控释重组人骨形态发生蛋白-2和血管内皮生长因子的微囊支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的探讨控释重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant huaman bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)微囊支架对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,b MSCs)向成骨细胞分化的影响。方法以聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸三嵌段共聚物[polylactide-poly(ethylene glycol)-polylactide,PELA]为囊材,采用复乳溶剂挥发法制备外黏附rhBMP-2内包封VEGF的微囊支架。经ELSIA法检测微囊支架在PBS中释放rhBMP-2和VEGF的浓度。将微囊支架加入bMSCs,于培养后第3、7、14天,MTT法检测微囊支架对bMSCs活性的影响,Western blot法检测微囊支架对bMSCs向成骨细胞分化过程中MAPK通路相关蛋白及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达水平的影响。结果微囊支架于PBS中培养第2天rhBMP-2释放约60%,VEGF释放约32%。随着培养时间的延长,微囊支架对bMSCs的细胞活性无明显影响(P0. 05);培养后第14天磷酸化ERK1/2及ALP表达水平均显著高于第3和7天(P 0. 05),培养后第7天显著高于第3天(P 0. 05);培养后第3、7、14天磷酸化JNK及磷酸化p38表达水平变化差异无统计学意义(P 0. 05)。结论控释rhBMP-2及VEGF的微囊支架可诱导bMSCs向成骨细胞分化,可能是通过激活MAPK通路发挥作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外向血管平滑肌样细胞诱导分化过程中Periostin的表达及其作用

目的探讨血小板源性生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)-BB诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向血管平滑肌样细胞(Vascular smooth muscle-like cells,VSMLCs)分化过程中Periostin的表达及其在促VSMLCs分化中的作用。方法采用全骨髓贴壁培养法分离和培养大鼠BMSCs,取第2代BMSCs分为2组:诱导Ⅰ组(用50 ng/ml PDGF-BB单独向VSMLCs诱导)和诱导Ⅱ组(加入地塞米松1μmol/L、胰岛素1μmol/L、吲哚美辛1μmol/L、3-异丁基-1甲基黄嘌呤0.5 mmol/L,向脂肪样细胞诱导),以大鼠胸大动脉平滑肌细胞作为阳性对照。分别于诱导后7 d和14 d,采用RT-PCR检测细胞中平滑肌肌动蛋白(SMα-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(SM MHC)、平滑肌肌钙结合蛋白(SM Calponin)和Periostin mRNA的转录水平,Western blot检测Periostin蛋白的表达水平。结果诱导Ⅰ组细胞的SMα-actin、SM MHC、SMCalponin和Periostin基因mRNA及Periostin蛋白的表达水平14 d比7 d显著增强,且差异有统计学意义(P<0.05);14 d与阳性细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05);未诱导组及诱导Ⅱ组在14 d均无表达。结论 PDGF-BB(50 ng/ml)能够单独诱导BMSCs向VSMCs分化,Periostin在此过程中起重要作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞向成骨与成脂分化过程中相关基因的表达变化

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨与成脂分化过程中相关基因表达的变化。方法采用全贴壁法分离培养大鼠BMSCs,并观察其形态学特征的变化,MTT法检测其生长状况,并绘制生长曲线。分别采用成骨和成脂诱导剂对第4代BMSCs进行诱导分化,应用碱性磷酸酶试剂盒、茜素红和油红O染色液检测其ALP活性、成骨和成脂分化能力;RT-QPCR检测诱导0、7、14和21 d的成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶(ALP)及成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxidase proliferator activated receptor gamma,PPARγ)和脂肪酸结合蛋白(FABP4)的表达变化。结果全骨髓贴壁法能成功分离培养BMSCs,传代细胞生长增殖迅速,以长梭形细胞生长为主,细胞生长曲线呈S形。第4代BMSCs分别经成骨和成脂诱导剂诱导后,ALP、茜素红和油红O染色均呈阳性;诱导7、14和21 d后,Runx2、OCN、ALP、PPARγ和FABP4基因mRNA的表达量均显著高于0 d(P0.05);成骨分化过程中,Runx2和ALP在第7天时表达量最高,之后呈下降趋势,OCN的表达量呈稳定上升趋势;成脂分化过程中,PPARγ在第7天时表达量最高,FABP4始终高表达。结论 BMSCs具有易于体外分离培养、扩增和经诱导后具有多向分化潜能等特点,成骨和成脂分化相关基因的表达量随诱导时间延长而变化,呈明显的时序性表达差异,提示分别在成骨与成脂分化过程中起重要调控作用,为BMSCs在骨、细胞和基因等工程中的机制研究提供了实验依据。     

