甲型肝炎病毒抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的：建立快速检测甲型肝炎病毒(HAV)抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法：用HAV多克隆抗体和HAV单克隆抗体酶结合物建立双抗体夹心ELISA法,检测HAV抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性(标准曲线)、准确度、精密度、灵敏度验证,对不同生产厂家生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)与不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品进行适用性检测。结果：HAV多克隆抗体的最佳包被浓度为8μg/mL,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000,封闭剂为1%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围0.546 875～17.500 000 IU/mL,R²> 0.99;准确度验证回收率80.1%～123.7%;精密度验证变异系数<8.3%。检测不同厂家的HAV疫苗(人二倍体细胞)和不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品呈良好的剂量依赖效应。结论：建立了适用于HAV抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于不同毒株生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)检测,可用于甲肝病毒收获液、浓缩液、纯化液...     

TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法 采用正交试验确定捕获抗体、检测抗体最佳浓度,建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并对方法进行线性范围、特异性、检测限、定量限、准确性、重复性验证;采用建立的方法检测多种生物制品,验证方法的适用性。结果 选定捕获抗体用3μg/mL浓度包板,检测抗体稀释15 000倍建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法。该方法线性范围为0.41～40.00 ng/mL,检测限为0.258 ng/mL,定量限为0.5 ng/mL;检测标准品、样品时,测量偏差小于5%;重复性验证CV<5%;不同类型样品加标回收率在80%～120%之间。结论 建立的TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法特异性、准确性、重复性良好,可准确、有效、快捷地检测各种类型生物制品中TrypLE的残留量。     

羊布鲁菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立羊布鲁菌双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法应用针对羊布鲁菌O链M抗原的种特异性单克隆抗体,建立检测羊布鲁菌抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行重复性、特异性、敏感性验证及初步应用。结果经验证,该方法重复性好,特异性强,最低检出限为3.0×103CFU/ml,与平板凝集试验的符合率为100%。结论已建立了特异、敏感的检测羊布鲁菌的双抗体夹心ELISA方法。     

森林脑炎病毒单克隆抗体的研制及抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立和应用

目的 制备森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)单克隆抗体,并建立TBEV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,初步应用于疫苗生产过程中TBEV抗原含量监测.方法 以TBEV"森张"株灭活纯化全病毒作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备小鼠单抗杂交瘤及腹水抗体,纯化后鉴定单抗...     

牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用

目的建立牛血清Ig G(bovine immunoglobulin G,BIg G)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用BIg G-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIg G单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度。应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIg G抗原残留量。结果建立了以3E12D2为包被单抗(8.0μg/ml,100μl/孔),4A2G1B1-HRP为酶标抗体(1∶1 000稀释,100μl/孔)定量检测BIg G的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3~9.6 ng/ml,R~20.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1%~108.5%之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均10%;37℃放置3和6 d的稳定性均90%;该试剂样品与BIg G可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应。9批牛血清中BIg G含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIg G均明显去除,但BIg G占牛血清残留量(BSA+BIg G)的比例却明显上升。结论建立的BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测。     

犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

目的建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度、最佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105。建立的双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1%BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1∶800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8。用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法。     

EV71抗原ELISA定量检测方法的建立

目的建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测。方法采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样品中EV71抗原含量,并对该方法进行验证及应用。结果所建立的方法线性范围为5～80U/ml,R2=0.994,线性关系良好,定量限度为5U/ml;检测不同浓度的EV71抗原内部参考品,回收率为88%～119.0%;变异系数均小于15%;与甲肝病毒收获液、乙脑病毒灭活液、H5N1流感病毒裂解疫苗原液、小牛血清、人白蛋白、Vero细胞、MEM培养基及CoxA16收获液均无交叉反应;检测EV71灭活疫苗原液纯化过程样品的抗原含量,能有效反映抗原纯化趋势;检测铝吸附疫苗成品解离后抗原含量,准确性较高。结论已建立了EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性及重复性良好,可用于EV71疫苗生产过程中及终产品的抗原定量检测。     

WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及其临床应用

目的建立WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行初步临床应用。方法建立双抗体夹心ELISA法,定量检测血清中WuTac浓度,筛选最佳抗体包被浓度和酶标抗体稀释度,绘制标准曲线,并对该方法进行验证;应用该方法对36名健康志愿者单次注射不同剂量WuTac(0.05、0.1和0.2mg/kg)前后14个时间点的临床血清标本进行检测。结果最佳抗体包被浓度为0.2μg/ml,最佳酶标抗体稀释度为1∶15000,标准曲线的线性相关系数r≥0.99,线性范围为3.9～125ng/ml。高浓度WuTac标准品的变异系数小于15%;准确性为99.05%±5.00%(92.43%～110.02%);特异性良好。临床血清检测结果表明,WuTac在0.05～0.2mg/kg范围内呈线性药代动力学特征。结论已建立了WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,该方法的灵敏度、精密性和准确性均符合我国生物制品药代动力学研究的要求。     

牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的筛选高效抗牛血清白蛋白(BSA)单克隆抗体细胞株,并建立BSA抗原检测的双抗体夹心ELISA法。方法分别采用辛酸-硫酸铵法和葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗,并进行抗体类型、腹水效价、特异性和相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立BSA双抗体夹心ELISA检测法,并进行初步应用。结果筛选出4株可稳定分泌抗BSA单抗的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG,抗体滴度均可达10-6,特异性良好,相对亲和力较高。建立的双抗体夹心ELISA法线性范围为1.25～20ng/ml,R2>0.98,灵敏度为1.25ng/ml。结论已筛选出高效抗BSA的单抗,并建立了BSA双抗体夹心ELISA检测方法。     

四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的最佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证。结果定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMPCRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml。A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%。结论建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测。     

狂犬病病毒抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

目的建立狂犬病病毒(Rabies virμs,RV)抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,以应用于疫苗生产过程中RV含量的监测。方法将RV aGV株纯化抗原经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备抗RV单克隆抗体,纯化后以HRP进行标记,建立双抗体夹心ELISA检测方法。以狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品为定量标准,建立剂量-反应曲线,确定该方法的灵敏度,并对该方法的专属性、精密性及适用性进行验证。结果制备了2株针对不同抗原位点的单克隆抗体1E9和2H1,间接ELISA法测定腹水效价为1∶105～1∶107,纯化后蛋白含量分别为10.285和7.64 mg/ml。建立的ELISA法对RV抗原的最低检出限为1.03 mIU/ml,标准曲线的最佳线性范围为1.03～66 mIU/ml,相关系数为0.991 9。该方法对检测过程中可能遇到的杂质和添加物(人血清白蛋白、牛血清、Vero细胞培养上清)的检测结果均为阴性;检测3个浓度(20、12.50和3.13 mIU/ml)狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品的试验内和试验间变异系数的平均值分别为7.78%和14.0%;用该方法检测不同毒株、不同细胞生产的狂犬病疫苗的RV抗原含量的平均值在0.67～4.86 IU/ml之间。结论成功建立了RV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,可对来自不同毒株、不同细胞的狂犬病疫苗的RV抗原进行快速定量检测,为疫苗生产中的质量控制提供了简便的监测手段。     

狂犬病病毒糖蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立可快速检测狂犬病病毒(rabies virus,RabV)糖蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法用抗RabV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测RabV糖蛋白抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性、准确性、板内与板间精密性、灵敏度验证,对不同厂家(毒株分别为aG、PV、CTN、PM)生产的狂犬病疫苗与不同工艺阶段的狂犬病疫苗样品进行适用性检测。结果捕获抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶2 000和1∶4 000,最佳封闭剂为1. 5%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围在0. 003 2~0. 103 1 IU/mL之间,R2> 0. 98;准确性验证的回收率在97. 0%~110. 1%之间;精密性验证的板内变异系数<8. 6%,板间变异系数<13. 9%;检测不同厂家的狂犬病疫苗和不同工艺阶段的疫苗样品呈良好的剂量依赖效应。结论建立了适用于人用狂犬病疫苗糖蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于aG、PV、CTN、PM等不同毒株生产的狂犬病疫苗检测;也可用于病毒收获液、浓缩液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。     

