百日咳毒素参考品的制备及鉴定

目的制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)参考品,并进行鉴定。方法将百日咳杆菌培养上清经珍珠岩和羟基磷灰石两步吸附层析纯化后获得PT,进行SDS-PAGE、ELISA、斑点免疫印迹及血凝效价检测。结果纯化后PT纯度可达99%以上;相同抗原含量的纯化后PT和NIBSC标准品与PT单克隆抗体均为阳性反应,与FHA单克隆抗体均为阴性反应;纯化后PT和NIBSC标准品均可与PT单克隆抗体产生明显的反应斑点,与FHA单克隆抗体无反应斑点,Sigma公司PT参考品与PT单克隆抗体有明显反应斑点,与FHA单克隆抗体有微弱反应斑点;纯化后PT和Sigma公司PT参考品的血凝效价分别为1∶32和1∶64。结论成功制备了较高纯度的PT,有望作为参考品用于PT抗原含量检测、抗PT血清抗体滴度检测及抗原纯度检测。     

第三批百日咳疫苗效力国家参考品的稳定性

第三批百日咳疫苗效力国家参考品（参苗＃３）是在１９８０年由中国药品生物制品检定所与长春生物制品研究所合作,制备并冻干而建立的。其效力单位经与ＷＨＯ的＃２、我国的＃２百日咳效力参考品标化,经过统计学处理得到其所标定的每安瓿１８个国际效力单位（ＩＵ／安瓿）。到目前为止,该批参考品从冻干之日起已有近２０年,为此,我们对该批百日咳疫苗效力国家参考品的稳定性进行了分析和研究。 第三批百日咳疫苗效力国家参考品在不同年代和不同的半数致死量（ＬＤ５０）攻击的条件下,按照中国生物制品规程（１９９５年版）规定的百日…     

无细胞百日咳疫苗效力国家参考品的建立

采用罐培养百日咳CS菌株,培养物经硫酸铵两段盐析、浸提后,再经蔗糖密度梯度离心,收集以FHA．PT为主的百日咳菌保护性抗原,经福尔马林解毒,制备成原液。该原液按照中国和日本的生物制品规程检定合格后,加入保护剂,稀释至18μgPN／ml,分装冻干制备成无细胞百日咳疫苗效力参考品。以JNIH3和JNIH－6参考品为标准,按照日本规程的小鼠脑腔攻击法标定其效力单位。根据14次效力试验所得的结果和日本NIH标定的结果,该批疫苗效力国家参考品的效力单位定为15PIU／ml。     

百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品的研制

目的 研制百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准.方法 通过对21份病原体培养物的复核、确证,关键抗原位点等位基因分析、红霉素耐药位点测序分析,组成百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估.结果 百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品由12份阴性...     

第6代百日咳疫苗效力国家标准品的建立

目的建立第6代百日咳疫苗效力国家标准品。方法选用百日咳菌株(沪64-21),发酵罐培养,收获的百日咳菌液经脱毒灭活后,分装冻干,作为备选品,按《中国药典》三部(2010版)进行无菌试验、血清学试验、水分含量及百日咳特异性毒性检测。以WHO标准品PWIS和中国百日咳疫苗效力国家标准品3号、5号为标准,经5个实验室进行协作标定,并考察其效力稳定性。结果该备选标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定;经协作标定45次,分别以国家标准品3号、5号和WHO标准品为标准进行量值溯源,标定结果差异无统计学意义(P>0.05);最终合并效价为13 IU/ml(95%CI=12.23～13.26 IU/ml);保存期内标准品的效力稳定。结论该备选标准品各项指标均符合要求,可作为新的第6代百日咳疫苗效力国家标准品使用。     

第3代丙肝试剂国家参考品的研制及初步应用

筛选全国 14个省、市、自治区的 2 5 0 0 0多份血样 ,取其中 2 6 4份用国产 14种抗HCVEIA试剂 ,国外 2种第 3代抗HCVEIA试剂复检 ,用RIBAHCV 3.0和PCR试剂确证。经两轮会同标定 ,国外两个实验室复核 ,确定40份阳性、40份阴性样品组成第 3代丙肝试剂国家参考品。 40份阴性样品中包括国内外几十种试剂曾经出现过非特异假阳性反应的阴性样品以及其S C值较高的阴性样品。 40份阳性样品中 ,6 5 %为弱阳性样品 ,有的样品含有全谱的抗HCV抗体 ,有的样品含有某几种抗HCV抗体 ,有的样品以抗HCV某种蛋白抗体成分为主 ,还有的样品只含有某种特定的抗HCV蛋白抗体。该参考品已通过专家鉴定并经卫生部批准使用。经改进后达到第 3代参考品标准的国产试剂的临床考核说明 ,该参考品促进了国产试剂质量的提高 ,并达到国际先进水平。     

