枯草芽孢杆菌产纤溶酶发酵条件的研究

在实验室筛选到一株产纤溶酶较强的枯草芽孢杆菌，通过研究发现其最适产酶的发酵条件为：ρ（葡萄糖）＝20g/L、ρ(豆渣）＝60g/L、ph7.0、温度37℃、种龄24h、接种量10％。发酵第四天产酶最高，最大产酶量可达713.11IU/mL。     

枯草芽孢杆菌产纤溶酶发酵条件的研究

在实验室筛选到一株产纤溶酶较强的枯草芽孢杆菌,通过研究发现其最适产酶的发酵条件为:ρ(葡萄糖)=20g/L、ρ(豆渣)=60g/L、pH7.0、温度37℃、种龄24h、接种量10％。发酵第四天产酶最高,最大产酶量可达713.11IU/mL。     

产纤溶酶枯草芽孢杆菌发酵条件的研究

本实验室筛选到一株产纤溶酶较强的枯草芽孢杆菌,通过研究发现,其最适产酶的发酵条件为:葡萄糖2%、豆渣6%、pH7.0、温度37℃、种龄24h、接种量10%。发酵第4d产酶最高,最大产酶量可达713.11IU/mL。     

产纤溶酶枯草芽孢杆菌发酵条件的研究

本实验室筛选到一株产纤溶酶较强的枯草芽孢杆菌,通过研究发现,其最适产酶的发酵条件为:葡萄糖2%、豆渣6%、pH7.0、温度37℃、种龄24h、接种量10%。发酵第4d产酶最高,最大产酶量可达713.11IU/mL。      

枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化及性质研究

以从牛肉酱中筛选的1株高产纤溶酶的枯草芽孢杆菌为材料,进行发酵产酶。其发酵液经过硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、C M SepharoseCL-6B离子交换层析和电泳制备,得到电泳纯的枯草芽孢杆菌纤溶酶;其分子质量为32.5ku;pI10.9～11.8;具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用;胰蛋白酶对此酶无降解作用,对其纤溶活性无影响;该酶在pH4.0～13.0稳定,对温度的适应范围较广。     

两步固态发酵生产豆豉纤溶酶的研究

枯草芽孢杆菌DC-12是从豆豉中筛选得到的高产纤溶酶菌株。以黑豆为原料,曲霉前发酵制得豆豉半成品,研究以该半成品为基质的豆豉纤溶酶的固态发酵条件优化。结果表明,枯草芽孢杆菌DC-12的最佳固态发酵条件为:豆豉半成品35g/250mL三角瓶,葡萄糖8.0%,初始含水量1.2mL/g(豆豉半成品),初始pH值7.0,接种量12%,培养温度30℃,培养时间84h,优化条件下的平均产酶量达1427 IU·g-1(豆豉半成品),为未优化前酶活的3.60倍。     

海洋纤溶酶高产菌株的选育及产酶条件优化

以海洋枯草芽孢杆菌FA-7为出发菌株,经紫外诱变获得一株遗传稳定性良好的高产纤溶酶菌株Y-22,并对该菌株的发酵培养基和发酵条件进行优化,确定菌株Y-22的最佳产酶条件为可溶性淀粉4％,黄豆粕粉2．5％,CaCl20．025％,MgSO4·7H：00．35％,吐温-80O．15％;接种量4％,装液量50mt：250mL,初始pH值为5．5,发酵温度30℃,180r／min振荡培养96h。在此条件下,菌株Y-22的发酵液粗酶酶活为（910±11．3）1U／mL,是出发菌株的3．05倍。     

枯草芽孢杆菌产原果胶酶发酵条件研究

原果胶酶(Protopectinase)是可以催化原果胶水解的酶类,广泛用于果胶生产、单细胞食品制备和棉织品的生化精炼之中。实验对影响枯草芽孢杆菌XZ2(BacillussubtilisXZ2)摇瓶发酵生产原果胶酶的相关因子:豆粕粉的水提时间、水提液浓度、磷酸盐浓度、金属离子、发酵培养基初始pH值、接种量和接种龄等采用单因素试验进行了研究,在单因素试验基础之上,选取pH、接种量、Mg2 、磷酸盐和转速等因素进行正交试验,结果表明发酵培养基初始pH和磷酸盐缓冲液浓度对产酶影响显著。当发酵初始pH7.5,接种量10%,MgSO4·7H2O0.04%,磷酸盐缓冲液浓度为0.20mol/L,摇床转速为120r/min的摇瓶发酵条件下,产酶酶活最高为16.71U/ml。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BJ3-2发酵薏米高产川芎嗪和溶纤酶体系优化

前期初探发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BJ3-2发酵精薏米可高产川芎嗪[2.97 mg/g干基(dry weight,DW)]和纤溶酶(720.84 U/g).该研究以糙薏米、精薏米和碎薏米为原料,以B.subtilis BJ3-2为发酵菌株,通过单因素及Box-Behnken试验构建高产川芎嗪...     

