胆盐水解酶降胆固醇的研究进展

体内胆固醇水平失衡会引起多种疾病,威胁人体健康。因此,控制体内胆固醇水平是目前普遍关注的问题。除常见的他汀和依齐麦布药物外,植物乳杆菌、干酪乳杆菌、发酵乳杆菌等乳酸菌也已被证实可有效降低体内的胆固醇水平。大量研究发现,促使乳酸菌起到降胆固醇作用的主要物质与其在生长过程中产生的一类代谢产物胆盐水解酶（Bile salt hydrolase,BSH）相关。该研究通过对胆盐水解酶特性、功能介绍,总结分析了胆盐水解酶降胆固醇机制,以期为降胆固醇的深入研究提供理论基础,并为益生菌开发应用提供理论依据与指导。     

传统酵素源高效降胆固醇菌株的筛选、鉴定及胆盐水解酶活性分析

目的:从传统酵素中分离出具有高效降胆固醇能力的菌株,并进行鉴定和降脂作用分析.方法:采用MRS、M17和PDA培养基筛选菌株,测定菌株胆盐耐受性、耐酸性、疏水性、自凝聚力、胆盐水解酶活性及降胆固醇能力,分析筛选菌株的降脂作用.结果:分离出51株菌,其中S-8、M-7、M-16菌的降胆固醇性能较好,胆固醇降低率分别为25...     

屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性

该研究旨在探究降胆固醇潜在菌株屎肠球菌132胆盐水解酶（bile salt hydrolase,BSH）的活性,通过PCR技术克隆目的基因并在大肠杆菌BL21中表达,同时探讨其酶学特性。利用茚三酮法对其菌体破碎液BSH活性进行测定,比酶活达0.55 U/mg。通过克隆其目的基因,连接pET-28a(+)的表达载体并进行异源表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）实验显示,该酶分子量约37 ku。当底物为甘氨胆酸钠（glycocholic acid,GCA）、pH 5.50时,BSH酶活达4.93 U/mg。酶学特性结果表明,GCA为底物、pH 5.50、温度为30 ℃时达最适条件,BSH水解能力最强,酶活达6.59 U/mg,温度在4~30 ℃时,pH为5~7有较好的热稳定和pH稳定性。不同离子对酶活的影响实验表明Na+、Ca2+、Mg2+均对酶活有激活作用;Mn2+、Fe2+对酶活影响不大,但Ni2+、Al3+、Li2+、Co2+、Zn2+均对酶活有强抑制作用,比酶活降到10%以下,几乎丧失活性。通过酶反应动力学得出该酶的Vmax为6.44 μmol/(min?mg),Km值为3.16 mmol/L。因此,通过bsh基因克隆并异源表达,提高了屎肠球菌132BSH活性,并且BSH水解各类胆盐能力较强,为降胆固醇功能食品的开发与应用奠定基础。     

植物乳杆菌耐酸耐胆盐的体外试验及其降胆固醇作用

目的:研究产胆盐水解酶植物乳杆菌H13的耐酸、耐胆盐特性,在此基础上对其可能的降胆固醇作用机理进行体外试验研究.方法:采用MRS培养基,模拟人体胃酸环境(pH=3)和胆盐环境(0.3%),测定H13菌株在酸性及高胆盐环境作用后的存活菌数,并在此胆盐浓度下测定植物乳杆菌H13的胆盐水解酶活力、降解胆盐能力和胆固醇沉淀量.结果:菌体能够耐受pH 3的环境和0.3%的胆盐环境;该菌产生的胆盐水解酶在降低胆固醇方面具有重要作用,酶活性与游离胆酸量、胆固醇沉淀量呈正相关,而且胆盐水解酶对反应底物的特异性不同,以甘氨胆酸钠为佳.结论:植物乳杆菌H13体外降胆固醇作用的机理主要是其产生的胆盐水解酶使胆盐失去共轭作用,在酸性(pH<6.0)条件下,解共轭胆盐与胆固醇形成复合物共同沉淀下来.     

