金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法的建立及应用

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,并进行初步应用。方法将金黄色葡萄球菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立金黄色葡萄球菌液相芯片检测方法,通过L(934)正交设计试验优化方法的反应条件;对建立的方法进行灵敏度和特异性验证;应用建立的方法检测200份食品样品,并与国家标准检测方法进行比较。结果所建立的检测方法的最佳反应条件为:多克隆抗体工作浓度为1∶100,生物素标记的二抗工作浓度为1∶1 000,链霉亲和素-藻红蛋白的工作浓度为2μg/ml,生物素标记的二抗与SA-PE的反应时间为40 min;建立的方法检测金黄色葡萄球菌的灵敏度可达103CFU/ml,检测其他常见食源性致病菌无交叉反应;建立的方法与国家标准方法检测200份食品样品的结果基本相符。结论已建立了一种快速检测食品中金黄色葡萄球菌的液相芯片检测方法,能够应用于实际样品的检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体PhMASA-WJ的生物学特性及其对小鼠败血症的疗效

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)噬菌体PhMASA-WJ的生物学特性及其对小鼠败血症的疗效,为开发高效低毒的抗菌药物奠定实验基础。方法以MRSA(USA300)为宿主菌,从地下污水中分离筛选出1株噬菌体PhMASA-WJ,双层琼脂平板培养法测定噬菌体效价,点滴法测定噬菌体裂解谱,确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),提取噬菌体全基因组并进行酶切鉴定,电镜观察噬菌体形态,并检测噬菌体的体外裂解效果、安全性及其对小鼠败血症的疗效。结果 PhMASA-WJ在USA300菌苔上形成直径1～2 mm的圆形、透明且边界清晰的噬菌斑,PhMASA-WJ效价为7. 1×10⁸ PFU/m L,其为专一裂解金黄色葡萄球菌的噬菌体,最佳MOI为0. 001,属于RNA病毒,基因组大小约23 000 bp。电镜观察显示,PhMASA-WJ属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。动物实验证实,PhMASA-WJ对小鼠无毒副作用,败血症小鼠经PhMASA-WJ...     

6株金黄色葡萄球菌菌株的鉴定

目的对6株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus,简称金葡菌)菌株进行鉴定,为研制相关疫苗提供参考。方法将稀释的6株疫苗研制用备选金葡菌菌株49521、12602、49525、12605、55804、10832及质控菌株25923、12228菌悬液划线接种TSA平板及Columbia血平板,观察菌落形态,并涂片染色镜检;利用API Staph生化试剂盒、staphylase test血浆凝固酶检测试剂盒及30μg头孢西丁药敏纸片对菌株进行鉴定;利用PCR法鉴定菌株16S r RNA基因、荚膜基因型及mec A基因;用系列稀释的菌悬液经腹腔注射BALB/c小鼠,初步测定菌株毒力。结果6株金葡菌经平板培养,可见圆形、凸起、不透明、有光泽的菌落,Columbia血平板培养的菌落周围可见透明溶血环,镜检结果为革兰阳性球菌,呈单、双或葡萄串状排列。6株菌株的生化反应结果相同,且与质控菌株25923反应结果一致;6株菌株的凝固酶试验结果均为阳性,均对头孢西丁敏感,均未扩增出mec A基因片段,为甲氧西林敏感菌株(methicillin sensitive Staphylococcus aureus,MSSA)。6株菌株均扩增出1 544 bp的16S r RNA基因片段,与Gen Bank中的参考序列NR_075000.1的同源性均为99%;菌株49521、12605、55804、10832均扩增出340 bp的cap5基因片段,与Gen Bank中序列U81973.1的同源性为99%~100%;菌株12602、49525均扩增出171 bp的cap8基因片段,与Gen Bank中序列U73374.1的同源性均为100%。6株菌株的半数致死量(LD50)均在2.5×108~2.5×109 CFU之间。结论对6株疫苗研制用备选金葡菌进行了鉴定,为疫苗研制中菌株鉴定及不同荚膜型菌株的选择提供了参考。     

