饲用芽孢杆菌混菌发酵产中性蛋白酶的工艺优化

为提高饲用芽孢杆菌中性蛋白酶的发酵单位,考察了多种芽孢杆菌混菌发酵产蛋白酶的协同作用效果,并在单因素试验的基础上,先后采用部分析因设计、爬坡设计及中心组合设计的试验方法对菌株配伍方式及发酵培养基组成进行了优化.通过优化构建了合适的混菌发酵体系,即芽孢杆菌A1、B1、B3菌株的混合比例为2∶3∶3;最佳发酵培养基组成(g/L)为:麦芽糖58.5、酵母膏28.6、麸皮42.5、吐温80 3.0、K2HPO43.0、CaCO33.0.在优化条件下,芽孢杆菌混菌发酵产中性蛋白酶活力单位可达到6 728 U/mL,较优化前芽孢杆菌A1的发酵活力单位提高了175.6%.     

低温碱性蛋白酶高产菌株的选育与发酵条件研究

利用实验室保藏的枯草芽孢杆菌为出发菌株,采用紫外诱变进行选育,得到1株低温碱性蛋白酶的高产菌株,编号为B.Sub3.采用摇瓶液体发酵方式,考察碳源、氮源等营养条件及温度、发酵时间等发酵条件对发酵的影响,结果表明以上因素对低温碱性蛋白酶的生产均有影响.在单因素基础上设计4因素3水平的正交实验,确定B.Sub3的最佳发酵条件为：葡萄糖5 g/L,蛋白胨5 g/L,酵母粉3 g/L,pH=8.0,接种比例为5%,50 mL三角瓶装液量为20 mL,32℃发酵28 h,发酵液的低温蛋白酶活力为2 231 U/mL     

果胶酶的固态发酵法生产及在肉仔鸡饲养中的应用

以产果胶酶的黑曲霉(Aspergillus niger)为出发菌株,分别在小铝盒、浅盘和曲箱中进行固态发酵的研究,确定最适发酵条件为:以麸皮为培养基,加水比以麸皮∶水为3∶5,每kg原料添加7.5 g硫酸铵,并按7.5%接入42 h种龄的液体种子.经过39～41 h发酵,在浅盘发酵中干曲果胶酶活力达到19 000 U/g,曲箱发酵酶活力达到16 033 U/g.经分析成品曲中同时还含有酸性蛋白酶1 540 U/g,β-葡聚糖酶12 U/g.仔鸡的饲养试验结果表明,果胶酶的添加可显著提高全期增重,降低料肉比,干物质、粗蛋白、有机物和粗纤维的消化率提高了11%～22.5%.     

产普鲁兰酶芽孢杆菌L5的ARTP诱变育种及发酵优化研究

普鲁兰酶是高效利用淀粉的关键酶之一,选育普鲁兰酶高产菌株对其工业化应用具有重要意义。从土壤中筛选得到一株产普鲁兰酶菌株L5,产酶活力为10.83 U/m L。通过16S r DNA测序和构建系统发育树,鉴定菌株L5为芽孢杆菌菌属(Bacillus genus)。以L5菌株为出发菌株采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变育种,筛选出4株普鲁兰酶高产突变菌株G1(20.33 U/m L)、G2(19.68 U/m L)、G3(19.31 U/m L)、G4(22.01 U/m L),较之前酶活性分别提高了87.7%、81.7%、78.3%、103.2%。利用正交试验优化发酵培养基,最优组合:可溶性淀粉1.5%、糊精1.0%、蛋白胨0.5%、黄豆粉1.5%、Ca~(2+)0.05%、Fe~(2+)0.10%、Zn~(2+)0.15%,在最优发酵培养基条件下,G4菌株产酶活力可达27.22 U/m L(提高了23.7%)。试验所产普鲁兰酶的最适反应温度为50℃、最适反应pH值为6.5,在30～60℃保温2 h酶活能维持在80%以上,在pH 5～9保存4 h后酶活力仍能维持在60%以上,该酶具有良好的热稳定性。     

