响应面法优化酶解制备皖鱼皮胶原蛋白活性肽工艺及产物表征

以皖鱼皮为原料,水解度(Degree of Hydrolysis,DH)为评价指标,响应面法优化酶解制备胶原蛋白活性肽工艺,为皖鱼皮胶原蛋白活性肽开发利用提供理论参考。结果表明,最佳制备工艺条件：水解温度50℃、pH 10、加酶量2000U 、料液比1∶3(g/mL),在此条件下进行验证试验,水解度为28.16%。水解液经超滤和喷雾干燥后,得到的水解产物为有苦涩味的白色粉末,主要是小分子寡肽,分子量主要分布在200～1000Da,占比达到82.39%。     

酶解大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽工艺研究

为有效利用大鲵加工副产物大鲵皮,研究了大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用化学发光法,以羟自由基清除率为评价指标,通过单因素试验法,分别研究了酶的种类、酶添加量、酶解pH、温度和时间对大鲵皮胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验进一步优化了大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽的工艺,确定了最适工艺条件:即酶添加量7000U/g,pH 8.5,温度55℃,时间4h,在此工艺条件下,大鲵皮胶原蛋白抗氧化肽清除羟自由基的清除率为83.15%。     

罗非鱼鱼皮胶原蛋白降血压酶解液的制备与活性研究

本文研究了单酶和复合酶水解罗非鱼鱼皮胶原蛋白制备抑制帆管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）的工厂艺条件。通过正交试验确定了菠萝蛋白酶和Alcalase 2．4L蛋白酶单独水解鱼皮胶原蛋白的最适酶解条件。菠萝蛋白酶和Alcalase 2．4L蛋白酶的最适酶解温度，pH，酶，底物，时间，底物浓度分别为45℃，pH4．5，4000U／g，4h，6％和55℃，pH7．5，6000μ／g，2h，4％。在甲．酶水解的基础上，进行复合酶水解实验，结果表明：先采用菠萝蛋白酶水解，再用Alcalase2．4L蛋白酶水解，效果更佳。采用该双酶复合水解工艺，所得水解产物的水解度为30．43％，体外对ACE的抑制率达68．6％。采用Sephadex G-25，HPLC的分离方法对酶解液进行分离纯化，得到了高抑制活力的组分。所得水解原液，Sephadex G-25过柱所得高活力组分的IC50分别为2．82mg／ml利0．65mg／ml。     

汽爆辅助酶解制备鱼皮ACE抑制肽工艺优化

为有效利用鱼皮制备降血压肽,以罗非鱼皮为原料,采用响应面分析法优化汽爆辅助酶解法制备血管紧张素转换酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件。结果表明,汽爆辅助酶解制备鱼皮ACE抑制肽的最优工艺参数为:汽爆压力0.6 MPa、保压时间0.5 min、底物浓度2%、酶底比0.92%、酶解时间2 h、pH值8.4、酶解温度56℃。在此条件下鱼皮酶解产物ACE抑制率理论值为94.97%,实际值为93.16%,其相对分子质量主要分布于307 Da^3323 Da之间。本研究结果为鱼皮降血压肽的高效制备、生物活性等方面的研究提供了理论依据。     

河豚鱼皮胶原蛋白肽的提取及其抗氧化活性的研究

目的:河豚鱼皮含有丰富的胶原蛋白.胶原蛋白及其肽类有多种生理功能.本文研究河豚鱼皮胶原蛋白肽的最佳提取工艺及此肽的抗氧化性.为河豚鱼皮的深入研究提供一些理论依据.方法:采用木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白.通过正交试验确定该酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件,并对此条件下酶解得到的河豚鱼皮胶原蛋白肽进行超滤分离.得到3个不同分子质量范围的肽段.研究其抗氧化性.结果:木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件为:温度45℃,时间2 h,酶加量5 000U/g,pH 6.5,底物质量浓度33.6mg/100mL.在此条件下酶解产生的河豚鱼皮胶原蛋白肽具有显著的清除OH·自由基和DPPH·自由基能力,还具有一定的清除02-·自由基的能力和还原能力.结论:随着河豚鱼皮胶原蛋白肽分子质量的减小,其清除OH·自由基、DPPH·自由基、O2-·自由基的能力及还原性增强.其中,河豚鱼皮胶原蛋白肤清除OH·自由基能力最强.     