冻干重组乙型肝炎疫苗国家参考品的制备及标定

目的 制备1批冻干参考品,用于体外相对效力测定准确评价重组(啤酒酵母)乙肝疫苗的生物学活性。方法 疫苗原液中分别加入5％和1％的蔗糖和明胶作为保护剂,制成冻干参考品。检测各项质量指标并观察其稳定性,并以Merck公司的参考品为标准,以ELA法协作标定其体外相对效力。结果 各项质量指标均符合现行规程要求,体外相对效力保持稳定,分装量准确,原液蛋白均值为24.72μg/ml,相应液体疫苗蛋白均值为12.27μg/ml。并经3家实验室协作标定,24次检定结果合并计算相对效力为0.993。结论 该冻干参考品可用作重组啤酒酵母乙肝疫苗效力检定的质控参考品,该批参考HBsAg含量定为11.0μg/ml。     

风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品的制备及标定

目的制备风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品,并进行标定。方法选择国内风疹减毒活疫苗生产毒株BRDⅡ制备风疹减毒活疫苗参考品,并对其进行鉴别试验、水分含量、病毒滴度及无菌检查等检定;检定合格后,组织4个实验室对候选参考品和国际参考品的病毒滴度协作标定,计算实验室内和实验室间变异系数;对候选国家参考品进行稳定性分析。结果制备的候选参考品鉴别试验、无菌检查结果均符合规定,水分含量为1.7%,病毒滴度为4.6lgCCID50/ml。经协作标定,风疹减毒活疫苗病毒滴定候选国家参考品的病毒滴度为(4.56±0.52)lgCCID50/ml,实验室内变异系数在1.25%～2.94%之间,实验室间变异系数为5.72%;国际参考品的病毒滴度为(3.96±0.08)lgCCID50/ml,实验室内变异系数在1.19%～3.21%之间,实验室间变异系数为2.04%。经考察,该参考品具有较好的稳定性。结论制备的参考品符合作为风疹减毒活疫苗病毒滴定国家参考品的要求。     

冻干血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品的制备及标定

目的建立血吸虫病诊断试剂IgG免疫血清国家参考品。方法收集血吸虫病疫区粪检筛查阳性病人血清和非疫区正常人血清,经标定和验证合格,制成冻干参考品。结果冻干参考品血清效价符合要求,2家协作单位用3种免疫学方法标定,结果一致。结论所制备的冻干参考品可以用于血吸虫病抗体诊断试剂的检定。     

PKA国家参考品的制备

本文应用 PKA 微量滴定板方法,用 WHO1984年建立的 PKA 国际标准品进行标定,制备了我国第一批 PKA 国家参考品。     

甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品的研制

目的研制甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品。方法收集甲型H1N1流感病毒及其他病毒培养物,用实时荧光PCR方法逐一进行验证。参考品通过协同标定,确定最低检出限范围,7家单位进行适用性检测。反复冻融观察其稳定性。结果所用的3株病毒经实时荧光PCR验证,特异性良好,经基因芯片进一步验证,均为甲型H1N1流感病毒,且无其他病毒核酸污染,经7家单位检测,符合国家参考品标准要求;反复冻融3次后,稳定性良好。结论建立了第1套甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品及相应的质量标准,并已被国家有关部门批准正式使用。     

百日咳毒素的研究进展

百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)是鲍特菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,其为引起百日咳众多临床症状的主要因素,同时也是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)中唯一不受争议的抗原成分。本文就PTX的分子结构、生物学活性及其在疫苗中的应用作一综述。     

炭疽噬菌体国家参考品的研制

目的研制炭疽鉴别试验及炭疽活疫苗纯菌检查用炭疽噬菌体国家参考品。方法制备炭疽噬菌体参考品,建立噬菌体参考品效价质量标准,组织4个实验室对该参考品进行协作验证,并对参考品稳定性进行分析。结果研制的炭疽噬菌体国家参考品,其效价质量标准应不低于1.0×108PFU/ml;经协作验证,该参考品可有效鉴别3批炭疽活疫苗;该参考品在4℃条件下稳定性较好,37℃稳定性较差。结论研制的炭疽噬菌体国家参考品已被国家有关部门正式批准,可用于炭疽鉴别试验及炭疽活疫苗纯菌检查。     

第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品。方法从国内13省市几十万名供血员中筛选样品,用多种试剂对收集到的2000多份血样进行复检,从中选出317份样品,用国外3种抗-HCV EIA试剂及国内4种抗-HCVEIA试剂进行检测,对可能被选入参考品的样品,再用CHIRON公司抗-HCV RIBA确证试剂,HCV RNA PCR试剂和CHIRON公司HCV RNA TMA试剂进行了确证。利用HCV基因分型试剂对部分样品进行HCV基因型别检测,并对部分分型结果用核苷酸序列测定的方法确证。21个实验室会同标定。结果建立了第5套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品及相应的质量标准。结论自2004年10月1日起,第5套抗-HCV国家参考品已被国家有关部门批准正式使用。     