检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用

目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。     

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者进行ALG的血药浓度监测(therapeutic drug monitoring,TDM)。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9~5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9~156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R2值为0.991 5,批内重复性CV值均10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%~107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1~3周及1~3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积(AOC)为(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)为(20.65±38.67)d(95%CI)。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。     

Sf9昆虫细胞宿主蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的建立Sf9昆虫细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)含量双抗体夹心ELISA检测方法。方法从Sf9昆虫细胞中提取总蛋白,免疫家兔,制备兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体,经辛酸-硫酸铵沉淀和CL-4B层析柱纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性;用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,采用改良过碘酸钠法将HRP酶标记至纯化的抗体上作为酶标抗体,采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法的最适工作条件。确定该方法的最佳线性范围及最低检测限,验证该方法的准确度及精密度。将表达戊型肝炎ORF2基因的重组杆状病毒感染Sf9细胞,收获病毒培养上清,制备3批纯化的重组蛋白,用建立的方法检测纯化过程中HCP含量的变化,验证其在纯化工艺中的适用性。与商品化试剂盒进行比较,检测两种方法的灵敏度及在制品中的适用性。结果纯化后的兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体纯度达90%以上,抗体效价为1∶10 000,可与Sf9细胞蛋白特异性结合。建立的双抗体夹心法ELSA方法最佳抗体包被浓度为20μg/ml,37℃孵育1 h;酶标抗体的工作浓度为1∶200,37℃孵育1 h;TMB室温显色30 min;测定各孔A450值。该方法的最佳线性范围为50~1 600 ng/ml,最低检测为50 ng/ml;不同浓度的Sf9细胞蛋白抗原回收率在87.8%~117%之间,变异系数均小于10%;制备的3批重组蛋白经超滤及层析纯化后,HCP含量均逐渐降低至小于50 ng/ml,纯化工艺可有效去除HCP;与商品化试剂盒比较,该方法更适用于检测戊肝类病毒颗粒样品。结论已成功建立Sf9昆虫细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于检测Sf9昆虫细胞/杆状病毒表达系统纯化的重组蛋白中HCP含量。     

牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立

目的制备牛对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法。方法将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体。以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800)及单克隆抗体浓度(0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、3. 2、6. 4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2 h、4℃孵育过夜)、封闭液(1%脱脂奶粉、5%脱脂奶粉、0. 5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2 h、37℃4 h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度。采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量。结果建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3. 2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5%脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜。牛PON-1蛋白标准品浓度在90～3 125 ng/mL浓度范围内,与A_(450)值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0. 618 6 x-0. 753 6,R~2=0. 981 3;5份样品检测结果均值为764. 21 ng/mL,回收率为97. 97%。市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显著低于对照组(P 0. 001)。结论成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度。     

单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立

目的建立单抗制品中CHO细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留双抗夹心ELISA检测方法。方法确定双抗夹心ELISA方法的最佳工作条件,并对该方法的精密度和准确度进行验证,确定线性范围及最低检出限;用建立的方法与市售试剂盒分别检测低、中、高浓度HCP标准品及抗TNF-α单抗原液、抗VEGF单抗纯化工艺样品中的HCP。结果建立的双抗夹心ELISA法最佳抗体包被浓度为1.5μg/ml,酶标抗体浓度为1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5 h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm为参比波长,450 nm为测定波长。该方法的线性范围为3.125~100 ng/ml,最低检测限为3.125 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间CV均小于15%,回收率为85.3%~115.1%。与商品化试剂盒检测结果基本一致,可用于检测纯化工艺样品。结论已成功建立单抗制品中CHO细胞HCP残留双抗夹心ELISA检测方法,该方法可代替市售试剂盒用于CHO细胞HCP残留检测,可使检测成本降低30倍。     

鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制

目的研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证。方法用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品。对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证。结果鼠疫菌F1抗原的最佳包被浓度为0.6μg/ml,HRP标记的F1抗原的最佳工作浓度为1︰7 000。制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5%,板间变异系数为7.1%;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95%¹12%之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100%;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年。结论成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断。