旋毛虫新生幼虫DNA结合相关蛋白基因的筛选与分析

目的筛选旋毛虫新生幼虫表达的可与宿主肌细胞染色体DNA结合的相关蛋白基因,寻找旋毛虫侵入及寄生过程中与宿主肌细胞发生结合的相关蛋白,为研究寄生虫与宿主间的信号转导、侵袭及长期寄生机制奠定基础。方法利用噬菌体展示技术构建旋毛虫新生幼虫T7噬菌体展示cDNA文库,用小鼠肌肉染色体DNA对展示文库进行筛选,随机挑选30个阳性克隆,进行PCR鉴定、测序分析和编码蛋白二级结构及翻译后修饰预测。结果旋毛虫新生幼虫T7噬菌体展示cDNA文库的原始文库库容量为2×105pfu,重组率为98%,95%的插入片段长度在250～2000bp之间,扩增后文库滴度为3×1012pfu/ml。对经4轮筛选后的克隆进行PCR鉴定及测序,获得13个基因序列,其中有4个(DN14、DN24、DN9及DN23)为旋毛虫新生幼虫DNA结合相关蛋白基因,分别与旋毛虫未知蛋白及假定ORF11.30、旋毛虫nudix水解酶及血吸虫SJCHGC05997蛋白、秀丽新杆线虫未知蛋白和旋毛虫TGF-β配基具有同源性。经编码蛋白质二级结构及翻译后修饰预测,这4种蛋白可能与旋毛虫包囊形成和寄生虫与宿主间信号转导有关。结论已成功构建了旋毛虫新生幼虫T7噬菌体展示cDNA文库,并利用小鼠肌肉染色体DNA筛选出4个可用于研究旋毛虫包囊形成及与宿主间信号转导机制的候选基因。     

旋毛虫成虫与肌幼虫排泄分泌抗原蛋白组分的比较分析

目的比较大理猪源旋毛虫(Trichinela spiralis)成虫与肌幼虫排泄分泌抗原(Excretory-secretory antigens,ES)的蛋白组分差异,并进一步分析其反应原性,为分离筛选出免疫原性和反应原性强的旋毛虫抗原成分奠定基础。方法分别收集和纯化旋毛虫成虫、肌幼虫虫体,制备ES,采用SDS-PAGE分析成虫和肌幼虫ES蛋白成分,Western blot分析其反应原性。结果经SDS-PAGE分析,旋毛虫成虫ES显示17条蛋白条带,相对分子质量范围在120000～14000之间,其中主带6条,相对分子质量分别为120000、64000、43000、40000、35000、33000;旋毛虫肌幼虫ES显示20条蛋白条带,相对分子质量范围在112000～10000之间,其中主带11条,相对分子质量分别为112000、66000、56000、55000、53000、49000、45000、43000、25000、21000、10000。Westernblot分析表明,旋毛虫成虫ES抗原显示7条反应带,相对分子质量分别为43000、40000、35000、27000、19000、18000、14000,其中相对分子质量43000、40000、27000、18000的条带着色明显;旋毛虫肌幼虫ES抗原显示14条反应带,相对分子质量范围在74000～12000之间,其中相对分子质量53000、49000、45000、43000、35000、27000、18000、12000的条带显色明显。结论旋毛虫成虫和肌幼虫ES抗原蛋白组分均复杂,有共同组分,也有不同组分,旋毛虫ES抗原具有较强的反应原性,是旋毛虫病研究的重要候选抗原。     

旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1的原核表达及鉴定

目的原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定。方法以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5 h,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG最佳诱导时间为4 h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性。结论原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础。     

旋毛虫iRNA对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的抑制作用

目的观察旋毛虫免疫核糖核酸(iRNA)对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的抑制作用。方法以不同剂量旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫ICR小鼠、家兔和山羊,ELISA检测抗体效价达1:1024的最低免疫剂量确定为最佳免疫剂量,同时取各实验动物肝、脾和淋巴结,制备旋毛虫iRNA,并进行鉴定。以不同剂量iRNA接种BALB/c小鼠,并在不同时间接种SP2/0肿瘤细胞(试验分为先荷瘤和后荷瘤进行)。在荷瘤20d时,处死小鼠,测量肿瘤体积和重量,并检测脾脏T淋巴细胞亚群的变化。结果旋毛虫肌幼虫可溶性抗原的最佳免疫剂量分别为:ICR小鼠:300μg/只;家兔:2mg/只;山羊:20mg/只。制备的旋毛虫iRNA各项指标均合格。各试验组小鼠肿瘤体积和重量均小于相应的对照组,且差异均有统计学意义;各试验组小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+比值较相应的对照组均有不同程度的增高。在后荷瘤试验组中,1mg组抑瘤效果最好;在先荷瘤试验组中,4mg组抑瘤效果最好。结论旋毛虫iRNA对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤细胞的生长具有较强的抑制作用。     

伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达及其纯化

目的原核表达并纯化伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Trichinella pseudospiralis serine protease inhibitor,Tpserpin)基因,并鉴定其抗原性。方法从伪旋毛虫肌幼虫提取总RNA,RT-PCR扩增Tp-serpin基因,插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,转化大肠埃希菌(E.coli)Rosetta gami(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot鉴定反应原性。结果重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,与GenBank中登录的Tp-serpin基因相似性达99%。表达的重组Tp-serpin蛋白相对分子量约43 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以可溶性形式存在;纯化后的重组Tp-serpin蛋白纯度达95%以上,可被伪旋毛虫感染60 d的猪血清特异性识别,具有较好的反应原性。结论成功构建了重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,并在E.coli Rosetta gami(DE3)中表达了重组蛋白,为旋毛虫病的血清学诊断候选抗原的研制及开发提供了科学依据,也为阐明serpin在伪旋毛虫入侵时期调节宿主免疫反应的作用奠定了基础。     

奇异变形杆菌疫苗候选抗原的鉴定及其免疫保护效果评价

目的 鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法 采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶（serine hydrolase,SH）两种膜蛋白的编码基因,克隆至载体pET-28a,于E.coli BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,进行Western blot检测。重组蛋白通过Ni Sepharose High Performance纯化后,经腿部肌内注射15只雌性昆明小鼠,100μg/（0.2 mL·只）,共免疫3次,间隔2周。末次免疫后15 d,经眶前静脉窦采血,分离血清,间接ELISA法检测特异性抗体水平;经小鼠腹腔接种致死剂量的奇异变形杆菌,接种1个月,观察小鼠存活情况,并计算抗原的免疫保护率。结果 提取的膜蛋白可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,经质谱鉴定与奇异变形杆菌APB87305(OmpF)、WP＿004247605(SH)的同源性为100%。原核表达的重组蛋白OmpF及SH可与奇异变形杆...     

生物信息学方法筛选华支睾吸虫成虫功能基因——钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白

目的本文通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因。方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断;并应用NCBI上的RPSBLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构。结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选的钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(CsCBLP)基因,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠钙调神经磷酸酶(CaN)同源性为53%,与尾刺耐格里原虫CaNB同源性为40%,与新小杆线虫属结合蛋白的同源性为51%;保守域的比对及功能域、二级结构的预测显示所筛选的CsCBLP是钙调神经磷酸酶B亚基的的类似物,属于钙结合蛋白家族。结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因。     

人前列腺癌PC-3细胞膜蛋白组学的分析

目的分析人前列腺癌PC-3细胞中的所有膜蛋白,全面展示PC-3细胞中的蛋白质表达谱。方法采用一维SDS-PAGE,结合高效液相色谱-串联质谱的方法,分离并鉴定PC-3细胞中的膜蛋白。结果在严格的过滤参数条件下,PC-3细胞中鉴定出2172种蛋白,其中1499种经过基因本体评注(GOA)显示为已知细胞组分,其余为未知细胞组分。在已知细胞组分中,564种(37.6%)蛋白为质膜蛋白,其中138种为跨膜蛋白。跨膜蛋白中,21.17%被预测至少有1个跨膜区,57.66%有1～3个跨膜区,30.66%有4～9个跨膜区,11.66%有不少于10个跨膜区。许多新的蛋白也被鉴定,其中包括假设蛋白和一些cD-NA序列。结论这些被鉴定蛋白的生物学功能和理化性质将有助于进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制,为寻找与前列腺癌转移相关的分子提供新的实验证据。     

抗旋毛虫硒蛋白T单克隆抗体的制备及其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果

目的制备抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体,并观察其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。方法用纯化的旋毛虫硒蛋白T重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体;将肝癌H7402细胞经大腿内侧皮下接种BALB/c裸鼠,1×10^7个细胞/只,采用制备的高效价单抗,按20、50及100μg/只剂量接种裸鼠,隔日1次,共5次,评价单抗对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。结果成功获得了3株稳定分泌抗旋毛虫硒蛋白T的单抗的细胞株:4D4、4H2及4F1,效价均达1∶204800以上,其中4H2抗体效价最高;20、50及100μg/只剂量组的抑瘤率分别为51.6%、56.2%和80.3%。结论制备的抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体对裸鼠体内肝癌H7402细胞具有明显的抑制效果。     

乙苯,苯乙烯的生产及合成乙苯,苯乙烯催化剂的研究进展

苯乙烯是重要的石油化工原料。本文介绍了国内外苯乙烯生产的发展概况，合成乙苯，苯乙烯所用的催化剂种类，并就苯乙烯生产及催化剂的发展趋势提出了自己的观点。     

Synthesis and characterization of homopolymers and copolymers of various acrylates and acrylonitrile

Various homopolymers and copolymers of methyl acrylate, ethyl acrylate, butyl acrylate, and acrylonitrile in different feed ratios were synthesized. These were characterized by IR, ¹³C-NMR, DSC, DTA, and TGA. Spectroscopic characterization helped in differentiating copolymers of different mol ratios. Thermal analysis revealed different degradation patterns for homopolymers and copolymers. The temperature and energy changes associated with various phase transitions were dependent on the chemical composition of homo- and copolymers, as expected. © 1993 John Wiley & Sons, Inc.     