鱼鳞鱼皮制备胶原蛋白肽研究进展

鱼类加工副产物——鱼鳞鱼皮富含胶原蛋白肽,其来源丰富、价格低廉、加工简单,是鱼源肽加工企业的首选原料。该文对鱼鳞鱼皮制备胶原蛋白肽的提取方法、分离过程、鉴定及功能方面的研究进展进行综述,并对以鱼鳞鱼皮为主要原料制备美白保湿肽的发展前景进行展望,为其进一步的高值化利用提供参考。     

大口黑鲈鱼皮胶原蛋白肽的制备及抗氧化活性研究

目的：探究酶种类对胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。方法：从大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼皮中提取胶原蛋白,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白,得到碱性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(APP)、中性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(NPP)、木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白肽(PP)、胰蛋白酶酶解胶原蛋白肽(TP),比较其总抗氧化活性、还原活性、对DPPH·、·OH 和O-2·清除能力以及亚铁离子螯合能力和脂质氧化抑制活性。结果：4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽都具有抗氧化活性,且抗氧化能力与胶原蛋白肽浓度呈正相关,其中APP的抗氧化活性最佳,总抗氧化活性和还原活性分别为1.725和0.958,对DPPH·和O-2·清除率分别为56.35%和38.41%。结论：碱性蛋白酶酶解的胶原蛋白肽抗氧化活性更佳。     

酶法水解真鲷鱼皮和鱼鳞制取胶原蛋白肽

以真鲷鱼鱼皮、鱼鳞为材料,研究了酶法制取胶原蛋白肽工艺。以水解度为指标,研究蛋白酶种类、酶解条件对水解度的影响,并采用正交试验对鱼皮、鱼鳞胶原肽制备工艺进行优化。结果表明,采用胰蛋白酶水解鱼皮,在加酶量950 U/g,pH 7.0,温度55℃,料液比1︰8,酶解反应6 h的优化条件下,胶原蛋白时水解度最高,达到29.73%;高压液相色谱(HPLC)分析表明,水解液中甘氨酸含量最高,不含色氨酸,符合胶原蛋白氨基酸特征。     

酶解香菇柄蛋白制备抗氧化肽的工艺研究

以香菇柄蛋白为原料,对其进行酶解以制备具有抗氧化活性的多肽,为香菇柄的精深加工提供理论基础。首先进行蛋白酶的筛选,在最佳蛋白酶为碱性蛋白酶的基础上进行酶解单因素实验,再运用四因素三水平的响应面分析法研究底物浓度、加酶量、pH、温度对提取工艺的影响,以DPPH自由基清除能力为响应值,确定酶解的最优条件为:底物浓度2%,加酶量4700 U/g,pH为8.3,酶解温度为55℃,酶解时间为2.5 h,此条件下的DPPH自由基清除率达到63.2%,即香菇柄多肽具有一定的抗氧化活性,可以为开发香菇柄产品提供依据。      

响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究

以可口革囊星虫为原料提取胶原蛋白,以总抗氧化能力和超氧阴离子清除率为考察指标,通过单因素实验和响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺条件。结果表明,选用酶筛选试验中多肽抗氧化活性较高的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和酸性蛋白酶进行单酶和复合酶试验,最佳方案确定为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解。在单因素实验基础上确定复合酶添加量（U/g）、酶解温度（℃）、酶解pH、酶解时间（h）为自变量,通过响应面法优化并参考实际因素,确定复合酶酶解的最优条件是:复合酶添加量8135 U/g、酶解温度51.6 ℃、酶解pH6.4、酶解时间4.2 h,在此条件下酶解制备的胶原肽总抗氧化能力为(1.333±0.021）μmol/mL,超氧阴离子清除率为78.75%±0.94%。     

酶解燕麦蛋白质制备抗氧化肽工艺研究

通过对Alcalase、Trypsin和Pepsin酶解燕麦麸蛋白所得产物的抗氧化活性和产物得率的研究,确定Alcalase作为酶解燕麦麸蛋白制备抗氧化肽的初步用酶。在Alcalase单酶作用的基础上,研究Alcalase+Trypsin和Alcalase+Pepsin耦合酶解燕麦蛋白对产物活性的影响。通过研究Alcalase对燕麦麸蛋白的酶解速度可知,Alcalase酶解燕麦麸蛋白速度的降低主要是因底物消耗和酶活损失所致。     

酶解异育银鲫制备不同分子量段抗氧化肽的研究

以异育银鲫(Carassius auratus gibelio)蛋白为原料,以酶解产物的DPPH自由基清除率为评价指标,从酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶8种蛋白酶中筛选出风味蛋白酶作为最佳酶解用酶,并通过单因素试验和正交试验确定风味蛋白酶酶解的最佳工艺条件为:加酶量3 000 U/g、底物浓度7%、酶解pH 7.5、酶解温度55℃、酶解时间4 h。在该条件下对异育银鲫的水解度为46.78%,酶解产物的DPPH自由基清除率为90.12%、羟自由基清除率为82.31%、超氧阴离子自由基清除率为79.45%;在此基础上对酶解液进行硫酸铵盐析、活性炭脱腥、超滤膜分段、透析脱盐、浓缩和干燥,得到不同分子量段酶解产物。     

长鳍金枪鱼鱼皮胶原蛋白肽制备工艺的研究

以长鳍金枪鱼鱼皮为原料,采用碱热复合酶三步水解法制备胶原蛋白多肽。以水解度、氮回收率和水解产物分子量为指标,通过单因素和多因素正交设计试验,确定最佳酶解条件。结果表明:碱处理为第一步,鱼皮经过0.1 mol/L Ca(OH)_2反复清洗数次,最后清水冲洗干净;热处理为第二步,鱼皮于水浴锅中90℃处理30 min;酶解为第三步,梯度加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味酶,酶解的最佳工艺条件为:复合酶料比1∶200(g/g),料水比1∶2.5(g/m L),酶解温度55℃,p H为9.0~6.5,酶解总时间为4 h,水解度平均能达到30%,酶解液脱色的最佳条件为,活性炭添加量2%,自然pH,温度70℃,时间30 min,经过浓缩喷雾干燥后的胶原蛋白粉末经过HPLC分析,得到分子量在3 kD以下的多肽占到85%以上。     

