雷公藤甲素丁二酸单酯对A549/DDP细胞的抑制作用研究

研究雷公藤甲素丁二酸单酯(YJ-4)对A549/DDP抑制作用及其机制。以雷公藤甲素为原料,与丁二酸酐在DMAP/Pyridine催化下反应后得到化合物YJ-4,其结构经¹HNMR,¹³CNMR和HR-ESI-MS表征,采用MTT法评价其对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人肺腺癌耐顺铂株(A549/DDP)、人乳腺癌细胞(MCF-7)的体外抗肿瘤活性;不同浓度的化合物YJ-4作用于A549/DDP细胞后,DAPI染色法检测细胞核状态,PI染色法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;分子对接软件AutoDock来评价化合物YJ-4与MDM2蛋白结合的能力。化合物YJ-4对A549/DDP((33.32±3.55)μmol/L)、A549((4.31±1.01)μmol/L)、MCF-7((16.08±2.63)μmol/L)细胞株均具有良好的细胞毒性,是阳性对照药顺铂的数倍,且通过阻滞A549/DDP细胞周期G₂/M期,从而诱导细胞凋亡,与MDM2的GLY-16氨基酸残基形成氢键(d=1.9?...     

新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

以鬼臼毒素为原料，与N-丁二酸单取代-5-溴吲唑在DMAP/DCC催化下反应得到目标化合物。采用MTT法评价其对A549细胞、A549/DDP细胞、MCF-7细胞的体外抗肿瘤活性，Autodock评价新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物与微管蛋白秋水仙碱作用位点的结合能力。结果表明新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物对MCF-7细胞[IC₅₀ =（38.29±2.45）μM]、A549/DDP细胞[IC₅₀ =（82.43±2.35）μM]具有一定的抑制活性，且对A549/DDP耐药细胞具有较好的选择性，RF值小于1,对与微管蛋白秋水仙碱作用位点的ASN-101氨基酸残基与形成氢键（d=2.3?）,结合能（affinity）为-11.2 kcal/mol,能够较好的结合。     

新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

以鬼臼毒素为原料,与N-丁二酸单取代-5-溴吲唑在DMAP/DCC催化下反应得到目标化合物。采用MTT法评价其对A549细胞、A549/DDP细胞、MCF-7细胞的体外抗肿瘤活性,Autodock评价新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物与微管蛋白秋水仙碱作用位点的结合能力。结果表明新型吲唑拼接鬼臼毒素衍生物对MCF-7细胞[IC₅₀ =（38.29±2.45）μM]、A549/DDP细胞[IC₅₀ =（82.43±2.35）μM]具有一定的抑制活性,且对A549/DDP耐药细胞具有较好的选择性,RF值小于1,对与微管蛋白秋水仙碱作用位点的ASN-101氨基酸残基与形成氢键（d=2.3?）,结合能（affinity）为-11.2 kcal/mol,能够较好的结合。     

芦荟苷联合顺铂对A549细胞增殖和凋亡的影响

探讨抗肿瘤天然药物芦荟苷(Aloin)与一线化疗药物顺铂(Cisplatin,CDDP)联合对体外培养的肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。采用MTT法检测用不同浓度的顺铂、芦荟苷单独或联合作用于A549细胞后对其相关细胞活力的影响。用流式细胞术分析Aloin-CDDP联用对A549细胞周期、细胞凋亡以及线粒体膜电位的变化。采用Western blot法检测Cleave-Caspase 9、Cleave-Caspase 3蛋白表达的变化。MTT结果显示芦荟苷(200μmol/L)和顺铂(16μg/mL)联用具有协同作用,可以抑制A549细胞增殖并可上调Cleave-Caspase 9、Cleave-Caspase 3蛋白的表达。芦荟苷与顺铂联合作用于A549细胞后,芦荟苷能有效降低顺铂的使用浓度,并提升其诱导细胞凋亡的能力。     

拓扑替康对COC1/DDP凋亡诱导作用及分子机制的初步探讨

目的探讨拓扑替康(TPT)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的杀伤和诱导凋亡活性及其作用机制。方法MTT法与软琼脂克隆形成测定TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的杀伤效应;流式细胞仪研究TPT对靶细胞的早期凋亡诱导作用;透射电镜观察细胞的凋亡形态;采用Western Blot印迹杂交法以检测TPT对凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达的影响。结果TPT对COC1/DDP细胞有明显细胞毒性作用,有明显的剂量依赖性;COC1/DDP细胞在TPT作用后出现特征性凋亡形态特征,且对早期凋亡的诱导作用呈剂量依赖性(P<0.05)。经TPT作用后,COC1/DDP细胞内bax蛋白增加,而bcl-2蛋白不表达,bax/bcl-2比值增加。结论TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能与bax蛋白高表达及bcl-2蛋白不表达有关。     