屎肠球菌R40产胆盐水解酶发酵动力学及底物特异性分析

该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌（Enterococcus faecium）R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性。结果表明,拟合模型的相关系数R2均＞0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均＜10%,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述。胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量。不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期。牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性。     

乳酸菌胆盐水解酶生理特性和分子生物学的研究进展

一些乳酸菌及其相关制品含有胆盐水解酶,具有降低介质以及血清中胆固醇含量的能力。胆盐水解酶使结合态胆酸的类固醇中心基团与氨基酸基团之间酰基键断裂,释放脱结合态胆酸。肠道中脱结合态胆盐比结合态胆盐溶解度小,不易被人体吸收,导致大量脱结合态胆盐被分泌到粪便中排出体外。该文章围绕近年来乳酸菌中胆盐水解酶的一些研究进展,综述了胆盐水解酶的特性和分子生物学信息。     

降胆固醇和耐酸耐胆盐益生菌的筛选研究

本研究通过含有胆固醇胶束的MRS-胆固醇液体培养基从五株益生菌中筛选出降胆固醇能力较强的益生菌,接着对筛选出的益生菌进行耐酸、耐胆盐试验。结果表明,五株益生菌都有降胆固醇的功能,其中干酪乳杆菌LCA-1、鼠李糖乳杆菌LR-D和植物乳杆菌LP-C的胆固醇去除率较高,分别为25.26%、22.18%和20.03%;LR-D能够短时耐受低p H值环境,在p H 2.5的发酵液中培养2h的存活率能够达到14.39%,但是耐胆盐能力较差;LP-C能够长时间耐受低p H值的环境,具有较强的胆盐耐受能力,在高胆盐环境(0.5%)中培养2 h的存活率高达133.75%,培养24 h的活菌数仍保持在1.13×105 cfu/m L,此时其余两株菌的活菌未检出,说明LP-C能够耐受高胆盐环境。植物乳杆菌LP-C具有较高的胆固醇去除率,能够耐受低p H值和高胆盐环境。因此,可用于进一步研究与开发。     

胆盐水解酶的研究现状

阐述了胆盐水解酶(BSH)的功能、特性以及对宿主微生物产生的影响;介绍了胆盐水解酶基因、基因调节及同系物;讨论了胆盐水解酶未来研究方向和应用的前景。     

一株乳酸乳球菌的降胆固醇特性及其作用机制

探讨了乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201的降胆固醇特性及其体外去除胆固醇的机制。乳酸乳球菌乳亚种HUCM 201菌株可从培养基中去除33.1%的胆固醇,其中14.3%的胆固醇发生共沉淀并重新溶解在洗涤液中,18.1%的胆固醇被吸收到菌体细胞内。HUCM 201菌株对5种结合型胆酸盐分别表现出了不同的胆盐水解酶活性,其中对甘氨胆酸钠的水解能力最强,总酶活为0.279 U/mL,比酶活为0.076 U/mg。     

植物乳杆菌中胆盐水解酶的研究现状及展望

益生菌的降胆固醇作用与它们所产的胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)有关,这使得胆盐水解酶成为近年来研究的热点之一。文中主要对植物乳杆菌中胆盐水解酶的克隆表达、生化特性以及降胆固醇作用等方面的研究现状进行了综述,并展望了它未来的发展方向。以期对植物乳杆菌胆盐水解酶的研究及其相关制品的开发利用提供一定的指导意义。     

具有胆固醇去除能力和胆盐水解酶活性的乳酸菌的体外筛选

对分离自内蒙古传统稀奶油或酸化稀奶油中的10株乳酸菌进行了胆固醇去除能力和胆盐水解酶活性的研究(定性和定量),筛选出了3株具有较高胆固醇去除能力和胆盐水解酶活力的乳酸菌菌株,分别为KLDS6.0330、KLDS6.0333和KLDS6.0335,并对它们进行16SrDNA分子生物学鉴定、酸耐受性和胆盐耐受性的测定。结果表明:这3株菌均为植物乳杆菌(L.Plantarum),并且表现出了较好的酸耐受性和胆盐耐受性。     