海蜇胶原蛋白肽的酶解制备工艺

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,以还原力(RP)和水解度(DH)为指标,采用响应面法研究了酶解温度、酶解时间、pH、料液比、酶添加量对还原力和水解度的影响,得到最佳酶解胶原蛋白的工艺条件;并进一步与复合酶水解工艺进行比较,确定海蜇胶原蛋白肽的最优制备工艺。结果表明:胰蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH8.5、料液比0.50 g/mL、酶添加量3.0%和酶解时间4 h;风味蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH7.5、料液比0.56 g/mL、酶添加量4.0%和酶解时间4 h;进一步进行复合酶实验,结果表明采用风味蛋白酶和胰蛋白酶分别在其最适条件下进行先后酶解获得的酶解液的DH和RP最高,分别为(71.56%±0.0076%)和(0.341±0.0101)。     

鱼皮胶原蛋白及胶原活性肽的研究

近年来,鱼皮胶原蛋白及其活性肽的研究越来越多。不同提取法得到的胶原蛋白的功能性质具有较大差异,而胶原蛋白的功能性质与其结构紧密相关。本文比较了几种主要的胶原蛋白提取方法,探讨了胶原蛋白结构的研究进展,较详细的阐述了鱼皮胶原蛋白、胶原活性肽的应用及其研究前景。      

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源.通过单因素和响应面回归分析.得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2.酶底比为2%(w/w),温度为50℃.优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC50为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能.高效液相排阻色谱(HPSEC)分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽.     

酶法制备鲟鱼皮胶原蛋白多肽及其抗氧化活性研究

该研究以鲟鱼皮为原料利用碱性蛋白酶水解制备胶原蛋白肽,进行了鲟鱼皮基本成分分析,酶解条件优化和酶解产物抗氧化活性研究。结果表明,最佳酶解条件为pH 9,温度55℃,添加酶质量分数3%,酶解时间5 h时水解度为22. 0%。酶解液经超滤分离得到4种不同分子质量范围的胶原蛋白肽组分SSCP-I(分子质量>10 000 Da)、SSCP-II(分子质量=5 000～10 000 Da)、SSCP-Ⅲ(分子质量=1 000～5 000 Da)和SSCP-IV(分子质量<1 000 Da)。其中(分子质量=1 000～5 000 Da) SSCP-Ⅲ对超氧阴离子自由基的清除能力最高,其半抑制清除浓度IC50为5. 938 g/L。该研究为鲟鱼皮的综合加工和高值化利用提供了理论指导。     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2,酶底比为2%（w/w）,温度为50℃。优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC₅₀为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能。高效液相排阻色谱（HPSEC）分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽。      

海棒槌胶原蛋白的酶解工艺及其产物清除自由基活性的研究

本文研究了低值的芋参科海参--海棒槌(Paracaudinachinensvar.)的胶原蛋白肽的制备、分离纯化及其清除自由基的活性。利用菠萝蛋白酶对海棒槌胶原进行酶解,通过正交试验,确定菠萝蛋白酶水解海棒槌胶原蛋白的最佳酶解条件为:酶解温度40℃,加酶量240U/ml,底物浓度18mg/100ml(以羟脯氨酸计),pH5.2,酶解时间为4h。在此试验条件下所得产物对超氧阴离子自由基的清除率可达到52.20%。采用超滤和SephadexG-25凝胶柱对酶解液进行分离纯化,得到清除超氧阴离子和羟基自由基能力较强的组分。     

许氏平鲉鱼皮胶原蛋白与胶原肽的制备及特性研究

目的从许氏平鲉鱼皮中制备胶原蛋白及胶原肽,并对其特性进行初步探讨。方法通过氨基酸组成、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及扫描电镜分析探讨鱼皮胶原蛋白的结构特征;制备不同分子量胶原肽组分SCH 1(Mw2000 U)与SCH 2(Mw2000 U),测定其起泡性、吸水性及对H2O2诱导L929细胞氧化损伤的保护作用。结果氨基酸分析表明鱼皮胶原蛋白亚氨酸含量为16.7%;FTIR表明样品基本保持了天然三螺旋结构;扫描电镜分析显示冷冻干燥胶原蛋白具有多孔状结构。大分子量SCH 1的起泡性较好,而低分子量SCH 2具有较好的吸湿性。SCH对H2O2引起的细胞损伤产生一定的保护作用,并呈现出剂量效应关系,结论许氏平鲉鱼皮胶原蛋白为I型胶原蛋白,其胶原肽具有良好的起泡性与吸湿性,可有效抵御H2O2引起的细胞氧化损伤。