分解酒糟生物质的纤维素酶生产菌的筛选研究

从白酒糟采集的样品中分离到15株菌,经过刚果红染色,初筛得到产纤维素酶酶活较高的5株菌。纤维素酶和滤纸酶活研究结果表明,这5株菌在分泌纤维素酶活力及降解滤纸能力方面均较强,其分解纤维素的酶活最高达到11.9 U/mL,而分解滤纸的酶活力则最高达到6.4 U/mL。最适产酶条件为:发酵时间72~96 h,发酵温度25~30℃。对酒糟发酵减重最高达18%。     

低能N+离子注入诱变选育琼胶酶高产菌株

对产琼胶酶的类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)菌株WL进行N+离子注入诱变,寄以筛选获得高活力琼胶酶产生菌株.首先考察了N+离子注入剂量对类芽孢杆菌WL存活率的影响,在注入能量为10 keV的条件下,类芽孢杆菌WL菌株最佳剂量范围为15.6×1014～23.4×1014 ion/cm2.在23.4 × 1014 ion/cm2诱变剂量下,筛选得到1株高产琼胶酶的菌株WL-15,酶活力达到47.3 U/mL,较出发菌株提高53.6％,该菌株经5次传代培养,产酶活力稳定.之后优化了产酶培养基中的主要成分,在琼胶、NaNO3和NaCl的质量浓度分别为2.5 g/L,6.0 g/L,15.0 g/L时,类芽孢杆菌WL-15产酶活力达到了53.3 U/mL.     

餐饮废水高效降解蛋白菌株的分离筛选及诱变选育研究

从龙潭山宾馆厨房排污口分离得到11株产蛋白酶菌株,培养相同时间测定蛋白质降解率,从中筛选出一株蛋白质降解率高的菌株P4.通过基本的生理生化性质的测定,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).通过紫外诱变提高菌株的产蛋白酶能力,在发酵时间为120 h的前提下,蛋白质降解能力约提高10.96%.利用正交试验确定蛋白质最佳降解条件:酵母膏最优浓度为2.5 g/L,葡萄糖最优浓度为5.0 g/L,Cu2+最优浓度为1.0 g/L,最优装样量为40%.     

产蛋白酶混合菌系对碱性剩余污泥水解酸化的影响

为提高剩余污泥水解酸化过程中挥发性脂肪酸（VFAs）的累积,从剩余污泥中分离产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,并构建产蛋白酶混合菌系．将其接种于碱性（ pH 10．0）发酵剩余污泥的不同发酵时期,评价其对溶解性有机化合物和VFAs累积的影响,探讨利用剩余污泥生产VFAs的最佳条件．从剩余污泥中分离到2株产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,并构建产蛋白酶混合菌系．在发酵初期接种混合菌系效果最显著,且可缩短发酵启动时间2 d．发酵初期接种混合菌系后,溶解性蛋白质和VFAs质量浓度在第8天均达到最高值,分别为未接种混合菌系样品中相应值的1．25和1．41倍,分别占溶解性化学需氧量（ SCOD）总量的29．87％和44．54％．乙酸和丙酸为剩余污泥水解酸化过程中VFAs的主要组分,分别占VFAs总量的50．69％和18．19％．     

紫外光激光对产蛋白酶米曲霉菌株的诱变选育

紫外光对蛋白酶米曲霉T_(213)菌株经5次照射,获得米曲霉T_(213)菌株,其麸曲蛋白酶活力较出发菌株增加近1倍,达6840U/g。再用25mwHe—Ne激光对T_(213)菌株进行诱变处理4次,筛选出T_(222)变异株,其麸曲蛋白酶活力较T_(213)菌株增加31％。达8960U/g。     

影响黑曲霉产糖化酶和蛋白酶的主要营养因素

考察了培养基的配比、部分简单碳源对黑曲霉AS3.350产糖化酶、蛋白酶和孢子收获量的影响.结果表明:在选择的2种有机氮源中,豆粕可被黑曲霉较好地利用.在麸皮与豆粕的质量比为5:5,30℃培养72 h时,糖化酶活力最高为1 185 U/g,蛋白酶活力差异不显著.在分别添加葡萄糖0.5%,蔗糖0.75%时,黑曲霉产糖化酶酶活力达到最高;对添加淀粉来说,随着淀粉浓度的增高而糖化酶活力逐渐增大.蛋白酶活力和孢子收获量与碳源的种类、浓度以及菌体的生长情况密切相关.     