生物质气化及生物质与煤共气化技术的研发与应用

总结了生物质原料的特点及生物质单独气化的缺点;介绍了国内外生物质气化技术及生物质与煤共气化技术的研发与应用现状;分析了在此领域国内外的发展趋势与前景;概括了开展生物质与煤共气化技术研发的意义。     

Electronic structures and reactivities of monometallic and bimetallic clusters of Au and Cu

The variation of the Au 4f binding energy of Au clusters with the cluster size has been established by measuring the binding energies of clusters whose size distributions were independently determined by HREM and STM. The binding energy increases significantly when the cluster size is less than 2 nm. Au-Cu bimetallic clusters of the composition Cu₃Au have been deposited for the first time on carbon substrates. The shifts in the core level binding energies of the bimetallic clusters show the effect of alloying in the case of large clusters, but show effects of both alloying and cluster size in the case of the small clusters. The interaction of CO with Cu₃Au clusters is stronger than with a bulk Cu metal. The interaction of CO with small Cu clusters also seems to be stronger than with bulk Cu or with large Cu clusters.     

钾盐资源及钾肥供需情况分析及预测

阐述了国内外钾盐资源及钾肥生产现状,对国内外钾盐的供需形势进行了分析及预测,从资源、原材料、国际市场三方面提出了解决我国钾盐短缺的措施。     

Kinetics and Mechanism of Oxidation of Mono- and Polyacetals

Abstract

Kinetics and mechanisms of oxidation of 6 acetals by molecular oxygen and ozone in liquid phase have been studied. Reaction with molecular oxygen (70°C, 15–16 hr) leads to the formation monoethers of the corresponding glycols with 68–90% selectivity. Salts of metals and complexes with crown-ethers have increased the reaction rate significally. Ozone have reacted with acetals with formation similar products. The mechanisms of intermediate stages have been proposed.     

Comparison of the Adhesion and Cohesion of Triblock and Random Copolymers of Styrene and Butadiene

A substantially greater detachment energy is required to strip a polyethylene tereph-thalate (Mylar) film from a styrene-butadiene-styrene (SBS) triblock copolymer compared to that for peeling from a random styrene-butadiene (SBR) copolymer. This is true even though the intrinsic interaction between the Mylar and each elastomer is expected to be similar because of their virtually identical chemical composition. It is proposed that this difference in peel strength (between the SBS and SBR) is a consequence of the much higher dissipative capacity of the former elastomer. Another manifestation of this is the higher cohesive tear strength of the SBS compared to the SBR. Extents of energy dissipation within each elastomer during detachment of the Mylar adherend are consistent with the hypothesis that the average maximum stress experience before detachment is some similar fraction of each elastomer's tensile strength.     

Wetting properties of homopolymers and copolymers of pentafluorostyrene and methylacrylate and homopolymer blends

Polypentafluorostyrene (PPFS), polymethylacrylate (PMA), and poly(pentafluorostyrene-co-methylacrylate), poly(PFS-co-MA) were prepared and the wetting characteristics of polymer blends of PPFS and PMA were compared with that of poly(PFS-co-MA) via contact angle measurements. The critical surface tension of polypentafluorostyrene was found to be 22.6 dyne/cm, which is comparable to the value reported for polytrifluoroethylene (22 dyne/cm). The critical surface tension of poly(PFS-co-MA) is not linearly related to its composition. The polymer blends of PPFS and PMA exhibit significant surface enrichment of the fluoropolymer. The harmonic-mean method¹ was employed to determine surface tensions of these polymers and many known polymers. It is found that the method produces useful surface tension data provided the contact angle values are derived from testing liquids of dissimilar polarity.     

责任和责任心的涵义与结构

责任是人应主动承担的角色义务和对其因过失所造成后果应承担的责罚.有两层涵义:一是义务;二是后果.责任心是个体自觉做好分内事务和履行道德义务的心理倾向,是个性心理品质成分中自我特征维度上的重要内容.责任心具有两个方面的涵义:一是角色分内职责;二是角色道德义务.责任心是一种通过责任认知、责任个性和责任适应的动态形式表现出来的静态品质,责任心是责任心过程结构与责任心关系结构相互制约、相互影响的统一体.     

二甲基二烯丙基氯化铵和丙烯酰胺的合成及应用

用复合引发体系(过硫酸盐-偶氮类引发剂)和脂肪胺类氧化还原体系引发,在实验室获得了单体转化率≥98%,特性粘数高于13.6 dL/g的阳离子共聚物PDA,探讨了控制聚合物分子量的影响因素.