胆盐水解酶合成条件的优化

以MRS，MRS肉汤，改良MRS为基础培养基，考察了培养基对菌株产胆盐水解酶活力的影响，确定了MRS肉汤为基础培养。对KTx在MRS肉汤中最适碳源、氮源、培养温度、培养基起始pH值、刺激因子作了单因素试验，得出最适碳源为葡萄糖，最适氮源为大豆蛋白胨，最适培养温度37℃，最适培养基起始pH值为5．5～6．0，最适刺激因子吐温80。在此基础上选择葡萄糖、大豆蛋白胨、培养温度、接种量进行L16（4^4）四因素四水平正交试验。结果表明，对胆盐水解酶活力影响因子水平：葡萄糖〉大豆蛋白胨〉培齐温度〉接种量：最佳产胆盐水解酶条件：葡萄糖4％，大豆蛋白胨2％，接种量2％（均为质量分数），培养温度为37℃。优化后菌株的产酶活力可提高到优化前的13．4倍。     

益生菌中胆盐水解酶作用机理研究现状

对乳酸菌中胆盐水解酶研究现状进行分析,从编码基因、蛋白氨基酸结构以及酶与肠道间密切关系等方面入手,阐述了肠道益生菌通过胆盐水解酶对胆盐的水解,可以达到耐受肠道胆盐压力,增强细菌表面对体内免疫系统的抵抗能力建立长期感染,促进在高等动物肠道内细菌的定殖,降低血清胆固醇水平等作用,为最终治愈高胆固醇血症提供了良好的解决方案。     

具有胆盐水解酶活性乳酸菌的筛选及影响其活性因素分析

具有胆盐水解酶活性的乳酸菌有潜在的降低血液胆固醇的作用。对分离自酸马奶的10株乳杆菌的胆盐水解酶活性进行了定性及定量分析,在此基础上对影响胆盐水解酶的一些因素进行了研究。结果表明,3株乳杆菌具有胆盐水解酶活性,其中以MG13-3为最高,其次为XB4-1及MG16-3;当pH值为6时,超声波破碎时间在12～15min之间,培养基中加入巯基乙酸钠并在厌氧条件下培养时,3株乳杆菌均体现出较高的胆盐水解酶活性。     

一株产胆盐水解酶植物乳杆菌的发酵培养基的优化

为了提高植物乳杆菌Lactobacillus plantarum KLDS1.0386的胆盐水解酶产量,本实验通过响应面法对其发酵培养基进行优化。通过单因素实验、Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验和Box-Behnken实验,最终获得最优培养基为:葡萄糖18.2 g/L、蛋白胨15.03 g/L、酵母粉9.97 g/L、乙酸钠3.13 g/L、柠檬酸氢二铵2.00 g/L、磷酸氢二钾2.00 g/L、硫酸锰0.25 g/L、硫酸镁0.58 g/L。优化前植物乳杆菌KLDS1.0386产胆盐水解酶的比酶活为1.04 U/mg,经过培养基的优化后,胆盐水解酶的比酶活为3.37 U/mg,比优化前提高了3.24倍。且实验结果与模型预测结果误差在允许范围内,说明该模型可以投入使用。      

藏灵菇源克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶的分离纯化研究

为获得藏灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶(BSH)的纯品,探讨了BSH粗品的分离纯化方法.粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,再以DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换介质,分别考察缓冲液pH值、流速和洗脱方式等对BSH分离纯化的影响.结果表明,在40%～70%饱和度的硫酸铵条件下BSH提取效率最高.最佳层析条件为采用pH值为6.5、50mmol/L磷酸钠缓冲体系、1.5mL/min的流速,进行分步洗脱(100mmol/L、350mmol/L、500mmol/L～600mmol/L NaCl及50mmol/L磷酸盐缓冲液3步洗脱).在优化纯化条件下BSH的比活力可达479.55AU/mg,是原粗酶液的23.66倍.     

响应面法优化植物乳杆菌发酵产胆盐水解酶的培养基成分

以胆盐水解酶的活性为响应值,采用响应面设计分析法对植物乳杆菌发酵产胆盐水解酶培养基的成分进行优化.获得最佳培养基组成(g/L):葡萄糖19.40、蛋白胨17.05、大豆蛋白胨14.00、乙酸钠1.82、K2HPO4 2.00、酵母浸粉6.00、柠檬酸氢二铵1.00、MgSO40.87、MnSO40.45、L-半胱氨酸0.5、吐温-80 2.2mL/L.在该优化条件下,胆盐水解酶产量为(7.02±0.28) U/mL,较单因素优化前提高了6.44倍.所得数学模型的预测值与实验观察值相符,能够预测不同培养条件下植物乳杆菌发酵产胆盐水解酶产量的变化.