蚕蛹功能酱油酿制(Ⅱ)--蚕蛹脱臭效果研究

采用毛细管气相色谱仪对蚕蛹酱油酿造过程中通风制曲阶段蚕蛹臭味物质的含量组成及脱臭效果进行了初步的研究。结果表明：蚕蛹中臭味成分以正丁胺为主，约占60％；制曲质量差，蛋白酶活低(4673．2u／g干曲)，则脱臭效果较差(脱臭率33％)；制曲质量好，蛋白酶活高(8168．3u／g干曲)，则脱臭效果较好(脱臭率87％)。     

金线鱼肝胰脏蛋白酶激活提取条件的优化

用响应面法对金线鱼肝胰脏蛋白酶的激活及提取条件进行了优化。比较了不同激活剂的激活效果。研究了提取时间和pH值交互作用对蛋白酶活力的影响。结果表明:肠提液与CaCl2协同作为激活剂的激活效果最好。优化后激活时间为6 h,激活温度为27℃,肠提液质量分数为7%,CaCl2浓度为5.20 mmol/L,酶活力为1578.14 U/(g.min)。肝胰脏蛋白酶最佳提取条件为:提取时间8.5 h,提取温度11℃,pH 5.4,酶活力为1431 U/(g.min)。蛋白酶复性电泳结果说明酶活力增加显著。     

制麦过程中添加肌醇六磷酸酯酶对麦芽的影响

研究了在制麦过程中浸麦阶段添加外源植酸酶,对植酸浓度、植酸酶、α-淀粉酶、蛋白酶以及β-葡聚糖酶活力的影响以及麦芽浸出率的变化.结果表明,外源添加的植酸酶随浸麦水进入大麦分解植酸,由3.20 mg/mL降低到2.35 mg/mL.溶解了淀粉及蛋白质,使植酸酶活力由1.25 U/g提高到2.66 U/g,α-淀粉酶活力由...     

白腐乳微生物肽酶的测定及其脱苦特性研究

采用合成底物对毛霉和白腐乳发酵中分离出的细菌JS3及酵母JSBB2的肽酶活力进行了检测，测定表明微生物具有明显的二肽酶和羧肽酶活力，其中毛霉的氨肽酶和内肽酶活力较高，细菌表现出明显的氨肽酶活力，而Alcalase的外切酶活力不足。两步法水解实验表明，毛霉和细菌的粗酶液有利于降低Alcalase水解大豆蛋白（SPI）后溶液的苦味，经毛霉粗酶液作用后大豆蛋白水解液的水解度提高了16．2％，而酵母发酵液的水解和脱苦作用均不明显。     

米曲霉固态发酵苹果渣与棉粕生产中性蛋白酶的工艺优化研究

为降低中性蛋白酶的生产成本,以苹果渣与棉粕为原料,采用响应面法对其生产工艺进行了优化.实验结果表明,培养基中棉粕与苹果渣的最佳质量比为6∶4,培养基初始含水量、（NH4）2SO4与KH2PO4对产酶影响显著,其最佳质量分数分别为62.19%、2.56%与0.10%.ZnSO4与MgCl2是非显著性因素,其最适质量分数分别为0.10%与0.05%.采用上述培养基于30℃恒温培养24 h,干曲蛋白酶活力可达到4096.9 U/g,比优化前提高了54.7%,与采用豆粕与麸皮为原料时的产酶水平相当.     

卷枝毛霉γ-亚麻酸高产菌株的选育

对卷枝毛霉(Mucor circinelloides)3.2208进行紫外诱变,采用苏丹黑染色和TTC酶活法进行初筛,摇瓶发酵测定相关指标进行复筛,获得1株γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,GLA)产率比出发菌株显著提高的突变株M3,经培养,M3菌体细胞收率为15.20 g/L,油脂含量为20.10%,油脂产率为3.65 g/L,GLA含量占菌体油脂总脂肪酸的17.28%,产率达630.72 mg/L.     