第6套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第6套丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体诊断试剂国家参考品。方法从我国10省市血站及生物制品企业的供血员中筛选候选参考品血浆样本304份,采用国内外27种检测试剂进行HCV Ag、HCV Ab及HCV RNA检测后,应用CHIRON公司的RIBA HCV 3.0 SIA及MP公司HCV BLOT 3.0试剂进行确证检测;利用Abbott Real Time HCV GenotypeⅡ试剂,对HCV RNA阳性样本进行HCV基因型别检测,并以核苷酸序列测定方法对分型样本进行确认。通过分析上述检测数据,从中拟选出协作标定样本,邀请国内外生产或市场使用占较大份额的11个实验室参加该套参考品标定。取最低检出限参考品4份,分别于4、25和-20℃放置1、3、5、7、9和11 d,或置-70℃反复冻融1~6次,进行稳定性试验。结果选出65份样品组成第6套HCV抗体诊断试剂国家参考品,其中包括阴性参考品30份,阳性参考品30份,最低检出限参考品4份,精密性参考品1份。应用11家的16种HCV抗体试剂分别平行3次标定检测,阴、阳性参考品符合率均≥29/30;最低检出限参考品检测L1~L3均为阳性,L4为阴性;精密性参考品检测CV在1%~11%之间。不同温度保存11 d及-70℃保存反复冻融6次的检测结果均符合要求(P0.05)。结论建立了应用于血液筛查丙型肝炎病毒抗体试剂质量控制的第6套HCV抗体国家参考品。     

HIV-1核酸血筛试剂国家参考品的研制

目的研制HIV-1RNA血筛试剂国家参考品。方法收集HIV-1病毒培养物、我国不同地区的HIV-1感染者血浆以及正常人样品,经HIV-1病毒载量试剂检测,对HIV-1RNA阳性的样品进行env基因型分析,从中筛选参考品的候选样品。结果共筛选8份HIV-1RNA阳性的样品作为阳性参考品,病毒载量均高于5000IU/ml;8份HIV、HBV、HCV均为阴性的血浆样品作为阴性参考品;以1份病毒培养样品作为灵敏度参考品的原始样品,经WHOHIV-1RNA标准品标定,其HIV-1病毒载量为3.79×104IU/ml;反复3次冻融对参考品的病毒载量无明显影响。结论已制备HIV-1RNA血筛试剂国家参考品,为我国HIV-1核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据。     

第5批百日咳疫苗效力国家标准品的建立

目的　建立第 5批百日咳疫苗效力国家标准品。方法　选用百日咳菌株 (编号 5 80 0 4 ) ,采用B G培养基固体培养 ,将培养的百日咳菌液经脱毒灭活后分装冻干。以WHO的效力标准品 # 3和中国效力标准品 # 4为标准进行协作标定。结果　该标准品经 7个实验室协作标定 6 3次 ,最终合并效价为 14IU ml(95 %CI=13 10 9～15 32 0 )。结论　第 5批百日咳疫苗效力标准品各项指标均符合要求 ,可以作为新的国家百日咳效力标准品使用 ,效价拟定为 14IU ml。     

HIV抗体确认试剂国家参考品的建立

目的建立评价HIV抗体确认试剂的国家参考品。方法从我国部分地区收集HIV感染者或可疑感染者以及非HIV感染者血浆样品,并对其进行HIV抗体、核酸以及抗体条带等检测,从中筛选出有代表性的样品组成参考品,用4家不同的HIV抗体确认试剂进行检测和标化。结果共筛选出27份样品组成HIV抗体确认试剂参考品,其中10份为HIV抗体确认阳性参考品,12份为HIV抗体确认阴性参考品,5份为HIV抗体不确定参考品。用4家不同的HIV抗体确认试剂标化12次,10份HIV抗体确认阳性参考品均检测为确认阳性;5份不确定参考品均检测为确认阳性或不确定,无检测为阴性者;12份阴性参考品10次均检测为确认阴性。结论该参考品可用于评价HIV抗体确证试剂的质量。     

丙种球蛋白四种抗体国家参考品的制备

<正> 根据WHO规程对丙种球蛋白制品(简称丙球)的要求,我所于1990年开始制备了一批可检测麻疹、白喉、乙肝(抗-HBs)和甲肝抗体(抗-HAV)的丙球抗体国家参考品。该参考品原料来自上海生物制品研究所的10％人丙半成品,经分装冻干后-30℃保存。其后,用WHO的抗麻疹血清、乙肝免疫球蛋白和甲肝免疫球蛋白国际标准品进行了丙球三种抗