为探讨不育的可能机理,本组对支原体感染的不育症患者精子的超微结构进行研究报告如下: 材料和方法:4例经支原体检查阳性的不育患者精液,1例支原体检查阴性的正常育者精液以及人型标准株支原体和解脲支原体培养物作对照。固定于成二醛的精子及支原体培养物一部分用悬滴法磷钨酸染色制备负染标本。另一部份离心成团按常规方法制备超薄切片JEM1200EX电镜观察。     

男性不育精液电镜诊断

采用１９０例男性不育患者的精液,作超薄切片,透射电镜下观察,进行诊断并结合文献探讨其不育的原因,为临床治疗男性不育患者提供依据。结果发现本文例除无精症外均属于复合型精子结构异常,各例精子大部分均有多个部位和多个细胞器结构异常。这些结构异常使受精能力降低,成为男性不育的原因。因此,对男性不育患者进行精液电镜诊断十分必要。     

大熊猫精子的超微结构

近年来,人们研究大熊猫的生态、生理、饲养和繁殖,取得了一些成绩。1978年大熊猫人工授精繁殖在北京动物园试验成功,开辟了新的繁殖途径。目前国外有人研究大熊猫精子的发生及发育状况,搜集冷冻精液活力等数据,但对精子超微结构的研究较少。笔者对大熊猫精子进行电镜观察,了解精子的超微结构特征,为提高大熊猫繁殖率提供资料。方法将新鲜的大熊猫精液离心,取沉淀用琼脂预包埋,经戊二醛与四氧化锇双重固定,按常规方法包埋、制作超薄切片,铀铅双重染色,JEM—100cX电镜观察。结果和讨论电镜下大熊猫精子主要由头部、颈部和尾部组成。头部有细胞核和顶体,细胞核电子密度较高,     

扁桃酸酰胺作用阴道滴虫的电镜观察

扁桃酸酰胺(Mandelic Amide)已证实为桃叶膏抗滴虫的有效成份,为探讨此成份的杀虫机制,作者曾作了光镜下的形态观察,而对电镜下的超微结构改变未见有过记载。本文就电镜下的观察结果报导如下。观察方法是在培养48小时的滴虫培养管内加入40mg/5ml扁桃酸酰胺,培养48小时后制备样品。另外取一滴虫培养管不加药品作对照组,并与实验管同时进行样品制备。样品制备是将上述两种标本,先以2.5％戌二醛液在室温下作一级固定,15分钟后,用pH7.4磷酸缓冲液水洗1小时,再入1％四氧化锇二级固定2小时。用乙醇进行系列脱水,用环氧树酯包埋处理48小时,作超薄切片,切片用醋酸铀和柠檬铅作双染色,随后在H—600型电镜下观察拍片。     

幽门螺杆菌感染后胃粘膜屏障改变的形态学研究--Ⅱ.胃粘液细胞间紧密连接的变化

目的观察HP感染后胃粘液细胞间紧密连接的变化,并探讨其临床意义. 方法 6例有HP感染(快速尿素酶试验阳性)胃粘膜窦部活检标本,采用超薄切片技术及冷冻蚀刻技术处理后,HU-12A透射电镜观察.结果 HP常聚集在胃粘液细胞连接的附近 ,甚至可沿细胞间隙向深部浸润.冷冻蚀刻复型膜观察显示:部分粘液细胞间紧密连接条索数减少,断裂或缺失,部分细胞间紧密连接条索数目增多,并向深部延伸,可游离存在或构成稀疏的网状遍布于细胞的侧面.结论 HP感染后,作为胃粘膜屏障组成部分之一的胃粘液细胞间紧密连接的破坏可能是HP致病的一个重要机制.     

纤毛细胞膜特化结构的冷冻蚀刻研究

六十年代以来,冷冻蚀刻技术的应用和发展,能较满意地揭示生物膜上某些特化区域的蛋白分子排列方式和三维图象。本文应用此技术,研究纤毛细胞表面特化结构。家兔整体麻醉后,开胸取新鲜气管上皮层数条,用0.IM磷酸缓冲液配制的2％戊二醛(PH7.2)在4C固定一小时,洗涤24小时后浸入30％甘油生理盐水,待组织条沉没数分钟后,取出样品,置于样品台上,用液氮冷冻后,迅速放入FD—3A 冷冻蚀刻仪中,在真空优于2×~(-6)Torr下做断裂,蚀刻和喷涂白金及碳,用10％次亚氯酸钠溶化喷涂样品,洗净复型膜,捞取在载网上,待干后用TEM—100CXⅡ电镜观察。     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

幽门螺杆菌感染后胃粘屏障改变的形态学研究：Ⅱ.胃粘液细胞间紧 …

目的 观察ＨＰ感染后胃粘是紧密连接的变化,并探讨其临床意义。方法 ６例有ＨＰ感染（快速尿素酶试验一）胃粘膜窦部活检标本,采用超薄切片技术及冷冻蚀刻技术处理后,ＨＵ－１２Ａ透射电镜观察。结果 ＨＰ常聚集在胃粘液细胞边接的附近,甚至可沿细胞间隙向深部浸润。冷冻刻复型膜观察显示,镜紧密连接索数减少,断裂或缺失,部分细胞间紧密连接条索数目增多,并向深部延伸,可游离存在或构成稀疏的网状遍布于细胞的侧面。结论     