Antioxidant properties of wheat germ protein hydrolysates evaluated in vitro

Wheat germ protein hydrolysates were prepared by protease hydrolysis, ultrafiltration and dynamical adsorption of resin. The total amount of amino acids in 100 g wheat germ protein hydrolysates is 93.95 g. Wheat germ protein hydrolysates are primarily composed of 4 fractions： 17.78% in the relative molecular mass range of 11 563 - 1 512, 17.50% in 1512 -842, 27.38% in 842 -372 and 30.65% in 372 -76, respectively. The antioxidant properties of wheat germ protein hydrolysates were evaluated by using different antioxidant tests in vitro. 1.20 g/L wheat germ protein hydrolysates exhibit 78.75% inhibition of peroxidation in linolei acid system; and 1.6 g/L wheat germ protein hydrolysates show 81.11＆ scavenging effect on the 1,1-diphenyl-2-picrylhrazyl radical. The reducing power of 2.50 g/L wheat germ protein hydrolysates is 0.84. Furthermore, the scavenging activity of 0. 60 g/L wheat germ protein hydrolysates against superoxide radical is 75. 40%; 0. 50 g/L wheat germ protein hydrolysates exhibit 63.35% chelating effect on ferrous ion. These antioxidant activities of wheat germ protein hydrolsates increase with the increase of its concentration. Experimental results suggest that wheat germ protein hydrolysate is a suitable natural antioxidant rich in nutrition and nontoxic.     

米曲霉发酵产纤溶酶培养基的优化

通过单因素实验确定米曲霉NA-25产纤溶酶的最佳碳源为麸皮,最佳氮源为蛋白胨和NaNO3.利用SAS软件的Placket-Burman设计法对米曲霉NA-25产纤溶酶的培养基组成进行筛选,筛选出3个影响较大的重要因素,即蛋白胨、NaNO3、CaCl2,然后用中心组合实验设计进一步优化,经优化后,在上述因素分别为NaNO318.5 g/L,蛋白胨4.97 g/L,CaCl21.63 g/L时发酵液的酶活为98.13 U/mL,比原来提高了55.8%.     

豚草中绿原酸的测定及提取剩余物的生物转化

采用超声波法辅助提取、HPLC测定的方法,研究了豚草不同部位绿原酸的含量.并与烟草、金银花和几种南京郊区常见杂草的绿原酸含量进行了比较,将提取剩余物用间型脉孢菌进行了生物转化.实验结果表明,豚草各部位的绿原酸含量以叶最多,为1.160 mg/g;花和茎次之,分别为0.559和0.494 mg/g;豚草叶绿原酸以7月份含量最高.在50℃时用超声波辅助提取,作用时间以20 m in为宜.用间型脉孢菌转化提取剩余物,物料经生物转化后,富含纤维素酶、蛋白酶和类胡萝卜素,其中纤维素酶中CMC酶活性为5 503.9 U/g,蛋白酶活性为7 926.4 U/g,类胡萝卜素含量为126.6μg/g.提取酶和类胡萝卜素后的物料可作为生产有机肥的原料,使物料得到全部利用.     

中性蛋白酶水解豌豆蛋白水解条件的优化及水解产物乳化性的研究

以生产淀粉的副产物豌豆蛋白粉为原料,研究了中性蛋白酶酶解条件对豌豆蛋白乳化性的影响.首先通过单因素试验研究了加酶量、反应时间、底物浓度、反应温度、pH值对豌豆蛋白乳化活性和乳化稳定性的影响;在单因素试验的基础上设计响应面试验,研究各因素及其交互作用对豌豆蛋白乳化性的影响,优化出的最佳酶解条件为:加酶量0.13％、反应时间32.5 min、pH8.0、反应温度52.8℃,此时豌豆蛋白的乳化活性为35.82 m2/g,乳化稳定性为45.88 min,比改性前豌豆蛋白的乳化性有了明显提高.