HIV-1核心蛋白Gag与IL-6共表达重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性研究

分别将IL-6和HIV-1gag基因插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTAL串联启动子和复合启动子(ATI-P7．5)下游，构建了重组鸡痘病毒表达质粒pUTA-GAG-IL6。经同源重组和Western blot检测，获得重组鸡痘病毒，并将该重组病毒免疫BALB／c小鼠，检测免疫小鼠血清抗体水平和特异性CTL杀伤活性。结果获得的重组鸡痘病毒可同时表达HIV-1核心蛋白和IL-6，并在感染细胞内形成病毒样粒子。重组病毒具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。     

共表达H5、H7亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒构建

以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素(AIV HA)基因串联后(拥有同一个阅读框)和鸡白细胞介素-18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子1(P7.5)下游,构建了携带AIV HA基因和鸡白细胞介素-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-H7-IL18;用相同的方法构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-IL18;将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因、H7亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出H5HA-H7HA融合蛋白基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-H7HA-IL18,H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18以及单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA.这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础.     

人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性.结果表明:HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高.研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答.     

小鼠对HIV-2嵌合结构基因重组鸡痘病毒的免疫反应

将HIV-2嵌合结构基因gag-gp105插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游,构建出鸡痘病毒重组转移质粒pA-gg;经转染和BrdU加压筛选,以基因组PCR和Western blot法鉴定重组病毒;将获得的重组病毒大量制备并纯化后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清HIV-2抗体,流式细胞仪测定CD4 、CD8 T淋巴细胞亚类数量,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性.结果表明,成功筛选出一株可稳定表达HIV-2嵌合蛋白Gag-gp105的重组鸡痘病毒rFPV-gg;该重组病毒免疫组小鼠的血清出现HIV-2抗体,脾T细胞亚类数量增加,并产生针对HIV-2靶细胞的特异性CTL杀伤活性.本研究提示,HIV-2 gag-gp105重组病毒能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答.     

水产养殖动物核酸疫苗的研究与应用现状

介绍了鱼用核酸疫苗载体的构建、诱导的免疫反应机制、接种途径、佐剂的免疫促进作用及安全性等研究现状。     

口蹄疫病毒二价DNA疫苗的构建及实验免疫研究

通过PCR方法从本室已构建的克隆载体pGEMT-P1-2A获得O型口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1基因,以基因突变获得A型VP1基因。将这两种血清型的VP1基因串联后连接到真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建成口蹄疫二价核酸疫苗pVAX1-OA。经Western blot和IFA检测,目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。动物实验表明,免疫小鼠T淋巴细胞明显增殖,特异性CTL杀伤活性较对照组显著提高;血清抗体能分别与O型和A型抗原反应,抗体效价均高于空白对照组,但较灭活苗低。     

HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

将HIV－1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中进行表达,以期获得重组痘苗病毒,与核酸疫苗混合免疫,评价免疫效果,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV－1中国流行株gp120基因片段插入到pJ38载体启动子下游,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒,SDS－PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB／c小鼠,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4＋CD8＋T细胞数目以及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38pg120能够表达Gp120蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性,其免疫效果以2rVV-DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp120。     

5，5′-二硝胺基-3，3′-联-1，2，4-三唑碳酰肼的晶体结构与理论研究

培养了5,5′-二硝胺基-3,3′-联-1,2,4-三唑碳酰肼(CBNT)的单晶,并采用X射线单晶衍射仪测定其结构。结果表明,该晶体属于单斜晶系,空间群为P2(1)/n。晶体学参数为:a=0.486 4(4) nm,b=2.534 2(20) nm,c=0.673 2(5) nm,α=90°,β=100.365(9)°,γ=90°,V=0.816 2(11) nm³,z=2,D=1.776 g/cm³。采用扫描电子显微镜(SEM)研究了CBNT的晶体形貌,其为长棒状。运用密度泛函理论(DFT)B3LYP-311+G**方法研究了CBNT的前线轨道能量和分子表面静电势(ESPs)。     

甲基丙烯酸环氧丙酯与1-(2-叔丁基过氧异丙基)-3异丙烯基苯的共聚研究

通过甲基丙烯酸环氧丙酯与１－（２－叔丁基过氧异丙基）－３异丙烯基苯的共聚，得到了带过氧和环氧两种侧基的共聚物。由该共聚物与聚乙烯熔融共混可得到带环氧基团的接枝聚乙烯。该接枝聚乙烯与ＰＢＴ熔融共混时可就地生成具有增容作用的特殊的聚乙烯－ＰＢＴ接枝共聚物。     

