响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

豆清液不同超滤组分体外抗氧化活性研究

本文是以豆清液为研究对象,研究不同孔径的超滤膜处理后其抗氧化活性。研究结果表明:豆清液不同超滤组分对DPPH自由基清除率,结果得出,除5 kDa超滤组分不显著外,其余处理均达到差异显著水平,最高清除率为91.81%±3.43%;对OH自由基的清除率除3 kDa超滤组分不显著外,其余处理均达到差异显著水平,最高清除率为;94.72%±3.36%;10 kDa超滤膜组分对ABTS自由基清除率最高,为99.58%±0.08%。本研究为开发豆清液不同超滤组分提供理论依据。     

蛋清蛋白肽体外抗氧化作用模式的研究

目的 研究蛋清蛋白肽抗氧化作用模式。方法 利用超滤技术分离蛋清蛋白木瓜蛋白酶酶解产物; 采用Fenton体系、邻苯三酚自氧化体系和亚油酸自氧化体系分别测定超滤各组分清除羟自由基、超氧阴离子及抑制脂质过氧化的能力, 同时测定各组分对二苯代苦味肼基自由基清除能力(DPPH自由基)、还原能力及对猪胎儿成纤维细胞(porcine embryonic fibroblast, PEF)过氧化损伤的保护作用。结果 超滤各组分中分子量小于3 kDa组分(蛋清蛋白酶解产物-Ⅲ, egg white protein hydrolysate, EWPH-Ⅲ)占蛋清蛋白酶解产物(EWPHs)总量的50.06%。EWPH的抗氧化活性随分子量的降低而增强(P<0.05), 其中EWPH-Ⅲ在浓度为5 mg/mL时, 对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除率分别为52.86%、35.05%和78.74%, 对亚油酸氧化的抑制率为74.57%。在浓度为2.5 mg/mL时, PEF细胞存活率达到70.06%。结论 蛋清蛋白肽具有较强的抗氧化活性且分子量越小, 抗氧化活性越强, 可以作为氢供体、自由基稳定剂和金属离子螯合剂来抑制过氧化作用。     

果胶多糖水热法降解及其产物体外抗氧化性评价

采用水热法降解商品果胶多糖,并对其降解产物的抗氧化活性进行评价。结果表明,水热法降解果胶多糖的最优工艺条件为水热处理温度140 ℃、水热处理时间30 min、pH 6;在此条件下,果胶多糖降解产物得率达46.2%。在此基础上,采用乙醇分级沉淀法对果胶多糖水热处理液进行分离,得到3 种不同分子质量范围的果胶多糖降解产物（S1、S2和S3）,其重均分子质量分别为13.4、7.5 kDa和5.7 kDa。以商品果胶多糖和3 种降解产物为研究对象,进行抗氧化性评价,结果表明,S1组分对1,1-二苯基-2-苦基肼自由基的清除率达49.8%,是商品果胶的4 倍;S3组分对超氧阴离子自由基的清除率达58.7%,是商品果胶的10 倍。说明水热降解果胶多糖可显著提高其抗氧化活性,为果渣废弃物的高效利用提供理论依据。     

玉米谷蛋白抗氧化肽的分离纯化与活性研究

采用Alcalase蛋白酶酶解从玉米脱脂蛋白粉中分离得到的玉米谷蛋白,对酶解产物采用超滤、凝胶过滤层析和高效液相色谱法分离纯化玉米谷蛋白抗氧化肽,并研究其抗氧化活性。结果表明,Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白获得的抗氧化肽分子量主要集中在低于1 kDa,其DPPH自由基和羟自由基清除率分别为80.46%、81.36%。凝胶过滤层析得到抗氧化活性较高的组分P6、P7和P8,其DPPH自由基清除率分别为32.05%、24.43%、14.19%,多肽含量分别为0.638、0.253、0.158 mg/mL。高效液相色谱对这3个组分进一步分离纯化分别得到主要组分。     

黑木耳多糖的降解及其产物抗氧化性

采用水提醇沉法提取黑木耳多糖（Auricularia auricula polysaccharide,AAP）,用三氟乙酸（trifluoroacetic acid,TFA）降解黑木耳多糖,经单因素和响应面试验优化降解条件;纯化后多糖采用高效凝胶渗透色谱、红外光谱、高效液相色谱测定多糖分子量、红外谱图及单糖组成并测定多糖的体外抗氧化活性。结果表明：TFA浓度为0.8 mol/L、温度为78.2℃、降解2.1 h,降解黑木耳多糖的DPPH自由基清除率为70.37%。降解后黑木耳多糖分子量由148.2 kDa变为37.5 kDa,特征官能团结构及单糖组成无明显变化,为分子修饰黑木耳多糖提供试验基础。     