洋甘菊总黄酮体外抗肿瘤活性研究

采用CCK-8法研究了洋甘菊总黄酮对人肺癌细胞A549、人胃癌细胞AGS、人宫颈癌细胞HeLa及SiHa、人食管癌细胞Eca-109及TE-1、人肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制作用,并采用流式细胞术检测了洋甘菊总黄酮对SiHa细胞周期分布及凋亡率的影响。结果表明,与正常对照组比较,洋甘菊总黄酮对7种肿瘤细胞增殖均有不同程度的抑制作用,其中对SiHa细胞的抑制作用最强,作用48 h的IC₅₀值为(97.74±4.02)μg·mL^-1;洋甘菊总黄酮低、中剂量组(25μg·mL^-1、50μg·mL^-1)干预SiHa细胞24 h后,细胞阻滞在G₀/G₁期,总凋亡率由5.88%±0.29%分别升至11.57%±0.27%、18.08%±1.63%,说明低剂量洋甘菊总黄酮可抑制SiHa细胞增殖,诱导SiHa细胞凋亡。     

氯桥联四核Bi(Ⅲ)配合物的合成和晶体结构及其抗癌活性

以2-吡啶甲醛和3-吡咯-氨基硫脲合成了缩氨基硫脲配体，再与氯化铋反应合成了铋配合物。通过单晶衍射获得其单晶结构，每个铋配合物分子里面包含四个配体和四个铋中心。通过MTT实验测试了铋配合物在体外对多种癌细胞株(人膀胱癌细胞株T24、人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株MGC-803和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231)的抗肿瘤活性。结果显示铋配合物展现出良好的抗肿瘤活性，且活性优于顺铂。     

含氟3-羟基吲哚-2-酮衍生物的合成及抗癌活性

通过Aldol缩合反应,在3-羟基吲哚-2-酮结构中引入不同的药效团,设计并合成了结构新颖的含氟3-羟基吲哚-2-酮衍生物,其结构通过1HNMR、13CNMR和HRMS确证。目标产物对非小细胞肺癌A549细胞的体外抑制作用通过CCK-8法测定,结果显示,化合物IIIe和IIIf具有较强的抗肿瘤增殖活性,IC50值分别为19.494和24.804 μmol/L。流式细胞术和Hoechst 33342染色实验结果表明,化合物IIIe能够将A549细胞周期阻滞在G2期,并诱导细胞凋亡。此外,Western blot结果还显示,化合物IIIe能够上调P53和Cleaved Caspase-3的表达,并下调Survivin的表达。分子对接实验表明,化合物IIIe能够结合到PI3K-δ的ATP口袋中。结果表明,化合物IIIe是具有潜在研究价值的抗非小细胞肺癌先导化合物。     

青蒿素衍生物KPC-L006对肺癌PC9细胞的抗肿瘤作用

研究青蒿素衍生物KPC-L006的体外抗肺癌活性.以不同浓度KPC-L006处理正常培养的肺癌PC9细胞.采用MTS方法检测KPC-L006处理后对PC9细胞活力的影响;进行细胞划痕实验评价药物对细胞迁移的抑制作用;AnnexinV/PI实验检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白水平的变化.KPC-L006...     

香豆素类衍生物的设计、合成及抗肿瘤活性研究

以不同取代基的哌嗪为起始原料,经过酯化、取代、还原、酰化反应,合成了9种未见报道的香豆素类衍生物,其结构经~1 HNMR、~(13) CNMR表征。以MCF-7、HeLa、MDA123、A549四种癌细胞为测试细胞株,通过MTT法测定目标化合物的体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明,大部分目标化合物表现出了良好的抗肿瘤活性;与阳性对照吉非替尼相比,化合物Ⅳe表现出了较好的抗肿瘤活性,对MCF-7的IC_(50)为10.08μmol·L~(-1),诱导MCF-7细胞凋亡。     

雷公藤红素对卵巢癌SKOV3/DDP细胞的抑制作用及其机制

目的探讨雷公藤红素(celastrol)对卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞SKOV3/DDP的抑制作用及其机制。方法 MTT法检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞增殖的影响;显微镜下观察不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞形态的影响;流式细胞术检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞周期及凋亡的影响;细胞划痕试验检测不同浓度雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞迁移能力的影响;Transwell体外侵袭试验检测不同雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测SKOV3/DDP细胞中凋亡及侵袭相关蛋白的表达水平。结果经雷公藤红素作用后,SKOV3/DDP细胞的增殖抑制率显著上升(P0.05);镜下观察SKOV3/DDP细胞数目显著减少(P0.05);G1期细胞比例明显升高(P0.05);细胞凋亡率显著增加(P0.05);细胞迁移距离明显减小(P0.05);穿膜细胞数目明显减少(P0.05);SKOV3/DDP细胞中Cyclin A、p-AKT、NF-KB、MMP-2、MMP-9和P-GP蛋白的表达水平均明显下降(P0.05)。结论雷公藤红素对SKOV3/DDP细胞抑制作用显著,为临床晚期失去手术机会卵巢癌患者的治疗提供了参考。     