枯草芽孢杆菌发酵火麻仁粕的研究

采用枯草芽孢杆菌液体发酵火麻仁粕.结果表明,底物浓度为5％(w/w)、枯草芽孢杆菌添加量15％(v/v)、转速180 r/min、碳源为1.5％ (w/v)红糖、无机氮源NH4 Cl 1％ (w/v)、0.1％MnSO4·H2O、发酵温度37℃、发酵30 h时多肽得率最高达50.5％,而发酵42 h时则游离氨基肽氮最高,达5.38％,氨基酸分析,此时发酵物的游离精氨酸占游离氨基酸的28.9％,占总蛋白质的4.44％.枯草芽孢杆菌是多肽或调味料潜在的生产应用方法.     

海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化

为获得纤溶酶高产菌株及其最优发酵条件,以海洋环境来源的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H-A-03为出发菌株,经过60Co辐射诱变获得了一株遗传稳定性好的纤溶酶高产菌株F8-C,其酶活力较出发菌株提高28.78%。采用统计学优化方法获得了组分更简单、用量更少、更利于菌株产酶的培养基：可溶性淀粉41.6 g/L、黄豆粕粉26.2 g/L、CaCl2 1.0 g/L,KH2PO4 2.0 g/L。在此基础上,3 L摇瓶放大试验结果显示,菌株F8-C的产酶量达到（3 231±21） U/mL,较出发菌株H-A-3提高44.8%。结果表明利用60Co辐射诱变育种,并采用统计学方法优化培养基,对于提高枯草芽孢杆菌纤溶酶的产酶量是一种有效策略。该研究结果也将为下一步发酵罐扩大试验奠定基础。     

两步固态发酵法酿造功能性豆豉

运用分离自云南传统发酵豆豉的Bacillus subtilis SP-8-5与Lactobacillus plantarum YM-5-2菌株对大豆进行两步固态混合发酵。首先,将菌株B.subtilis SP-8-5接种至经室温浸泡10 h(20℃,质量比为1∶3),110℃(20min)蒸煮处理并冷却至30℃的大豆中,于26℃进行初步发酵42 h;随后再接种L.plantarum YM-5-2,并于30℃发酵2 d,最后置于4℃进行后发酵。经两步固态混合发酵处理后,得到一种纤溶活性较强,生产周期短,保质期相对较长,风味独特且易于被大众接受的新型功能性发酵豆豉。当后发酵时间为21 d时,样品豆豉中B.subtilisSP-8-5活菌数为(5.88±0.53)×108 CFU/g,而L.plantarum YM-5-2活菌数则高达(3.50±0.35)×1011 CFU/g,此时检测豆豉纤溶酶的纤溶圈直径高达(2.99±0.06)cm(37℃,静置培养48 h)。     

中度嗜酸放线菌YY21液体发酵产纤溶酶条件的研究

为了提高中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量,本文通过单因素实验对其液体发酵培养基和培养条件进行了研究。结果表明:发酵培养基组成为小米粉1.7%,葡萄糖2%,碳酸钙0.2%,氯化钠0.5%,蛋白胨0.6%;发酵条件为250 m L三角瓶装培养基50 m L,接种量5%,在22℃、转速160 r/min的条件下振荡培养4 d。在最适条件下,放线菌YY21液体发酵产物在血纤维蛋白平板上形成溶圈面积可达到164.38 mm~2,较初始产酶活力(溶圈面积87.58 mm~2)提高了88%,发酵时间缩短了3 d。通过对液体发酵培养基和培养条件的研究有效地提高了中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量。      

纤溶酶的分离纯化及其胞外存在方式的初步探索

为了获得纯纤溶酶并确定纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外是否存在酶与酶原2种形式,收集枯草杆菌DC-12不同时间点的发酵上清液进行分离纯化,对纤溶酶及其可能存在的酶原进行纯化和分析,不同时间点的发酵液通过Sephadex G-75凝胶过滤,都出现2个吸收峰.层析液和加入纤溶酶原激活剂尿激酶的层析液在加热的纤维蛋白平板上都有水解圈,并且10μL层析液和2μL巴比妥那缓冲液在加热的纤维蛋白平板上产生的水解圈与10μL层析液和2μL 100U/mL尿激酶所产生水解圈的面积相同.通过SDS-PAGE凝胶电泳发现,Ⅰ峰在44.3ku～66.4ku处有一条带,Ⅱ峰在29ku处有一条带,表明获得了电泳纯的豆豉纤溶酶,可用于后续研究,初步判定豆豉纤溶酶在枯草杆菌DC-12胞外不存在酶原.     