响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及酶解产物的抗氧化活性

以珍珠龙胆石斑鱼肉为原料,利用蛋白酶酶解制备生物活性肽。以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化制备工艺。并采用超滤法对酶解产物进行分离纯化,同时进行抗氧化活性探究。结果表明:珍珠龙胆石斑鱼肉酶解工艺条件为:采用风味蛋白酶,酶添加量1050 U/g,在pH7.0、53℃、料水比1:3.5条件下酶解5.5 h,水解度为9.99%±0.39%。酶解产物与超滤组分均具有较强DPPH自由基清除能力,其IC₅₀值在0.63~0.88 mg/mL之间;EH-2(5~8 kDa)和EH-3(3~5 kDa)有较强的羟基自由基清除能力,其IC₅₀值分别为16.94和16.38 mg/mL;酶解产物与超滤组分均具有还原能力,且酶解产物还原能力最佳。优化的珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺合理且可行,其酶解产物与超滤组分具有较强的抗氧化性,可作为功能食品的基料应用。     

紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究

应用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解紫花芸豆清蛋白,并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(1 kDa、1～3 kDa、3～5 kDa和5 kDa);评价水解物和其膜分离组分的抗氧化活性(DPPH自由基清除率、还原力、羟自由基抑制率、亚铁离子螯合能力和ABTS自由基清除率)。结果表明,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶均能显著提高紫花芸豆清蛋白的抗氧化活性。其中ABTS自由基清除率、羟自由基和亚铁离子螯合能力提高较大,但是碱性蛋白酶降低了芸豆清蛋白的还原力。经过超滤膜分离后,不同分子量大小的各组分均具有一定的抗氧化活性,但是各组分的抗氧化能力不同, 1 kDa以下组分具有更佳的抗氧化活性,可进一步分离并鉴定获得单一抗氧化肽段,从而用于功能食品和保健品的开发。     

红枣多糖降解条件优化及抗氧化活性

利用超声波辅助H₂O₂-VC降解红枣多糖,以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面优化得到最佳降解条件为超声时间65 min、H₂O₂-VC浓度10 mmol/L、降解温度51℃,该条件下获得的降解产物的DPPH自由基清除率为81.76%,得率为72.16%,降解后总糖质量分数增加。体外抗氧化试验结果表明,降解能提高红枣多糖抗氧化活性。     

大豆球蛋白酶解物的分离及其抗氧化活性研究

以7S和11S大豆球蛋白为原料,选用Alcalase碱性蛋白酶在其最佳酶解条件下进行酶解,对酶解物进行超滤分离纯化抗氧化肽,并对其各组分进行保护系数和对·DPPH（1,1-二苯基苦酰基苯肼）自由基清除率的研究。结果显示：7S和11S大豆球蛋白Alcalase碱性蛋白酶酶解物经超滤后所得分子量小于5kDa,组分保护系数分别为2.38和2.21,其·DPPH自由基清除能力分别为75.63%和73.56%。并经高效液相色谱分析该组分的分子量分布在1000Da以下的含量最多,7S和11S酶解物超滤后组分分子量小于1000Da组分分别占81.13%占87.84%。     

蛋清抗氧化肽分离纯化及结构鉴定

为了获得高活性、高纯度的蛋清抗氧化肽,以蛋清酶解物为原料,依次釆用超滤、离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化抗氧化活性较强的肽段,运用基质辅助激光解吸离子化质谱解析肽链的氨基酸序列。结果表明:超滤法分离纯化EWPH所得的三个组分中,EWPH-Ⅲ(M_W<3 kDa)组分的DPPH自由基清除率最高,达到79.62%。离子交换层析分离纯化EWPH-III所得到的碱性组分B的DPPH自由基清除率最高,达到82.05%。凝胶过滤色谱分离EWPH-III-B所得到4组分中E组分的DPPH自由基清除率最高,为88.49%。高活性高纯度EWPH-III-B-E组分的相对分子质量为237.575,该二肽的氨基酸序列为丙氨酸-甲硫氨酸。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