高分子材料冷冻切片的捞片技术

长期以来,在透射电镜样品制备超薄切片中,常规的捞片方法是采用带支持膜的载网收集。近年来,随着电镜的广泛应用,冷冻切片技术在高分子材料中应用也越来越广泛,由于冷冻切片技术要求较高,难度也大,切片厚度的控制是关键,否则在电镜下电子束将无法穿透过去。因此,在切片过程中,除了掌握好制样重要技术环节以外,要求尽可能采用无膜载网进行捞片,以减少电子束穿透厚度和切片的热漂移,这样才能保证获得厚度低于100nm的切片。本人经过长期的工作实践不断的摸索和总结,现将冷冻切片技术中应用无膜载网收集切片应掌握的技术介绍如下。冷冻切片样品…     

急速冷冻冷冻置换方法保存的肾小球毛细血管袢的超微结构

目的：用急速冷冻－冷冻置换法与普通的9化学固定技术研究比较肾小球毛细血管袢在相同灌流压条件下的超微结构。方法：用150cmH2O压力灌流活体状态下大白鼠的肾脏,用急速冷冻－冷冻置换法及普通的化学固定法制作电镜超薄切片。结果：在相同的压力下用急速冷冻－冷冻置换法所观察到的肾小球毛细血管袢上皮细胞足突裂孔膜的宽度比普通的固定方法所观察到的窄,另外用急速冷冻－冷冻置换方法观察到的肾小球毛细血管袢的其它超微结构也与普通的化学固定方法所观察到的有所不同。结论：用急速冷冻－冷冻置换法所[观察到的超微结构比用普通的化学固定法观察到的超微结构更接近活体状态。     

睾丸精小管的冷冻蚀刻和超薄切片的电镜观察

本文报导小白鼠、大白鼠、狗的睾丸精小管冷冻蚀刻和超薄切片的观察结果和讨论。一、细胞连接:精小管中各细胞之间关系密切,相互交换信息和物质,保证了精子发生的节奏性和同步化。用冷冻蚀刻技术观察到两种细胞连接形式。1.紧密连接,低倍镜下可见支持细胞的表面有各种线条组成的图案,花纹,高倍镜下则能分辨出这些线条是由蛋白颗粒排列而成。2.间隙连接:由数量不等的蛋白聚集形成,这是两个细胞片状接触,增加了细胞间的信息交流和物质交换量,紧密连接和间隙连接常常是混合存在的,这种结构表明两种连接形式有共同性。通过超薄切片的电镜观察到细胞间的桥粒连接,和精子细胞的间桥,这保证了细胞之间有更多的物质交换,同步发育。     

甲烷丝菌分裂的电镜观察

运用超薄切片、负染色和冷冻蚀刻方法,对甲烷丝菌的分裂方式和分裂环的结构进行了电镜观察。甲烷丝菌的分裂包括丝状体内单个细胞分裂和丝状体分裂。细胞分裂是通过外壳向内生长,形成分裂环将细胞分开。丝状体分裂主要是由于细胞不均等分裂形成空壳,丝状体从空壳处断开。甲烷丝菌的分裂环是条纹形成的同心环结构。本文将甲烷丝菌的分裂方式与真细菌的分裂方式进行比较。     

胆石症患者肝的超微结构改变

胆石症常伴发胆囊炎,慢性胆石性胆囊炎(CHL)对患者肝脏的超微结构改变的影响,目前资料不多。本研究应用透射电镜对超薄切片及冷冻蚀刻复型标本进行了综合观察。对象是经临床及外科手术证实为慢性胆石性胆囊炎患者,均未经胆酸类药物或其它肝毒性药物治疗,多数患者为40岁以上妇女。病程2—5年,无临床郁胆,     

精子细胞发育过程中膜结构和核膜孔分布极性化的形态研究 冷冻蚀刻和双复型膜电镜技术

精子细胞变态分为四个时期,即高尔基期,头帽期,顶体期和成熟期,在发育过程中细胞的形态、结构和成分都发生明显的变化,Susi,F.R等研究了高尔基复合体衍化为顶体的过程,Clerment,Y.,党连凯等观察了内质网的形态变化。Friend,S.D.采用冷冻蚀刻技术研究成熟精子的膜极性特点和受精过程中膜结构的变     

甜菊叶片细胞结构及糖苷分泌机理探讨

甜菊(Stevia rebaudiana Bertani)以其叶片细胞内含有高甜度、低热能、无毒性和非发酵性等显著特点的“甜菊糖苷”(Stevioside),被视为当今最有发展前途的新型糖料植物和药用植物。本研究系中国科学院基金资助课题的部分内容。应用电镜的超薄切片术,电镜细胞化学技术,冷冻蚀刻术及     

山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体