含氟3-羟基吲哚-2-酮衍生物的合成及抗癌活性

通过Aldol缩合反应,在3-羟基吲哚-2-酮结构中引入不同的药效基团,设计并合成了含氟3-羟基吲哚-2-酮衍生物,其结构通过~1HNMR、~(13)CNMR和HRMS确证。目标产物对非小细胞肺癌A549细胞的体外抑制作用通过CCK-8法测定。结果显示,化合物Ⅲe和Ⅲf具有较强的抗肿瘤增殖活性,IC50分别为19.494和24.804μmol/L。流式细胞术和Hoechst 33342染色实验结果表明,化合物Ⅲe能够将A549细胞周期阻滞在G2期,并诱导细胞凋亡。此外,蛋白质免疫印迹法(Western blot)结果还显示,化合物Ⅲe能够上调蛋白P53和Cleaved Caspase-3的表达,并下调蛋白Survivin的表达。分子对接实验表明,化合物Ⅲe能够结合到磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K-δ)的ATP口袋中。结果表明,化合物Ⅲe是具有潜在研究价值的抗非小细胞肺癌先导化合物。     

紫草素衍生物诱导肺癌细胞A549细胞周期阻滞及细胞凋亡

以1,4-二甲氧基苯和马来酸酐为原料,合成5,8-二甲氧基萘-1,4-二酮,通过加成反应分别制备亚砜和氨基的2-取代萘醌类衍生物a和b,采用MTT实验检测两种化合物诱导肺癌细胞A549细胞周期阻滞及细胞活性,探讨二者的结构与活性关系,并阐述其导致细胞周期阻滞及细胞凋亡的具体作用机制。结果证明,化合物a通过激活抑癌基因P53及丝裂原活化蛋白激酶信号通路对A549细胞增殖有显著抑制作用,同时可以显著促进细胞凋亡;而化合物b并无显著作用。     

蒎烷基噻唑腙类衍生物的合成及其抗肿瘤活性

以诺蒎酮为原料,经过加成、缩合、环化等反应,合成出蒎烷基噻唑腙衍生物4a～4n,采用FTIR、1HNMR、13CNMR和HRMS对化合物的结构进行了表征。考察了化合物4a～4n对人肝癌细胞(HepG2)、人多发性骨髓瘤细胞(RPMI-8226)、人肺癌细胞(A549)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的抗肿瘤活性。实验结果表明,化合物4a的抗肿瘤活性最强,其对Hep G2、8226、A549和231细胞的IC50分别低至5.8、8.8、7.1和10.6μmol/L;化合物4c的抗肿瘤活性也较强,其IC50分别为8.9、8.7、7.3和9.7μmol/L。细胞凋亡和周期实验数据显示,当化合物4a浓度从0增加到40μmol/L时,A549细胞的总凋亡率从6.55%增加到47.20%,G2/M期的细胞数量从13.50%上升至51.72%。以上结果表明,化合物4a能够诱导A549细胞凋亡,并将细胞有丝分裂周期阻滞在G2/M期。     

基于Click反应的5-氟尿嘧啶与4-苯胺喹唑啉骨架的拼接合成及其抗肿瘤活性评价

以3种羟基喹唑啉-4-酮为原料,经乙酰化、氯化、取代、水解、烷基化反应得到6个末端含有端炔取代的4-苯胺喹唑啉类化合物,同时以5-氟尿嘧啶为原料,经羰基保护、烷基化、叠氮化反应制得1-(3-叠氮丙基)-5-氟尿嘧啶,最后再利用药物拼合原理将其与不同含有端炔取代的4-苯胺喹唑啉类化合物或厄洛替尼通过Click反应合成了7个5-氟尿嘧啶与4-苯胺喹唑啉骨架的新型拼接产物,其结构通过¹HNMR和HR-MS确证。以厄洛替尼为阳性对照,采用MTT法初步评价目标化合物对人肝癌细胞HepG2、人非小细胞肺癌细胞A549、人宫颈癌细胞Hela、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺腺癌耐顺铂株细胞A549/DDP的抑制作用,同时采用ELISA法检测目标产物对表皮生长因子(EGFR)的抑制能力。结果显示,1-(3-(4-(((4-((4-碘苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)-5-氟尿嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮对HepG2、A549、A549/DDP细胞的抑制作用分别是阳性对照厄洛替尼的6.5倍、1.8倍、2.8倍,对Hela、MC...     