抗金黄色葡萄球菌IgY的功能性试验

目的　观察抗金黄色葡萄球菌IgY的生物学效应及稳定性。方法　将金黄色葡萄球菌稀释至适宜浓度 ,用微量凝集法测定IgY抗体的生物学效应及稳定性。结果　抗体IgY(10mg ml)溶液能明显抑制金黄色葡萄球菌生长 ,且能使感染性病灶症状消失 ,治愈病灶局部未检出葡萄球菌。抗体IgY在 2 5℃、37℃条件下活性稳定 ;巴氏消毒 6 4℃条件下 15min活性下降 4 0 % ,15min以后迅速下降 ;70℃作用 15min活性下降 70 % ;在pH4 0～ 7 9环境中活性改变不显著。结论　抗金黄色葡萄球菌IgY具有很好的生物学效应和高度稳定性。     

菌落PCR技术检测化妆品中金黄色葡萄球菌

利用菌落PCR技术,以金黄色葡萄球菌的特有基因femA为靶基因,选择特异引物．进行扩增,鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有金黄色葡萄球菌基因组的样品中得到条带。     

幼儿园毛巾金黄色葡萄球菌污染状况及分析

目的了解幼儿园毛巾金黄色葡萄球菌污染状况,进一步了解其消毒质量,为卫生监督管理提供依据。方法用细菌分离、培养、鉴定的方法对毛巾做金黄色葡萄球菌检测。结果从我市17家幼儿园34份毛巾中检出2株金黄色葡萄球菌,2株金黄色葡萄球菌均从同一家幼儿园的2份毛巾中检出。结论多数幼儿园的毛巾消毒质量是合格的,仅一家幼儿园毛巾被金黄色葡萄球菌污染,其消毒质量不容乐观,相关部门应加强对幼儿园的消毒指导和管理。     

异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的抗生素后效应

目的 了解异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球茵(h-VRSA)对万古霉素的抗生素后效应(PAE)等药代动力学特点,探讨h-VRSA的存在,对万古霉素的杀菌活性及其临床应用方面的影响.方法 分别检测ATCC 29213和h-VRSA(原代培养)的最低抑菌浓度(MIC).最低杀菌浓度(MBC)以及PAE.结果 ATCC 29213的MIC和MHC分别为1 μ g/mL和16μg,/mL,h-VRSA(原代)的MIC和MBC分别为2μg/mL和64μg/mL;两者PAE分别为0.9 h和2.2 h.结论 与ATCC29213不同,h-VRSA的PAE明显延长;MIC为2μg/mL的h-VRSA其MBC可以达到64 μ g/mL,已经高于万古霉素的有效血药浓度峰值(20-40)μg/mL;提示单独使用万古霉素已经不能完全清除h-VRSA.     

金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶组分分析

目的对金黄色葡萄球菌滤液制剂中凝固酶进行纯化,并对其性质及作用进行分析。方法用分子筛层析等方法纯化凝固酶,用HPLC、光谱等方法对其进行纯度和性质分析。用双向免疫扩散试验和T淋巴细胞增殖试验检测其生物学特性。结果经纯化的凝固酶纯度达97%以上,相对分子质量约为350000,含17种氨基酸,主要紫外吸收峰出现在260nm左右,α-螺旋含量占27.3%,组分中含糖约18.1%,T淋巴细胞增殖试验和双向免疫扩散法证明纯化的凝固酶具有生物学活性。结论金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶为一类糖与蛋白复合物,具有抗原活性,可能在金黄色葡萄球菌滤液的功效中发挥作用。     

含钛高炉渣抗金黄色葡萄球菌的性能

以含钛高炉渣(titanium-bearing blast furnace slag,TBBFS)为原料,制备了粉状抗菌材料.采用抑菌环抗菌标准确定材料的抗菌性能.通过对金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,sa)的生物抗菌实验,评价经过改性处理后的TBBFS的抗菌性能.结果表明:在800℃焙烧后的TBBFS粉体具有良好的抗sa性能;无掺杂样品的抑菌环厚度为4.7mm,氯化银(AgCl)掺杂后材料的抗菌性增强,抑菌环随掺杂比例的上升略有增大,氧化铜(CuO)掺杂降低了材料的抗菌性能.     