不同处理牛肉预煮汁中肌肽含量与抗氧化研究

牛肉预煮汁是目前熟肉制品加工环节的主要副产物,本研究对牛肉预煮汁进行超滤和去离子两种方法处理,采用DPPH法和微生物法测定处理后牛肉预煮汁的抗氧化效果。结果显示:10～100mmol/L的肌肽标准溶液对DPPH自由基有显著的清除能力(P<0.05),肌肽标准溶液浓度与清除率呈高度正相关性r=0.9958;牛肉预煮汁对DPPH自由基具有很强的清除效果,其中,预煮牛肉汁超滤液浓度与清除率呈高度正相关性r=0.9995,而预煮牛肉汁去离子液浓度与清除率呈高度正相关性r=0.9641;从抑菌效应考察牛肉预煮汁的表观抗氧化率得出:牛肉预煮汁的表观抗氧化率随着汁液中肌肽含量的递增呈现极强的正相关性,预煮牛肉汁超滤液与表观抗氧化率相关系数达到0.9977,且预煮牛肉汁超滤液的表观抗氧化率弱于肌肽标准溶液,肌肽标准溶液的抗氧化率又弱于VC,而VC的抗氧化率弱于茶多酚。结论:牛肉预煮汁含有除肌肽以外的更丰富的抗氧化性成分,具有比纯肌肽标准溶液更好的抗氧化效果。     

信阳毛尖茶末多糖的分离纯化和体外抗氧化活性研究

为实现废弃茶叶资源的再利用以及探究信阳毛尖茶叶末活性多糖的体外抗氧化活性,本研究首先利用不同的乙醇终浓度沉淀优化毛尖茶粗多糖提取,然后通过DEAE-52纤维素和Sephadex-100葡聚糖凝胶分级两次纯化,并进行纯度鉴定、分子量的测定、红外光谱分析以及体外抗氧化活性的测定等。研究结果表明,90%的乙醇终浓度得率最高,为2.47%;两次分级纯化后得到XPS-5B,纯度分别为92.4%;XPS-5B符合活性植物多糖结构特征,为β-型糖苷键多糖,分子量为41208 Da;XPS-5B体外抗氧化活性随着组分浓度的增加而逐渐增强,当XPS-5B浓度为1.20 mg/mL时对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为89.18%、90.62%,总还原力吸光值为0.536,与未纯化的毛尖粗多糖相比,具有较强的抗氧化活性。     

黑木耳中多糖和类黄酮的隔氧提取及其协同抗氧化作用

采用隔氧与超声波辅助相结合方式提取黑木耳中多糖和类黄酮,研究复配比例、复配液浓度、降温过程和反应时间对DPPH自由基和羟自由基清除能力的影响,并评价黑木耳多糖与类黄酮的协同抗氧化作用。结果表明,隔氧超声提取的黑木耳多糖和类黄酮含量较高,分别为3.85%和4.2 mg/100 g,两者抗氧化能力均显著(p<0.05)高于有氧超声提取法。黑木耳多糖和类黄酮复配比例为7:3时,复配液对DPPH自由基清除率达到95%,对羟自由基清除率为62%。黑木耳多糖和类黄酮复配液浓度、反应时间与DPPH自由基清除能力显著正相关(p<0.05)。复配液浓度、反应温度与羟自由基清除能力显著正相关(p<0.05)。黑木耳多糖和类黄酮复配品可提高对DPPH自由基和羟自由基清除效率,具有协同抗氧化作用。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

绿茶多糖提取工艺优化及其抗氧化活性分析

目的:优化绿茶粗多糖的提取工艺,纯化多糖并分析其结构和抗氧化活性。方法:通过单因素实验结合响应面分析的方法,优化提取工艺,采用液相色谱、气相色谱和红外光谱分析多糖结构,并通过体外抗氧化实验研究其抗氧化活性。结果:多糖最佳提取条件为:液料比30:1 mL/g,提取温度60 ℃,提取时间70 min。此条件下,绿茶多糖的得率可达10.56%。多糖结构分析结果表明,其总糖、蛋白质和糖醛酸的比例分别为90.75%±3.69%、0.92%±0.09%和0.82%±0.07%,分子量约为7.3 kDa,主要由葡萄糖和半乳糖组成（摩尔比1.00:0.13）。体外抗氧化实验结果表明,在2 mg/mL浓度下,GTP对ABTS+自由基、DPPH自由基和羟基自由基（OH·）清除率分别为39.8%、72.2%和32.5%。结论:本工艺中,绿茶多糖得率高,分子量低,且具有较高的抗氧化活性。