淫羊藿苷调控BMP-2与OSX促进成骨细胞增殖的研究

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)调控BMP-2与OSX对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。方法:不同浓度淫羊藿苷处理成骨细胞后,细胞增殖实验(CCK-8)和碱性磷酸酶(ALP)检测评价成骨增殖分化能力,激光共聚焦显微镜观察成骨细胞的骨架形态,免疫印迹法(WesternBlot)检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和成骨相关转录因子(OSX)表达。结果:与对照组相比,淫羊藿苷促进成骨细胞增殖分化,4μg/L淫羊藿苷对成骨细胞增殖作用最佳。细胞活性升高,镜下可见细胞伸展更多伪足,Western Blot显示BMP-2和OSX表达增高(p0.05)。结论:淫羊藿苷有促进成骨细胞增殖分化,可能是通过调节BMP-2和OSX蛋白表达。     

β-catenin对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨经典Wnt信号通路关键节点β-catenin对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法用重组腺病毒介导BMP9在C3H10T1/2细胞中过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调β-catenin的表达,并通过RNA干扰抑制β-catenin的表达。分析C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)基因mRNA的转录水平;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积。结果 BMP9单独作用能诱导C3H10T1/2细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性;单独的β-catenin无成骨诱导作用,但可剂量依赖性地增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性,并促进BMP9诱导的细胞OPN和OC基因mRNA的转录水平及钙盐沉积;抑制β-catenin表达可显著降低BMP9诱导的C3H1OT1/2细胞的ALP活性(P0.05),下调OPN和OC基因mRNA的转录水平,并抑制钙盐沉积。结论经典Wnt信号通路可能通过β-catenin协同BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,且BMP9诱导的成骨分化可能需要通过Wnt/β-catenin途径来实现。     

黄芪总黄酮对大鼠原代成骨细胞的影响及其机制研究

在大鼠颅骨原代成骨细胞中加入不同浓度的黄芪总黄酮(ATF),用MTT法检测细胞增殖,用碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原及骨钙素水平检测细胞分化,用茜素红染色法检测细胞矿化,用ELISA法和Western blot方法检测成骨细胞中骨形成蛋白(BMP-2)及核心结合因子(Runx-2)的表达。结果表明,ATF能剂量依赖性地促进大鼠原代成骨细胞的增殖、分化及矿化,同时上调成骨细胞中BMP-2和Runx-2蛋白的表达。提示ATF可能通过上调成骨细胞中BMP-2和Runx-2的表达来促进成骨细胞的成骨活性。     

去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞的分化

目的观察去上皮羊膜及其浸提液体外诱导骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向上皮细胞的分化,并探讨其机制。方法从胎儿四肢长骨分离BMSCs,扩增后采用流式细胞术分析第3代(P3)细胞表面抗原(CD29、CD34、CD71和HLA-DR)的表达,并用4,6-乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)标记第4代BMSCs(P4-BMSCs)。机械法去除正常胎盘羊膜上皮,制成去上皮羊膜,并制备去上皮羊膜浸提液。将DAPI标记的BMSCs接种于羊膜上,设加或不加表皮细胞生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、类胰岛素1号生长因子(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)、羊膜浸提液诱导组及细胞爬片对照组,体外诱导培养后,采用免疫荧光组织(细胞)化学染色学法检测各组细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)、EGF-R和IGF-1-R的表达,并于诱导后第10天计算CK阳性细胞率。结果原代BMSCs呈典型旋涡状生长,P3细胞表达CD29和CD71,不表达CD34和HLA-DR。羊膜组和细胞爬片组BMSCs在加入EGF或IGF-1诱导后,表达EGF-R和IGF-1-R的时间较未加生长因子的对照组提前2～4 d,表达CK的时间提前2～6 d,单用羊膜组或羊膜浸提液组的表达时间差异无统计学意义(P>0.05);诱导第10天,单用羊膜或羊膜浸提液诱导组的CK阳性细胞表达率明显高于细胞爬片对照组(P<0.05);羊膜与EGF、IGF-1联合诱导组高于单用羊膜组(P<0.05);EGF诱导组高于IGF-1诱导组(P<0.05)。结论羊膜及羊膜浸提液、外源性EGF和IGF-1在体外均可诱导BMSCs向上皮细胞分化,羊膜可能主要通过其所含的细胞因子诱导BMSCs向上皮分化。     

Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P 0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P 0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。     