金黄葡萄球菌核酸探针检测方法的建立

目的建立快速检测食品中金黄葡萄球菌的核酸探针检测法。方法通过使用吖啶酯标记的特异DNA探针检测金黄葡萄球菌,确定最高和最低探针浓度,验证该方法的特异性及敏感性,并与传统国标法的检测结果进行比较。结果核酸探针法最高探针浓度为2pmol∕50μl,最低探针浓度为0.25pmol∕50μl;该方法特异性良好,检出纯培养菌落最低限约为106cfu∕ml;与国标法检测结果一致性较高。结论核酸探针法可用于食品中金黄葡萄球菌的快速检测。     

噬菌体单链抗体碱性磷酸酶细胞ELISA检测方法的建立

目的建立噬菌体单链抗体碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)细胞ELISA检测方法,以期排除外周血中白细胞的干扰,将筛选到的噬菌体抗体用于临床样本的检测。方法从大容量噬菌体抗体库中筛选与食管癌细胞结合的噬菌体单链抗体,制备食管癌细胞KYSE-170和EC109鉴定板及白细胞鉴定板,采用ALP细胞ELISA法分析筛选到的噬菌体抗体与两种食管癌细胞及白细胞的结合活性,同时与辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)细胞ELISA法进行比较,以抗卵清蛋白(ovalbumin,OA)为阴性对照。结果经ALP细胞ELISA法检测,筛选到的噬菌体抗体1、2、3均可与KYSE-170和EC109细胞结合,A405值在检测范围内;3个噬菌体抗体与不同食管癌细胞系的结合活性差异有统计学意义(P<0.001);抗OA抗体与两种食管癌细胞的结合活性明显低于3个噬菌体抗体,且差异有统计学意义(P<0.001);3个噬菌体抗体与白细胞结合的A405值在检测范围内,与食管癌细胞系的结合活性相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ALP细胞ELISA法可鉴定噬菌体单链抗体,并可排除白细胞的干扰,有望应用于临床样本的检测。     

中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立

目的建立中蜂囊状幼虫病病毒(chinese sacbrood,CSBV)依赖解旋酶扩增(helicase-dependent amplific ation,HDA)检测方法,并对该方法进行优化及验证。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫RNA,以其为模板进行HDA,对建立的HDA的引物浓度(原始浓度为50μmol/L,进行10、20、40、80、160、240、320倍稀释)、反应温度(60、65及70℃)及时间(60、90及120 min)进行优化,并对优化的方法进行特异性、敏感性及稳定性验证。经电镜观察、RT-PCR及优化的HDA法对37份临床样品进行检测。结果 HDA最佳引物浓度、反应温度及时间分别为5μmol/L、65℃及90 min;CSBV与健康幼虫、蜜蜂急性麻痹病毒(acute bee paralysis virus,ABPV)、蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus,CBPV)、黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)和残翅病毒(deformed wing virus,DWV)cDNA均无交叉反应,HDA的最低检出限为10-2ng,检测试剂保存12个月后,仍可扩增出目的条带;37份临床样品中,有6份样品的RT-PCR和HDA结果为阳性,但电镜观察仅有4份为阳性。结论建立了CSBV HDA检测方法,该方法具有较高的敏感性、特异性及稳定性,为检测其他蜂病毒及快速鉴定其他动物病毒提供了参考。     

金葡菌疫苗的研究进展

金葡菌(Staphylococcus aureus,SA)是人体感染的常见病原菌,随着抗菌素的广泛使用,其耐药性也日趋严重,临床用药面临着严峻的挑战。20世纪60年代以来,人们不断尝试各种防治SA感染的免疫手段,到目前为止,虽尚未发现一种行之有效的免疫手段应用于临床,但在探索过程中,人们发现,免疫预防与治疗具有广阔的应用前景。本文对近年来SA疫苗的研究进展作一综述。     

金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是食品、人类化脓性感染的重要致病菌之一。本文对金黄色葡萄球菌的检测方法进行了综述,分析比较了各类方法的优缺点。     

Phenylboronic acid functionalized gold nanoparticles for highly sensitive detection of Staphylococcus aureus

Herein, we report a phenylboronic acid functionalized gold nanoparticle (GNP)-based colorimetric assay for rapid detection of Staphylococcus aureus (S. aureus) with high sensitivity. In this approach, GNPs can bind to S. aureus by the reaction of phenylboronic acid with the cis-diol configuration in glycans on the bacterial surface, providing a colorimetric readout of the binding event. Using this strategy, we have been able to quantify S. aureus at a concentration of 50 cells per mL (three times the standard deviation divided by the slope of the working curve) in aqueous solution.