一株饲用益生枯草芽孢杆菌液体发酵的研究

为解决工业化生产中益生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)活菌数量低、成本高的问题,根据摇瓶正交试验结果对枯草芽孢杆菌的液体发酵条件进行了深入研究,结果表明:最佳培养基配方为玉米粉100g/L,豆粕粉25g/L,硫酸锰30mg/L,硫酸镁1g/L,磷酸二氢钠1.5g/L,磷酸氢二钠3g/L;最优发酵工艺条件为培养温度30℃,初始pH 7.0,通气量2.0m3/h,罐压0.03MPa,发酵周期36h。细菌浓度达到了8.0×1010cfu/mL,芽孢形成率达到94%。     

豆豉纤溶酶生产菌发酵液功能性研究

豆豉是中国的一种传统食品,为证实其具有多种保健功能,对豆豉纤溶酶生产菌发酵液的抑菌作用、抗氧化性及溶栓活性进行了研究.试验结果表明：抑菌作用试验中,pH值在4.0～10.0之间均有抑菌活性,且抑菌效果基本保持稳定,当温度在4～80℃之间变化时,粗酶液的抑菌活性变化不很大,具有一定的热稳定性;抗氧化试验中,豆豉纤溶酶生产菌的发酵培养基和发酵液离心后的上清液都具有一定的抗氧化作用,其量不同抗氧化性也不同;溶栓作用试验中,豆豉纤溶酶在pH值4.0～10.0范围内都较稳定,酶活在碱性条件下比酸性条件下高,最适pH值为7.0,豆豉纤溶酶在冷藏和室温保存中较稳定,随着温度增高,酶活降低,豆豉纤溶酶粗酶液在贮存期中溶栓作用较为稳定。     

产纤溶酶菌株粪肠球菌EF608液体发酵工艺优化研究

以本实验室筛选到产纤溶酶的粪肠球菌EF608为发酵菌株,通过研究得到该菌株产纤溶酶的最佳工艺条件为:葡萄糖2%,蛋白胨0.75%,牛肉膏0.75%,酵母提取物0.5%,K2HPO4·3H2O1%,NaCl0.2%,MgSO4·7H2O0.02%,初始pH7.5,接种量为6%,装液量为15%,37℃培养10h,发酵液纤溶酶活性达到1833IU/mL。      

两种粗提纯法对纤溶酶纯化效果的比较研究

采用硫酸铵盐析法及乙醇沉淀法对海洋枯草芽孢杆菌纤溶酶的纯化效果进行比较研究,得到的最佳纯化方案为：取一定体积的纤溶酶发酵液进行预处理,再进行分段盐析及分级沉淀,在分段盐析中,30％和70％饱和度的硫酸铵分别用于去除杂蛋白和沉淀纤溶酶,最后进行碱处理及超滤除盐;在分级沉淀中,最佳乙醇沉淀时间为1.5h,去除杂蛋白和沉淀纤溶酶的乙醇体积比分别为25％和165％,最后将两种方法得到的粗提液进行冷冻干燥,硫酸铵法的酶活回收率为83.52％,纯化倍数为1.42,冻干粉得率为4.812 g/L,单位酶活为76 755.82IU/g;乙醇纯沉淀法的酶活回收率为89.7％,纯化倍数为1.72,冻干粉得率为7.611 g/L,单位酶活为137 190.57 IU/g,该结果表明乙醇沉淀法对纤溶酶的粗提效果要优于硫酸铵盐析法.     

枯草芽孢杆菌液态发酵豆粕的种子培养基和发酵培养基优化研究

为提高枯草芽孢杆菌液态发酵豆粕的效率,对发酵所用种子培养基和发酵培养基进行优化。通过单因素实验研究种子培养基氮源、碳源、无机盐种类及温度对生物量的影响,确定种子培养基组成为1%酵母膏、1%玉米黄粉、1%KH2PO4,培养温度36℃,其生物量、中性和碱性蛋白酶酶活较常规蛋白胨培养基分别提高210.10%、459.20%和67.50%。在此基础上运用正交实验对发酵培养基碳源量、接种量及温度进行优化,得到最优发酵工艺条件为20%豆粕、2%玉米黄粉、1%KH2PO4、接种量10%,培养温度36℃,其生物量、可溶性蛋白及多肽含量较仅含22%豆粕的培养基分别提高40.90%、28.60%和36.40%。结果表明采用优化后的种子培养基和发酵培养基能够显著提高枯草芽孢杆菌液态发酵豆粕的效率。