Al2O3系纳米固溶体粉末晶格常数与成分关系的理论和实验研究

氧化物固溶体晶格常数的变化是影响材料制备和应用的一个重要因素,从理论上预测氧化物固溶体晶格常数的变化规律是材料学家常用的从理论上研究物性参数的方法之一。我们推导出立方相氧化铝系纳米固溶体晶格常数与组成固溶体的氧化物的成分的关系,并用于Al2O3—MgO、Al2O3—Y2O3和Al2O3-MgO-Y2O3系纳米固溶体晶格常数的计算,发现和用湿化学方法制备的立方相氧化铝系纳米固溶体晶格常数实测的结果基本一致,误差分别不大于3．35％、1．25％和1．22％。     

联用抗口蹄疫病毒重组多肽及DNA疫苗诱发豚鼠产生特异免疫应答

选择一株O型口蹄病毒（FMDV）外壳蛋白VPI中21－40位及141－160位氨基酸残基两个抗原表位,组成串联结构141－160（20AA）－21－40（20AA）－141－160（20AA）,并与大肠杆菌β－半乳糖苷酶相连,在大肠杆菌中表达了此融合蛋白。同时将编码此融合蛋白的基因克隆进真核表达载体中,构建成重组表达质粒pCDM8FZ1。将pCDM8FZ1DNA与融合蛋白混合,免疫豚鼠一次,观察豚鼠产生免疫应答情况。结果显示,豚鼠可产生抗FMDV中和抗体及特异性T细胞增殖反应,部分豚鼠能抵抗FMDV的攻击,保护率为50％,证明将DNA疫苗与重组多肽疫苗结合起来作一次免疫,是可望用于预防FMDV感染的新途径,值得进一步探索。     

HIV-2 env基因在重组痘苗病毒中的表达

以痘苗病毒复制非必需区血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将人Ⅱ型免疫缺陷病毒ｇｐ１２０和ｇｐ３６基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选，获得了４株重组痘苗病毒，经免疫荧光试验和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测证明，４株重组病毒均能表达目的蛋白。在重组病毒感染早期、晚期、不同株表达量略有不同，表达产物分子量分别约为５７ｋＤａ和４２ｋＤａ，具有良好的     

重组植物毒素gelonin的纯化及性质研究

采用pET28a载体系统在E.coli BL21中进行了植物毒素gelonin的原核表达，产物经SP-Sepharose，Superdex 75二步纯化，获得了电泳纯的重组植物毒素gelonin。将重组的gelonin与从植物种子中提取的天然gelonin进行了Western blot，ELISA，无细胞体系中蛋白质合成抑制实验以及超螺旋DNA裂解研究。结果都表明，重组植物毒素gelonin与天然gelonin具有相似的生物活性。     

淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达

淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307，提取细胞总RNA，采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0．6kb基因片段。构建其原核表达载体，IPTG诱导表达。结果表明，该融合蛋白分子量约48kD，可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。     

镭普克的制备及对小鼠H22肝癌的抑制作用

报道重组别藻蓝蛋白(rAPC,镭普克)表达菌株的20L高密度发酵、镭普克制备及对小鼠H22肝癌抑制作用的实验结果。采用两步发酵法最终OD600为36．18,比一步发酵法的40．16值低,但镭普克表达率是后者的1．8倍,为30．24％,镭普克生物量提高1．62倍。亲合层析结合分子筛层析纯化后,镭普克纯度可达98．03％。对小鼠H22肝癌静脉注射剂量为50mg/kg／d,抑瘤率为62．2％。初步的免疫实验结果表明,镭普克对淋巴B细胞功能具有增强作用。结果提示镭普克大规模生产的潜力和临床应用的可能性。     

恶性疟原虫DNA疫苗免疫效果的评估

以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）为载体,由其基因构建了含有不同时期不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ￣ＡＷＴＥ和ＣＴＢ￣ＮＡＮＰ,前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外,还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位,后者含有子孢子期的Ｂ、Ｔｈ细胞表位。将纯化的质粒免疫Ｂａｌｂ／ｃ纯系小鼠,３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫,免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验     

两个重组质粒在快生型大豆根瘤菌中的稳定性的比较

将两个复制子相同的重组质粒导入快生型大豆根瘤菌中，考察了得到的转移接合子在培养和共生条件下的稳定性。发现带有质粒ＲＫ２ ｐａｒ基因的重组质粒ｐＴ２ＴＸ３Ｋ在快生型大豆根瘤菌中无论在培养还是共生条件下都可以稳定存在，而不带有该基因的重组质粒ｐＣＫ３在两种条件下都有一定程度的丢失。