蒎烷基噻唑腙类衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

以诺蒎酮为原料,经过加成、缩合、环化等反应,合成出蒎烷基噻唑腙衍生物4a～4n,采用FTIR、1HNMR、13CNMR和HRMS对化合物的结构进行了表征。考察了化合物4a～4n对人肝癌细胞(HepG2)、人多发性骨髓瘤细胞(RPMI-8226)、人肺癌细胞(A549)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的抗肿瘤活性。实验结果表明,化合物4a的抗肿瘤活性最强,其对Hep G2、8226、A549和231细胞的IC50分别低至5.8、8.8、7.1和10.6μmol/L;化合物4c的抗肿瘤活性也较强,其IC50分别为8.9、8.7、7.3和9.7μmol/L。细胞凋亡和周期实验数据显示,当化合物4a浓度从0增加到40μmol/L时,A549细胞的总凋亡率从6.55%增加到47.20%,G2/M期的细胞数量从13.50%上升至51.72%。以上结果表明,化合物4a能够诱导A549细胞凋亡,并将细胞有丝分裂周期阻滞在G2/M期。     

YKL-40转染对前列腺癌LNcap细胞增殖及侵袭活性的影响

目的探讨外源性YKL-40基因转染对前列腺癌LNcap细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性的影响。方法 RT-PCR法检测前列腺癌细胞LNcap、PC-3、DU-145 YKL-40基因内源性表达情况;用pcDNA3.1-YKL-40质粒转染LNcap细胞,分别经MTT法、Boyden小室法及黏附试验检测转染前后细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性,并进行体外药敏试验。结果仅DU-145细胞可内源性表达YKL-40基因;pcDNA3.1-YKL-40转染的LNcap细胞在第2～5天的A490值均显著高于对照组(P<0.05),其侵袭(75.11±4.40)和迁移穿膜细胞数(133.00±5.07)及黏附率(107.57%)均显著高于对照组(P<0.05),对5-FU、顺铂和依托泊苷的IC50值分别为(31.15±0.43)、(4.15±0.13)和(55.22±0.57)μmol/L,均显著高于对照组(P<0.05)。结论 YKL-40基因能促进LNcap细胞增殖,提高细胞侵袭、迁移及黏附活性,并使其对5-FU、顺铂和依托泊苷具有一定的耐药性。     

Nutlins类似物NL32对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨新型小分子Nutlins结构类似物NL32在体外对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度NL32(100、33、11、3.7、1.2、0.4、0.14μmol/L)对A549细胞增殖的影响,并计算其半数致死浓度(IC50);流式细胞术检测NL32对A549细胞凋亡及细胞周期的影响;Western blot法检测NL32对A549细胞p53蛋白及其下游蛋白p21表达的影响。结果不同浓度的NL32对A549细胞的增殖均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性,其对A549细胞的IC50为15.9μmol/L;NL32可诱导A549细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2期,且呈剂量依赖性;NL32能上调A549细胞p53和p21蛋白的表达。结论 NL32能有效地以浓度依赖的方式抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞发生G2期周期阻滞,NL32上调p53和p21蛋白的表达可能是其引发A549细胞周期阻滞和凋亡的原因之一。     

6-[2-（1,2,4,5-四嗪-3-基）肼基]-1,3,5-三嗪类化合物的合成和抗肿瘤活性研究

以3,6-二（3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基）-1,2,4,5-四嗪为原料,与水合肼反应,得到3-取代-6-肼基-1,2,4,5-四嗪,进一步与三聚氯氰和胺反应,得到6-[2-（1,2,4,5-四嗪-3-基）肼基]-1,3,5-三嗪类化合物,通过元素分析、1HNMR、IR和MS对这些化合物进行了表征;并进一步将此类化合物进行体外人绒毛膜癌细胞株Bewo、子宫内膜癌细胞株Ishikawa、人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7、人白血病细胞株HL-60的测试,以顺铂为对照,发现此类化合物具有一定的体外抗肿瘤活性,值得进一步研究.     

紫杉醇侧链衍生物合成及其抗肿瘤活性

利用3-酰胺基取代氧化吲哚与乙醛酸酯发生Aldol反应,合成了系列未见文献报道的紫杉醇侧链苯基异丝氨酸衍生物3a~3h,产率在71%~99%之间,研究了取代基的空间位阻效应对反应非对映选择性的影响。采用1H NMR,13C NMR和HRMS对化合物3a~3h进行结构表征。化合物3a~3h对人肺癌细胞株(A549)和人白血病细胞株(K562)的抑制活性采用MTT法进行测定。体外抗肿瘤活性研究表明:化合物3a~3h对K562和A549细胞株均有抗增殖活性,其中化合物3b、3f、3g和3h对K562具有较好的抑制活性;化合物3b、3c和3f对A549具有较好的抑制活性。