Wnt2和β-catenin在乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中的表达与临床意义

目的探讨Wnt2和β-catenin在乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中的表达与临床意义。方法采用RT-PCR法检测7份乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织中Wnt2和β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学方法检测40份浸润性乳腺导管癌及其配对癌旁乳腺组织中Wnt2和β-catenin蛋白的表达水平;分析Wnt2和β-catenin与乳腺癌临床病理特征的相关性及二者联合检测与乳腺癌恶性程度及淋巴结转移的相关性。结果乳腺癌组织中Wnt2和β-catenin基因mRNA的相对转录水平均显著高于配对癌旁乳腺组织(P0.05)。Wnt2在配对癌旁乳腺组织细胞质中呈弱表达,在浸润性乳腺导管癌组织细胞质中呈高表达,乳腺癌Wnt2阳性表达率(77.5%)显著高于配对癌旁乳腺组织(15.0%)(P0.05);配对癌旁乳腺组织中β-catenin均表达于细胞膜中,在浸润性乳腺导管癌组织细胞质及细胞核中均有表达,异常表达率为67.5%(27/40)。Wnt2和β-catenin的表达与浸润性乳腺导管癌患者年龄无关(P0.05),与乳腺癌临床分期、病理组织学分级及淋巴结转移有关(P0.05)。Wnt2和β-catenin均为阳性表达者的肿瘤恶性程度和淋巴结转移的发生率显著高于两者均为阴性或两者之一为阳性表达者(P0.05)。结论 Wnt2和β-catenin表达在乳腺癌发生和侵袭转移中可能起重要作用,本实验为进一步探讨Wnt2和β-catenin在乳腺癌发病机制中的作用奠定了基础。     

PELA-OmpK微球疫苗的部分特征及其对鲫鱼的口服免疫效果

目的研究聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide-co-polyethylene glycol,PELA)包裹哈维弧菌(Vibrio har-veyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK制备的微球疫苗的部分特性及其对鲫鱼(Carassius auratus gibelio)的口服免疫效果。方法用可生物降解的合成高分子材料PELA,通过乳化溶剂挥发法包裹OmpK,制备微球疫苗,Bradford法测定蛋白浓度,计算蛋白包裹率;通过扫描电镜观察微球粒径大小及其在4℃保存不同时间的形貌。取鲫鱼随机分为3组:微球疫苗组、OmpK蛋白组和空白对照组,前两组采用疫苗或蛋白拌饲投喂方式口服免疫,投喂3 d,间隔7 d,再投喂3 d加强免疫;对照组投喂不含疫苗的饲料。加强免疫4周和8周后,经腹腔注射20 LD50的Vh EcGS020802株攻击,记录各组鱼死亡数,计算相对免疫保护率。结果制备的PELA-OmpK微球疫苗中OmpK蛋白的包裹率达78%。微球粒径小于12μm,且90%微球的粒径小于5μm。4℃保存10 d微球表面光滑、圆整;保存30 d PELA微球降解,粒径较大的微球表面出现空洞;保存60 d可见大量碎片,微球表面毛糙松散,出现多个空洞。微球疫苗加强免疫鲫鱼4周和8周后,对活菌攻击的相对免疫保护率分别为70%和48%,而口服OmpK蛋白组和空白对照组鱼全部死亡。结论用PELA包裹裸疫苗制备成微球疫苗,对抗原具有一定的保护作用,PELA用作鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。     

快速膜乳化法制备尺寸均一PELA多孔微球及其孔径调控

采用快速膜乳化法,以二氯甲烷为油相,通过溶剂挥发制孔,在室温下制备了一系列聚乙二醇-聚乳酸共聚物(PELA)多孔微球. 结果表明,优化的制备条件为：搅拌速度250 r/min、油相中PELA浓度50 g/L、水/二氯甲烷/PVA水溶液体积比1:2.5:25及mPEG:PLA分子量比1:14,在该条件下可制备粒径均一、尺寸可控的PELA多孔微球,且孔径较大,孔径最大为15.0 nm,属介孔材料,可用于蛋白多肽类药物的吸附.     

微囊化共培养诱导骨髓间充质干细胞体外定向成骨分化研究

为了模拟体内成骨微环境,为骨组织工程提供一种调控干细胞体外向成骨细胞定向分化的共培养新方法,SD大鼠骨髓间充质干细胞和包埋在海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-poly-lysine-alginate,APA)微胶囊中的SD大鼠成骨细胞进行体外共培养。共培养过程中,通过碱性磷酸酶(ALP)定量、定性分析以及钙化结节(von Kossa)染色等手段来评价骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化。结果表明在体外微囊化共培养过程中,被诱导细胞的胞内ALP酶活性逐渐高于对照组的干细胞,接近于成骨细胞;ALP以及von Kossa定性染色证实被诱导细胞具有较高的ALP活性以及具有分泌钙基质的能力。微囊化成骨细胞和外部干细胞的共培养体系较好地模拟了体内干细胞向成骨细胞转化的成骨微环境,促进了干细胞向成骨细胞的体外定向分化;微胶囊膜将成骨细胞和干细胞进行了隔离,避免了两者的直接接触和可能的细胞交叉污染混合,同时利于分离目的细胞,这种微囊化共培养体系为骨组织工程提供了一种安全调控干细胞体外成骨定向分化的工程化新方法。     

相分离-溶胀法制备生物可降解PELA多孔纳米微球

采用相分离-溶剂去除法制备纳米尺度的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物(PELA)微球,分析了纳米微球在溶液中的形成机理;用有机溶剂对纳米微球进行溶胀制孔,制备出具有不同孔道特征的纳米微球. 结果表明,以乙醇+丙酮为油相、去离子水为水相,油相中PELA含量6.5 g/L、水相中SDS含量1%、油与水相体积比1:6、油相中乙醇含量50%(j)条件下,所制微球粒径为78.48 nm. 溶胀时间为0.5 h时,以甲苯为溶胀剂所制PELA微球具有中空单孔结构,以二氯甲烷为溶胀剂所制PELA微球具有多孔结构. 用相同方法制备了具有孔结构的聚乳酸、聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物纳米微球,其与PELA的成孔趋势相同. 以模拟体液考察多孔PELA纳米微球的降解性能,30 d可充分降解.     

成骨生长肽对鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用

目的探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cell,mBMSC)增殖及成骨分化的作用及其分子机制。方法采用乳鼠骨片法分离mBMSC,流式细胞术测定mBMSC表面特征性分子。以10-5 mol/L OGP10-14作用于mBMSC,以不含OGP10-14的成骨诱导培养基作为对照组,MTS法检测OGP10-14对mBMSC增殖的影响;茜素红染色评价OGP10-14对mBMSC成骨分化的作用;qPCR及Western blot法检测OGP10-14干预下mBMSC骨分化相关因子β-catenin、RUNX2、BSP和细胞周期相关因子cyclin B1、CDK2、c-myc mRNA及蛋白表达水平。结果原代分离培养的mBMSC高表达CD29和CD90,低表达CD45和CD11b/c,符合BMSC的表型特征。与对照组相比,OGP10-14组mBMSC培养24、48及72 h时均促进细胞增殖(P 0.05)。茜素红染色显示,对照组部分细胞呈聚集生长,集落状,随诱导时间延长,出现红色层状矿化结节,OGP10-14组mBMSC矿化结节较对照组呈增加趋势。与对照组比较,OGP10-14组β-catenin、RUNX2、BSP mRNA及蛋白水平均升高(P 0.05),cyclin B1、CDK2、c-myc mRNA及蛋白水平均明显升高(P 0.01)。结论 OGP10-14通过促进成骨分化和触发细胞周期cyclin B1/CDK2途径促进mBMSC增殖,进而促进骨形成。     

含镁介孔生物活性玻璃/锌黄长石复合支架的成骨活性

骨修复支架的成骨活性和力学性能对其使用效果至关重要。以具有良好力学性能的锌黄长石（Ca₂ZnSi₂O₇,HT）为基体,以 Mg 掺杂的生物可降解介孔生物活性玻璃（MBG）为涂层,制备 Mg-M/HT 多孔复合支架。研究 Mg 掺杂对复合支架微观结构和成骨活性的影响。利用 X 射线衍射仪、透射电子显微镜和 Fourier 变换红外吸收光谱仪等手段对复合支架的物化性能进行表征。利用人骨髓间充质干细胞（h BMSCs）考察 Mg 掺杂对支架成骨活性的影响。结果表明：Mg 掺杂虽然一定程度上降低了 MBG 的介孔有序度,但 Mg-M/HT 复合支架仍具有均匀有序的孔道结构。与 MBG 改性的 HT 生物支架（M/HT）相比,Mg-M/HT 支架具有更高的细胞内黏着斑蛋白和整合素以及碱性磷酸酶、钙结节和骨钙素的表达量,表明 Mg 掺杂可促进 M/HT支架的成骨细胞活性,在骨组织修复领域具有较好的应用潜力。     

骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞的分化

目的探讨乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的神经分化情况,以期为视网膜退行性疾病提供治疗方案。方法体外分离培养Wistar大鼠乳鼠BMSCs,观察BMSCs的增殖情况并进行鉴定;制备乳鼠视网膜细胞条件分化液,以其诱导BMSCs,观察BMSCs的神经分化情况,并行免疫组化鉴定。结果体外培养获得了较纯的BMSCs;在乳鼠视网膜细胞条件分化液的环境中,诱导后72h,BMSCs胞体收缩成锥形或球形,细胞突起变细、变长,呈神经细胞的典型形态;免疫组化结果显示,部分细胞呈神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)和Thy1.1阳性反应。结论乳鼠视网膜细胞条件分化液可诱导BMSCs分化成视网膜神经节样细胞。     

人骨形态发生蛋白9对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制

目的探讨人骨形态发生蛋白9(Human bone morphogenetic protein 9,hBMP9)对人骨肉瘤细胞MG63和U2OS的抑制作用及其机制。方法用重组腺病毒AdBMP9分别感染MG63和U2OS细胞,并设空白对照组(不加任何处理因素)和AdGFP感染对照组,免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)和Western blot法检测感染后两种细胞中hBMP9的表达水平;MTT和台盼蓝拒染活细胞计数法检测细胞的增殖活力;Hoechst/PI荧光双染法检测细胞的凋亡情况;划痕愈合试验检测细胞的迁移能力;ICC法检测Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin的表达。结果AdBMP9感染的两种细胞中hBMP9的表达水平均明显高于空白对照组和AdGFP感染组(P<0.05);hBMP9表达的上调可抑制MG63和U2OS细胞的增殖,且呈时间依赖性(P<0.01),并使两种细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),迁移能力明显下降(P<0.01),β-catenin的表达量明显减少(P<0.01)。结论 hBMP9可能通过下调Wnt/β-catenin信号途径活性,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移,并促进其凋亡。     

当归多糖预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞黏附分子表达及细胞周期的影响

目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharide,APS)预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)黏附分子表达及细胞周期的影响。方法将BALB/c小鼠分为4组:正常对照组(不作任何处理)、NS组(经腹腔注射生理盐水)、2mg/kgAPS组(经腹腔注射2mg/kgAPS)和8mg/kgAPS组(经腹腔注射8mg/kgAPS),连续注射7d后,进行照射,并继续给药13d。分别于照射后第7、14天采集各组小鼠外周血,并取骨髓,进行WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达及BMNC细胞周期的变化;半定量RT-PCR和Western blot法分别检测小鼠BMNC细胞周期蛋白D(2CyclinD2)mRNA转录水平和蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC数量均明显减少,Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达明显下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),CyclinD2 mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);2mg/kgAPS组和8mg/kgAPS组能增加外周血各指标及BMNC数量(P<0.05),明显降低第7和14天Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达水平(P<0.05),降低G0/G1期细胞比例(P<0.05),提高CyclinD2 mRNA的转录水平和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 APS预防给药能通过降低放射损伤小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子的表达水平,上调BMNC的CyclinD2 mRNA和蛋白表达来加速BMNCG1期向S期的转换,促进造血恢复。     

Poly IC佐剂狂犬病疫苗诱导小鼠的免疫应答

目的观察PolyIC佐剂狂犬病疫苗诱导小鼠的免疫应答。方法将PolyIC佐剂狂犬病地鼠肾细胞疫苗(PHKCV+P)、人用狂犬病地鼠肾细胞疫苗(PHKCV)和中国狂犬病疫苗参考品(R)稀释后,分别于0d1次和0、7d2次腹腔注射BALB/c小鼠,另设PolyIC佐剂对照组(P)和空白对照组(N),并分别于初免后第7天和第14天处死小鼠,分离血清,检测中和抗体水平;同时取脾脏,采用ELISPOT法检测脾淋巴细胞经狂犬病疫苗刺激后分泌IFNγ的水平;另1组相同免疫的小鼠于初免后第7天和第14天用CVS毒株经脑腔攻击,观察疫苗的保护效果。结果小鼠免疫2针后,PHKCV+P组小鼠血清中和抗体水平明显高于PHKCV组;免疫1针和2针后,PHKCV+P组免疫小鼠诱生的特异性IFNγ斑点形成细胞(SFC)数均高于其他疫苗组,其保护效果明显优于PHKCV组。结论 PolyIC佐剂狂犬病疫苗可减少抗原用量,增强细胞免疫和体液免疫应答,特别是能产生早期的细胞免疫应答,从而提高传统狂犬病疫苗的保护效果。     

苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响

目的探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱)。苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平。结果经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.05);SALL4基因与β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(r s值分别为0.912、0.818和0.832,P均<0.01)。结论苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用。